Вектор-затравка

В. Подготовка вектора-затравки [c.58]

Если гидролиз прошел полностью, то гидролизаты разделяют в 1,5%-ном препаративном агарозном геле и выделяют самый длинный фрагмент (который представляет собой вектор-затравку), вырезая полоску геля, содержащую нужную ДНК, и элюируя ДНК с помощью электрофореза в 0,5Х ТБЭ-буфере. [c.60]

Основной подход при получении линкеров такой же, как и при получении вектора-затравки. [c.61]

Вектор-затравка (см. разд. III, Б) мкг/мкл [c.63]

Вектор-затравка 1 мкг/мкл, 3 мкл (— 1,5 нмоль) [c.63]

Примечание. Наилучшее соотношение между вектором-затравкой и мРНК, которое обеспечивает наиболее эффективный отжиг, определяют в предварительных экспериментах. [c.63]

Примечание. Если размеры комплекса кДНК — вектор-затравка при разделении в щелочном геле (распределение по размерам) значительно меньше, чем при разделении в нейтральном, это свидетельствует о том, что реакция прошла не полностью и продукт кДНК не является полноразмерным. [c.64]

Готовят реакционную смесь, содержащую кДНК — вектор-затравку в количестве, предварительно определенном в модельной реакционной смеси с гидролизатом pBR322 — ЯшсП. Рекомендуется также провести предварительную реакцию для оценки длины oligo(dN)-концевых последовательностей, присоединяемых к известному количеству ДНК в аналогичных условиях. [c.65]

Примечание. В начальный момент инкубации отбирают две аликвоты по 2 мкл и наносят их на диски фильтров ОЕ82. Процедуры аналогичны тем, которые описаны в разд. 1П, В, 2, в. После получения нужной длины ol go(dN)-концевой последовательности (15 бС-нуклеотидов/конец) комплекс кДНК — вектор затравка в реакционной смеси для ТдН-транс( )еразы гидролизуют рестриктазой НтА аналогично тому, как описано на стадии 1П, В, 2, г (см. следующий этап — разд. П1, Д, 3, в). [c.66]

В реакционной смеси, состав которой приведен ниже, проводят отжиг комплекса кДНК — вектор-затравка и линкера с digo (dG) -концевой последовательностью. [c.67]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология