Антитела мостиковые

Проблему коротких замыканий между мостиковыми и первичными антителами (тип Г) можно разрешить, пользуясь тем же подходом, который был использован для устранения побочных взаимодействий с носителем. Для этого мостиковые [c.216]

Козьи мостиковые антиглобулины, используемые в сочетании с кроличьими антителами, специфичными к тяжелым цепям, и кроличьими антителами против щелочной фосфатазы, подвергали очистке только в случае возникновения проблемы так называемого короткого замыкания (см. разд. II.В.1). Мостиковые антитела для использования в сочетании с антиглобулинами морской свинки получали иммунизацией кроликов препаратами IgG морской свинки. [c.212]

Коммерческие препараты. По нашим наблюдениям все коммерческие препараты (за исключением мостиковых антител, от которых не требуется проявления высокой изотипической специфичности) характеризуются а) недостаточно высокой специфичностью и б) чрезвычайно низким содержанием антител, т. е. недостаточно высоким титром. Поэтому мы предпочитае.м получать необходимые препараты самостоятельно. [c.213]

Весьма часто приходится сталкиваться с таким типом замыкания , при котором первичные антитела узнают носитель в составе комплекса [гаптен — носитель] (тип А). Нам удается преодолеть эту проблему благодаря использованию альбумина, выделенного из организма — донора первичных антител, в качестве носителя для гаптена. При этом ни в одном из препаратов мы ни разу не обнаружили присутствия антител к гомологичному альбумину. Для решения проблем, связанных с замыканием типа [антиген — изотип-специфический антиглобулин] (тип Б) или [антиген — мостиковые антитела] (тип В), необходимо проводить адсорбционную очистку антиглобулинов. Часто приходится сталкиваться с побочным узнаванием человеческого IgG мостиковыми козьими антителами против кроличьих иммуноглобулинов. Для предотвращения взаимодействий такого типа необходимо провести аффинную очистку мостиковых антител на колонке с иммобилизованным человеческим IgG. [c.216]

Для оценки реального вклада коротких замыканий проводят адсорбцию непосредственно на носителе тех компонентов, которые могут служить мишенью для побочных взаимодействий, а затем последовательно добавляют остальные компоненты тест-системы. Например, для проверки возможности прямого узнавания антигена изотип-специфическими агентами ( замыкание типа А) раствор первичных антител в анализе заменяют буфером. Для того чтобы установить, происходит ли прямое взаимодействие между мостиковыми и первичными антителами ( замыкание типа Г), иммуноглобулины того же класса и из того же вида, что и первичная антисыворотка, адсорбируют непосредственно на подложке и завершают реакцию, добавляя все оставшиеся компоненты (в случае a-ELISA это мостиковые антиглобулины, ИФК и субстрат щелочной фосфатазы). [c.217]

Для титрования изотип-специфических антиглобулинов используют мостиковые антитела и ИФК в разведениях около 1 500 и 1 100 соответственно (т. е. в их обычной или несколько более высокой концентрации). Разведение изотип-специфических антиглобулинов можно варьировать в диапазоне 1 250— 1 4000. Результаты титрования оценивают по а) наклону кривой титрования, б) значению A4015 спустя 1 ч после инкубации и в) возможностям экономии реагента. При этом стремятся выбрать максимальное разведение, обеспечивающее достаточно высокую чувствительность (по А405). и иметь на кривой титрования достаточно протяженный линейный участок с наклоном в области 0,9—1,0. Для большинства изотип-специфических агентов это, как правило, разведение 1 1000 или 1 2000. [c.219]

Аналогичное тестирование ИФК в диапазоне разведений 1 500— 1 8000 проводят с использованием подобранных оптимальных разведений изотип-специфических антиглобулинов и, мостиковых антител. И в этом случае выбор оптимального разведения ИФК основывается на той же совокупности критериев. Мы, как правило, работали с разведениями препаратов ИФК 1 1000 и 1 2000. [c.220]

I. Последовательность реакций и времена инкубации. После инкубации с первичными антителами в течение ночи при 4 С платы промывают (разд. III.В.2) и обрабатывают раствором изотип-специфических антиглобулинов с разведением 1 500— 1 2000. Для равномерного распределения реагентов по всем лункам удобно использовать многоканальные пипетки (типа Titertek , Flow). Платы инкубируют со встряхиванием 2 ч при комнатной температуре, промывают и обрабатывают раствором мостиковых антител в разведении 1 500—1 4000 (о титрова-НИИ реагентов для анализа см. разд. II.В.3). После инкубации в тех же условиях, что и на предыдущей стадии, платы промывают и добавляют раствор ИФК в разведении 1 1000 или 1 2000. Было замечено, что при инкубации с ИФК в течение ночи при А°С чувствительность измерений повышается. Такой режим работы очень удобен, поскольку позволяет лаборанту [c.224]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология