Агароза в методе бляшек

Примерно через 6 ч проявите пленку, экспонированную с фильтром II. Выявите бляшки, соответствующие гибридизации. Отберите их уколом и приготовьте препараты фага на чашках. Используйте чашки с агарозой и следуйте методике 11-П быстрого выделения фаговой ДНК. Выращивайте по одной чашке каждого фага (от одного до шести). После выращивания в течение 6 ч налейте на чашку 5 мл среды для разведения фага Я"и инкубируйте при 5°С в течение 2—12 ч. Если позволит время, то, используя быстрый метод, выделите ДНК из этих препаратов фага. [c.48]

Хотя во всех описанных ниже методах в качестве тест-культуры взяты клетки Vero, однако можно использовать с этой целью ВНК-21, LL MK2, РК15 и другие линии клеток млекопитающих. Первый метод оптимален при исследовании большого числа образцов его легко адаптировать для работы с микропланшетами для титрования, как описано здесь, или с планшетами или чашками большего размера, например для определения морфологии бляшек. В этом случае для титрования используют карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ). Далее описан еще один метод, предполагающий использование агарозы и окрашивание клеток нейтральным красным. Он особенно полезен при работе с вирусными клонами, когда необходимо, чтобы бляшки содержали инфекционный вирус. [c.85]

Описаны различные модификации метода бляшек с использованием суспензии клеток в агарозе или агарового покрытия [16, 18]. Один из этих методов разработан для медленно размножающегося вируса бешенства [19]. Сублиния клеток ЗНК-21 (клон 13S) была адаптирована к росту в суспензионной культуре в присутствии агарозы в течение 1,5—2 нед [20] (эти клетки способны расти как в монослое, так и в суспензионной культуре на среде МЕМ-10). Клетки, хранящиеся в жидком азоте, сначала выращивают в виде монослоя, а затем пассируют путем регулярной трипсинизации. Размороженные клетки проходят около 30 пассажей. После этого их способность давать бляшки может нарушиться. [c.118]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология