Полужидкие гели агарозы

Широкое распросфанение получили реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы — двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуно-элекфофорез и др. [c.178]

Для фракционирования по размерам очень высокомолекулярных ДНК с молекулярной массой до ПО млн. Север использовал гели агарозы малой концентрации (вплоть до 0,1%). Такие гели являются полужидкими по своей консистенции и могут быть использованы только в варианте горизонтального электрофореза. На стеклянной пластине сначала заливают рамку из 1,5%-ной агарозы, которую затем заполняют агарозой малой концентрации [Sewer, 1980]. В то время как скорость миграции двунитевой линейной ДНК в свободной жидкости не зависит от ее-молекулярной массы (ввиду постоянства отношения заряда к линейному размеру), электрофорез в гелях агарозы малой концентрации обнаруживает эффект значительного трения ДНК о гель. Даже для ДНК с Л1 = 2 млн. скорость миграции увеличивается в 1,5 раза при переходе от 0,57о-ной агарозы к 0,1%-ной, а для ДНК с М=25 млн. это увеличение оказывается шестикратным, причем в 0,1%-ной агарозе такая ДНК мигрирует еще вдвое медленнее, чем в свободной жидкости. [c.122]

Приготовление геля. Фракционирование РНК проводят в 2,2%-ном полиакриламидном геле (поскольку полиакриламидный гель данной концентрации имеет полужидкую консистенцию, рекомендуется сначала сделать пробку из геля более высокой концентрации или 1%-ной агарозы трубки можно закрыть снизу целлофановой пленкой). К смеси 2,2 г акриламида и 0,12 г метиленбисакриламида добавляют 33 мл трис-ацетатного буфера pH 7,8, 50 мл прокипяченной Н2О, 0,075 мл ТЕМЕД, 16 мл 0,5%-ного раствора персульфата аммония. Смесь осторожно перемешивают и заливают для полимеризации в кассету или трубочки электрофоретической камеры (с. 94). Сверху наслаивают трис-ацетатный буфер, разведенный в 3 раза (электродный буфер). [c.173]

Для растворения бактоагара (Dif o) стеклянную бутылочку или колбу Эрленмейера, содержащую 50 мл трижды дистиллированной воды и 1,5 г агара, помещают в кипящую водяную баню. Агар расплавляется за 10—15 мин, после чего раствор можно поддерживать в горячем состоянии на едва кипящей бане в течение нескольких часов и повторно использовать в течение дня. При нагревании над открытым пламенем раствор агара можно приготовить быстрее, однако это следует делать осторожно, непрерывно вращая сосуд с раствором, чтобы агар расплавлялся полностью (доводить до кипения трижды), а потери материала из-за выкипания были минимальными. В обоих случаях рекомендуется использовать склянки с неплотно закрытыми крышками. Как показали Кинкейд и др. (Kin ade et al., 1976), в агаре присутствуют митогены, необходимые для пролиферации В-клеток в полужидкой среде. Другие полужидкие среды на основе метилцеллюлозы или агарозы проявляют митогенный эффект только при добавлении к ним экстракта агара. Мы не нашли больших отличий в способности разных партий агара поддерживать рост колоний В-клеток или колоний, возникающих из предшественников В-клеток, но обнаружили зависящие от партии агара небольшие вариации в консистенции образующегося агарового геля. Это несущественно для выявления колоний с помощью стереомикроскопа, но [c.256]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология