Гибридомные клетки

Из разных способов клонирования наиболее широкое распространение получил метод предельных разведений, когда стремятся получить одну гибридомную клетку на ячейку платы с вероятностью в 63%, что следует из распределения Пуассона f(0) = е , где f(0) — число ячеек без роста, Я, — среднее число клонов на ячейку, е — основание натурального логарифма при Я,-1 значение f(0) [c.576]

Родительские миеломные клетки и сами гибридомные клетки могут храниться в жидком азоте в течение длительного времени (в течение 10 лет определенно). Процедура замораживания проста, но ее следует опробовать на родительских клетках до слияния. При замораживании используют специальную смесь. Поскольку смеси, пригодные для клеток других типов, в случае гибридом не работают, остановимся на следующем методе. [c.194]

Методы выявления антител, синтезируемых гибридомными клетками [c.111]

После отбора гибридомных клеток, синтезирующих интересующие исследователя антитела, можно приступить к их массовому наращиванию с целью получения больших количеств моноклональных антител. В начале культивирования гибридомные клетки могут расти медленно и плохо переносить низкую плотность посева. В связи с этим при пересеве клеток их надо разводить не более чем в 3—5 раз. Ускорению роста клеток может способствовать добавление клеток питающего слоя. Гибридомные клетки необходимо поддерживать в логарифмической фазе роста и избегать превышения концентрации клеток выше 0,5 млн/мл. Клетки можно культивировать как в стационарной культуре, так и в роллерной, а также в различного рода культиваторах (ферментерах). [c.117]

Для получения больших количеств антител вводят гибридомные клетки в организм животных и получают от них асцитную жидкость. Предварительно животным вводят агенты, повышаю- [c.117]

Помните, что необходимо отбирать для анализа супернатанты из лунок с хорошим ростом гибридом такая проба будет содержать оптимальное количество антител. Очень простой радиоиммунологический метод может быть использован для тестирования адекватных уровней антител в супернатантах и для повседневного контроля за образованием антител в лунках [13]. Особую ценность данный метод приобретает в том случае, если наблюдается рост в большом числе лунок, а скрининг супернатантов еще не дает положительных результатов. Обнаружение с помощью антиглобулиновых реагентов значительных титров антител означает, что чувствительность первичного скрининг-теста недостаточна и его необходимо усовершенствовать. Если выявляют мышиные иммуноглобулины в незначительной концентрации, то необходимо подождать, пока гибридомные клетки вырастут, а затем взять повторные пробы для скрининга. Можно сконцентрировать анализируемые супернатанты, хотя обычно в этом нет необходимости. [c.135]

Если гибридомные клетки выращивали в панелях для культуры тканей с объемом лунок 2 мл (процедура гибридизации Б), а клонирование проводили в мягком агаре, как описано выше, то в некоторых случаях необходимо было проанализировать большое число колоний, прежде чем удалось обнаружить антителообразующую колонию. По этой причине клонирование проводили в 96-луночных плоскодонных планшетах для микротитрования с помощью последовательных разведений клеточной взвеси. Преимущество такого подхода заключается в том, что образование антител единичными колониями, растущими в лун- [c.140]

Для достижения оптимального содержания антител в культуральной жидкости гибридомные клетки растят до высокой плотности (культуральная среда становится при этом желтой). Однако важно не допустить того, чтобы клетки росли до такой степени, чтобы возникла угроза снижения их жизнеспособности и наступила гибель клеток. Культуры гибридных клеток, содержащие высокий процент нежизнеспособных клеток, часто трудно восстановимы и их приходится выбрасывать. Культуральную жидкость собирают и затем центрифугируют при 500 в течение 5 мин для удаления клеток. Культуральную жидкость, собранную из нескольких флаконов с одной гибридомной линией и полностью освобожденную от клеток, сливают в чистые стеклянные бутыли. Чтобы запасти достаточное количество культуральной жидкости для собственных нужд и снабдить им других исследователей, авторы рекомендуют приготовить 500 мл культуральной жидкости, содержащей 0,1% азида натрия. Так, ее можно хранить при 4°С. Большинство антител в такой культуральной жидкости стабильно. Контролируя содержание антител ее можно использовать в течение нескольких лет. [c.145]

В противоположность суспензионным культурам клеток на микроносителях разработаны способы инкапсулирования их в полимерные сферы (полилизиновые, агарозные, из полимерных смол), когда клетки, по-существу, не испытывают того механического напряжения, которое они должны проявлять в свободном виде. Эти способы оказались выгодными для культивирования гибридом в целях получения моноклональных антител. Диаметр микрокапсул, размер пор в них и их толщина могут быть независимо проконтролированы в процессе изготовления и оптимизированы для конкретного типа гибридом. Например, согласно данным фирмы Damon Biote h (Германия) гибридомные клетки человека или животных вначале суспендируют в биосовместимом растворе [c.541]

Клонирование с помощью проточного цитофлуориметра. Д. Паркс с сотр. (1979) предложили модификацию проточного цитофлуориметра, позволяющую осуществлять клонирование индивидуальных клеток. Для этого приготавливают флуоресцентные микрошарики из латекса и покрывают их антигеном. Такие шарики адсорбируются на антигенспецифических гибридомных клетках, что позволяет выделять их на этом приборе. [c.110]

Кинетика роста. До появления бессывороточных сред закономерности роста животных клеток изучали на средах, содержахцих различные сыворотки. Позднее оказалось, что кинетика роста и биосинтез антител гибридомными клетками на бессывороточных средах и в средах, содержащих сыворотку, очень близки. На рис. 3.2 представлены характеристики роста гибридомных клеток грызунов и образования IgG на бессывороточной среде в эр-лифтном ферментере объемом 1000 л. Клетки росли с временем [c.42]

Обычно между 18-м и, 25- м днями супернатанты исследуют на антительну1Ю активность. К этому времени гибридомные клетки практически образуют монослой и среда имеет выра-жен ную желтую окраску. Это гарантирует, что супернатант содержит оптимальное количество антител для скрининга. Скрининг супернатантов из всех 48 лунок, включая и лунки, где не Наблюдается роста, имеет то преимущество,. что позволяет провести положительный отбо р на фоне остаточных антител. Чтобы определить, возрастает или снижается продукция антител данной отдельной культурой, целесообразно проводить последовательное тестирование содержания антител в супернатантах, отбираемых через каждые 2—3 дня. Снижение уровня антител может. быть связано как с проблемой остаточного фонового роста в данной лунке, так и с повышенной ростовой активностью несекретирующих гибридных клеток по сравнению с линией гибридомы. Трудно спасти антителосе кре-тирующие гибридомы из, лунок, где в супернатантах выявляется прогрессивное снижение, продукции антител. Кроме того, целесообразно попытаться клонировать отдельные клетки, но это не всегда приводит к желаемому результату. [c.132]

Перитонеалъные клетки получают от мышей разных штаммов [нгенность животных не является обязательным требованием при лборе донора питающих клеток. Не рекомендуется брать клетки животных, стимулированных к продукции макрофагов активиро-1нные макрофаги могут фагоцитировать гибридомные клетки. [c.197]

Культивирование гибридом in vivo. Другим подходом к накоплению антител является культивирование гибридом in vivo. При прививке сингенным мышам гибридомные клетки образуют опухоли. Опухолевые клетки растут частично в солидной, частично в асцитной форме. Концентрация антител в асцитной жидкости возрастает [c.202]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология