Плазмида мобилизация

Конъюгация все чаще применяется при конструировании промышленных штаммов микроорганизмов. Используя этот метод, можно легко получать генетические рекомбинанты, проводить мобилизацию неконъюгативных плазмид, создавать гибридные (коинтегративные) плазмиды, объединять различные плазмиды в одной клетке. [c.93]

Неконъюгативные плазмиды не содержат детерминантов, придающих бактериальным клеткам свойства генетических доноров, и поэтому они не способны самостоятельно передаваться от одних клеток к другим. Однако такие плазмиды могут быть перенесены в реципиентные клетки с помощью конъюгативных плазмид. Перенос неконъюгативных плазмид конъюгативными называется мобилизацией. При этом неконъюгативная плазмида является мобилизуемой, а конъюгативная — мобилизующей. [c.90]

Генетические способы отбора требуют значительно меньших затрат труда, чем методы скрининга, что позволило разработать новые подходы, позволяющие проводить генетическую селекцию клонов, содержащих последовательности, гомологичные любой желаемой последовательности-зонду. Это дало возможность расширить применение этого метода, распространив его на задачи, обычно решаемые с помощью более трудоемких (и часто менее специфичных) методов скрининга. В общих чертах в основе всех этих подходов лежит следующее обстоятельство хотя в случае большинства специфических эукариотических последовательностей нельзя обеспечить генетическую селекцию в клетках Е. соИ, можно сконструировать пары векторов, позволяющие селектировать продукты гомологичной рекомбинации, обусловленной гомологией последовательностей между клонами. Такая селекция основана на том факте, что процессы, подобные репликации ДНК, транскрипции, мобилизации плазмид или упаковке ДНК в фаговые частицы, могут происходить только по is-схеме в отношении соответствующего регуляторного элемента (области начала репликации, промотора, сигнала мобилизации или упаковки). Чтобы исключить рекомбинацию между векторными последовательностями, нужно подбирать векторные пары, не обладающие взаимной гомологией (или в случае рекомбинации фагов без взаимной гомологии в пределах той области, которая определяется маркерами, используемыми для селекции). Соблюдение этого главного принципа лежит в основе и скрининга фаговых клонов с использованием рекомбинации между [c.77]

Мобилизация (Mobilization) Передача от одной бактериальной клетки другой хромосомных генов либо не-конъюгативных плазмид с участием конъюгативных плазмид. [c.553]

Образование коинтегратов может происходить за счет гес А-зависимой реиипрокной рекомбинации по участкам гомологии между плазмидами (репликонами). Такие участки могут создаваться, в частности, перемещающимися генетическими элементами (IS-элементами и транспозонами). Если только один из двух репликонов несет в своем составе IS-элемент или транспозон, то между ними может образоваться коинтеграт как промежуточный продукт транспозиции (см. 5 гл. 2 и рис. 16). В этом случае процесс мобилизации, так же как и процесс транспозиции, является гесА-независимым. Иногда образующиеся коинтеграты могут быть довольно стабильны. [c.90]

Недавно создана, по-видимому, универсальная система для конъюгационного переноса генов различных грамотрицательных бактерий. В транспозон Тп5 с помощью методов генетической инженерии был вставлен гпоЬ-сайт плазмиды RP4. Используя обычную технику транспозонного мутагенеза, новый транспозон может быть внедрен в хромосому или криптические плазмиды различных грамотрицательных бактерий. Репликоны клетки-хозяина могут быть мобилизованы, если обеспечена в трансположении Тга-функция RP4. С помощью Тп5-гпоЬ-опосредованного переноса можно осуществлять эксперименты по картированию генов, вероятно, любого вида грамотрицательных бактерий. Кроме того, этот транспозон позволяет метить всевозможные криптические плазмиды с помощью селектируемого маркера устойчивости к канамицину и осуществлять мобилизацию их с высокой частотой в другие штаммы (R. Simon, 1985). [c.114]

JOT две системы конъюгации — первая для промежуточных векторов на основе репликона olEI, используемых в сочетании с векторами коинтегративиого типа, и вторая для репликона rK2, на основе которого сконструированы многие бинарные векторы. Для обеспечения функций мобилизации (mob) и переноса ira), действующих в транс-положении, используют плазмиды-помощники конъюгации ( хелперные плазмиды), специфичные для репликонов обоих типов, либо на отдельных реп-ликонах, либо интегрированные с хромосомой в специальных хозяйских штаммах агробактерий [36]. Для того чтобы система конъюгации функционировала, клонирующие векторы должны содержать специфичное начало переноса ( ориджин — опТ) и сайт активации bom), на которые действуют продукты генов tra и mob. [c.73]

В большинстве клонирующих векторов бинарных систем используют начало репликации RK2 и для их конъюгационного переноса обычно используют функции помощника плазмиды PRK2013 [18]. Мобилизация и в этом случае иногда проводится с помощью двух двухродительских скрещиваний, а чаще — с помощью одного трехродительского скрещивания. Частота мобилизации обычно составляет около 10 —10 и, следовательно, более эффективна, чем частота, достигаемая для репли- [c.73]

Мобилизация неконъюгативных плазмид широко используется в практике генетических экспериментов. Этот метод менее трудоемок, чем трансформация и, кроме того, позволяет вводить не-конъюгативные плазмиды в клетки микроорганизмов, для которых не разработаны системы трансформации. [c.187]

Детальное описание экспериментов, основанных на конъюгации, для генетического анализа у бактерий можно найти в ряде руководств (см. список литературы). В данном пособии мы приводим общую методику постановки конъюгации скрещиваний на примере мобилизации неконъюгативной плазмиды RSF1010 конъюгативной плазмидой RP1. [c.187]

Мобилизация. Многие неконъюгативные плазмиды обладают свойством мобилизации, т. е. способностью переноситься в другие [c.68]

Перенос бактериального фрагмента ДНК конъюгативной плазмидой возможен и в том случае, когда между ними нет стабильной связи. Например, F-плазмида при конъюгации переносит с частотой около 10 5 любой бактериальный ген в реципиентную клетку, где он интегрируется в ДНК реципиента с помощью Re A-зависи-мой рекомбинации и в плазмиде не присутствует. Это явление, получивщее название мобилизации хромосомы, осуществляется благодаря Re F-зависимой рекомбинации. [c.82]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология