Селективное введение трития

С-концевые аминокислоты пептидов или белков можно определить при помощи химических или ферментативных методов. Химические методы включают гидразинолиз, селективное введение трития, избирательное восстановление, образование альдегидов, алкоголиз оксазолов в кислой среде, тиоцианатное или цианамидное расщепление. При ферментативном определении используют карбоксипептидазы. Этот подход в последние годы [c.487]

Селективное введение трития [c.488]

Среди химических методов определения С-концевих аминокислот к простейшим относится селективное введение трития. Это г метод обладает высокой чувствительностью, проводится с использованием легко доступных реагентов, при очень мягких условиях. После введения тритиевой метки избыточные атомы удаляются путем повторения чередующихся операций добавления—упаривания воды. Затем проводят гидролиз 6 М соляной кислотой (метансульфоновой кислотой, если предполагается определение Тгр [78]) далее аминокислоты разделяют обычными методами пептидного картирования и определяют радиоактивность в жидкостном сцинтилляционном счетчике. Первоначально этот метод был качественным [57], однако п настоящее время возможно количественное определе1ше трития. [c.488]

Селективное введение трития включает три последовательные реакции (рис. 18.3). В основе методики лежит различие в химической активности карбоксилов С-концевой аминокислоты и боковых цепей. С-Концевой карбоксил уникален, так как его можно активировать путем образования оксазолинона (внутримолекулярное взаимодействие с соседней по цепи пептидной связью, происходящее с выделением воды) [69]. Эта реакция проходит при участии уксусного ангидрида. Образующийся при этом оксазолинон содержит активный атом водорода, который легко замещается на тритий при обработке Ш2О в присутствии пиридина. Оксазолинон претерпевает катализируемую основанием рацемизацию, сопровождаемую гидролитическим раскрытием кольца и регенерацией С-концевой аминокислоты, содержащей атом трития при сх-углероде. [c.488]

Вторая методика была разработана для селективного введения трития в С-концевые остатки Pro и Asp [60]. В вышеуказанных условиях эти аминокислоты не образуют оксазолиноны, но дают либо смешанный ангидрид (Pro), либо циклический ангидрид (Asp). При обработке пиридином и эти ангидриды не включают метку, но их можно метить дейтериро-ванной уксусной кислотой. Методика включения метки в Pro и Asp при П0М0Ш.И кислотного катализа была упрощена до одностадийной и заключалась в обработке пептида смесью уксусного ангидрида и Ш2О. [c.490]

К числу наиболее удобных и широко применяемых методов специфического введения трития относится восстановление альдегидов, кетонов или лактонов боргидридом-ОД натрия. С появлением новых методов селективного окисления сахаров указанные оксопроизводные стали легкодоступными соединениями [1]. Продукты восстановления выделяют методом препаративной ТСХ (см. гл. 8), бумажной хроматографии или ферментативными методами [2], после чего полученные соединения разбавляют неактивными аналогами, чтобы активность препаратов соответствовала требуемой. Иногда наблюдается преимущественное образование одного из возможных изомеров. Так, восстановление 1,2 5,6-ди-О-изопропилиден-а-о-рмбо-гексофуран-З-улозы боргидридом- Н натрия приводит к о-алло-соед.шению, выход которого превышает 98% [3] (см. [c.375]

Очевидно, что при селективном гидрировании одной из нескольких двойных связей возможны два случая. Первый, когда скорости их гидрирования достаточно различаются и можно, например, прогидрировать тритием двойную связь олеинового фрагмента в холестерилолеате, не затронув двойную связь в холестериновом фрагменте (табл. 19.1.11), т.е. исследователю необходимо подобрать условия, при которых эти различия в скоростях гидрирования будут максимальны [5]. Второй, когда необходимо введение соответствующих защитных групп для создания требуемой селективности гидрирования определённой двойной связи (табл. 19.1.11, рис. 19.1.3) [71]. [c.503]