Плазмиды с двумя селективными маркерами

Два селективных маркера. При наличии двух селективных маркеров в плазмидном векторе можно провести отбор среди трех типов клеток (рис. 5.2) нетрансфицированных, получивших неизмененную плазмиду или приобретших рекомбинантную плазмиду. Этот принцип отбора представлен на рис. 5.4, где используются два селективных маркера гены устойчивости к антибиотикам тетрациклину и хлорамфениколу. Отбор основьшается на индуцируемом вставкой нарушении, приводящем к инактивации только одного из маркированных генов. В приведенном случае нарушение произошло в гене резистентности к тетрациклину. Только те клетки, которые содержат рекомбинантную плазмиду, растут в присутствии хлорамфеникол а и не способны расти в присутствии тетрациклина. [c.233]

Известно два основных нути желаемая структура может быть образована в один этап, нанример, в результате рекомбинации в пределах короткого района гомологии — при введении последовательностей, содержащихся в селекционной плазмиде, в специфический участок космидного клона (рис. 3.3). Примером может служить подстановка энхансерных или промоторных последовательностей в участок, предшествующий гену, введение селективных маркеров или индикаторных генов (устойчивости к неомицину, хлорамфеникол-ацетилтрансферазы, р-га-лактозидазы) под контроль промотора, который несет космида, или создание случайных составных сегментов, образованных гомологичными генами, принадлежащими космиде и плазмиде. При необходимости может быть использован перенос в клетки-хозяева, непермиссивные для репликации одного из этих компонентов, что позволяет элиминировать независимо реплицирующиеся плазмиды, возникающие в результате вторичных рекомбинационных событий. Сходным образом селекционные плазмиды с последовательностями, гомологичными космидному вектору, используют для введения специфических последовательностей (например, маркеров, селектируемых в эукариоти- [c.85]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология