Перенос из бактериальных колоний

Перенос бактериальных колоний на НЦФ и матричную чашку осуществляйте уколом по шаблону уголком полоски бумаги (можно использовать оба уголка полоски). [c.31]

Из приготовленных пробирок -с разведениями 10 , 10 и 10 делают параллельные высевы (нз каждой пробирки) на шесть чашек Петри со стерильной питательной средой (МПА). Для этого стерильной пипеткой у пламени горелки отбирают 0,5 мл раствора и переносят на поверхность среды в чашки Петри, тщательно распределяя его по всей поверхности. Засеянную среду помещают в термостат при температуре 37° С на 24 и 48 ч. Через 24 ч подсчитывают количество выросших бактериальных колоний. [c.283]

Рекомбинантные клоны могут быть идентифицированы и по синтезируемому ими продукту. Но чаще приходится идентифицировать непосредственно нуклеотидную вставку с использованием методов гибридизации. С этой целью бактериальные колонии выращивают на нитроцеллюлозных фильтрах, помещенных на чашку Петри с питательной средой. Далее приготовляют реплики к фильтру с исходными колониями прижимают свежий нитроцел-люлозный фильтр, который затем переносят на чашку Петри с плотной питательной средой, где образуются колонии, идентичные первым. [c.121]

Определение общего числа бактерий. Приготовленный раствор (суспензию, эмульсию) образца вносят по I мл в каждую из двух пробирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до температуры от 45 до 50 °С среды № 1. Быстро перемешивают содержимое пробирки и переносят в чашку Петри, содержащую 15—20 мл застывшей питательной среды № 1. Быстрым покачиванием чашки Петри равномерно распределяют верхний слой агара. После застывания среды чашки переворачивают и инкубируют в течение 5 сут при температуре от 30 до 35 °С. Через 48 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают число бактериальных колоний на двух чашках, находят среднее значение и, умножая [c.196]

Их пересевают на твердую питательную среду, на чашку Петри с агаром. На сей раз питательная среда содержит все 20 аминокислот полноценная среда), поэтому здесь хорошо растут все нуждающиеся в аминокислотах мутанты. Уже на следующий день можно различить невооруженным глазом точечные или дисковидные колонии. Теперь берут самый настоящий штамп (круглый), который точно соответствует по диаметру поверхности чашки Петри его штемпельная поверхность затянута стерильным куском бархата. Поверхность агара, покрытая колониями, используется как штемпельная подушка, причем на ворсинках бархата застревает по нескольку клеток из каждой бактериальной колонии. Вслед за этим ставят отпечаток на новой стерильной агаровой пластинке приставшие к бархатному штампу бактерии переносятся таким образом на новый агар, попадая при этом па место, которое точно соответствует месту [c.168]

Самыми распространенными методами непрямого выявления таких мутантов являются случайный поиск соответствующих колоний и метод перепечатывания колоний с одной чашки на другую (метод отпечатков). Оба метода требуют проверки большого числа бактериальных колоний. По существу, эти методы отличаются только способом осуществления этой проверки. В методе случайного поиска одномоментно со среды на среду переносится одна колония — пока не обнаружится вызванное мутацией нарушение. Это утомительная и требующая больших затрат времени процедура. Поэтому иногда такой метод называют подходом в лоб . Один из способов повышения вероятности выявления нужного мутанта в лоб этим методом — использование в цач - [c.35]

III. Перенос из бактериальных колоний [c.120]

С помощью раскаленной и охлажденной микробиологической петли (ее нагревают в пламени горелки до ярко-крас-ного цвета, а затем дают остыть до комнатной температуры) переносят отдельную бактериальную колонию со свежей чашки, содержащей селективные антибиотики, в пробирку с 5 мл NB, содержащей те же антибиотики. [c.40]

Переносят эксплантаты на твердую питательную среду, например MSO (30—100 эксплантатов на чашку), и инкубируют (25 °С) при низкой освещенности (2000—4000 люкс) в течение 2—6 дней либо до тех пор, пока не начнут появляться бактериальные колонии. [c.112]

После инкубации с агробактериями В течение 2 сут или при появлении видимых бактериальных колоний переносят инокулированные кусочки листа на следующие среды ) (одна для каждого штамма) [c.123]

А. Перенос на фильтры небольшого количества бактериальных колоний / [c.31]

Б. Перенос на фильт ы большого количества бактериальных колоний [c.32]

A. Перенос на фильтры небольшого количества бактериальных колоний. ...................................31 [c.65]

Другое назначение мембран из нитроцеллюлозы применительно к технологии рекомбинантных ДНК заключается в обнаружении молекул специфической ДНК в бактериальных колониях, выращиваемых в чашках с агаром (рис. 11.14). С помощью соответствующего раствора ДНК освобождается из бактериальных колоний или вирусных бляшек. Затем над колониями помещают листовую мембрану из нитроцеллюлозы, и некоторое количество свободной ДНК переносится на мембрану. При использовании в виде зондов радиоактивных РНК и ДНК точное расположение на мембране искомой ДНК определяется гибридизацией и последующей авторадиографией. Соответствующая колония на исходной чашке после этого переносится для дальнейшего изучения. [c.325]

Идентификация клонов. Если вставка содержит гены, способные к экспрессии в новом хозяине, рекомбинантные клоны могут быть идентифицированы по синтезируемому ими продукту. Однако чаще приходится идентифицировать непосредственно нуклеотидную вставку, для чего используют методы гибридизации. Бактериальные (нлн фаговые) колонии выращиваются на нитроцеллюлозных фильтрах, помещенных на чашку Петри с питательной средой (рис. 253). После этого приготавливаются так называемые реплики — к фильтру с исходными колониями прижимается свежий нитроцеллюлозный фильтр, который затем переносится на чашку Петри с плотной питательной средой, где на нем образуются колонии, идентичные первым. [c.436]

При наличии микробиологической лаборатории можно поступить следующим образом очищенную жидкость засеивают на твердую мясопептонную среду, обычно на 3—4 чашки Петри, и ставят в термостат при температуре 20—30° С. Через двое суток развившиеся колонии снимают бактериологической петлей и переносят в стаканчик с разводящей водой, где колонии тщательно разбиваются, образуя гомогенную бактериальную взвесь. Взвесь фильтруют через бумажный фильтр, чтобы освободить от комочков, затем фильтрат переносят в бутыль с разводящей водой. [c.20]

Посев при помощи суспензии микроорганизмов или спор. К зрелым, прошедшим обильное спорообразование культурам, находящимся в пробирках, наливают на наклонную поверхность агаровой питательной среды мл стерильной воды. Бактериальной петлей проводят по поверхности колонии, чтобы споры попали в воду. Приготовленную таким образом суспензию вливают в пустую эрленмейеровскую колбу. Для посева из водной суспензии применяют стерильную пипетку, с помощью которой нужное количество суспензии переносят в жидкую питательную среду или на агаровый субстрат в чашках Петри. [c.29]

Метод Гансена. Образец культуры для посева вносят в стерильную воду. После этого несколько капель этой смеси переносят в маленькую колбочку с расплавленной агаровой питательной средой. Содержимое колбочки тщательно перемешивают, чтобы клетки правильно распределились, а затем одну каплю субстрата рассматривают под микроскопом. Если содержание клеток в ней достаточное (20—30), то каплю стерильного субстрата вносят во влажную камеру. Если клеток слишком много, необходимо добавить воды. Влажную камеру выдерживают при 20—25° С. Под микроскопом наблюдают разрастание клеток. Из числа выросших колоний осторожно бактериальной петлей отбирают их из отмеченных мест и переносят на питательную среду. [c.32]

В этом случае для измерения количества препарата, осевшего на единицу площади, при обработке с самолетов или высокопроизводительными наземными опрыскивателями и опыливателями применяют не токсикологические, а биологические методы учета. Так, например, при испытании бактериальных препаратов на обрабатываемой площади перед опрыскиванием или опыливанием выставляют открытые чашки Петри или предметные стекла, залитые агаром, которые затем переносят в термостат и по числу колоний бактерий определяют плотность покрытия препаратом. [c.59]

Достаньте чашки из термостата. (Стерильным пинцетом поместите бумажный диск на поверхность агара с колониями и быстро прижмите его пинцетом по всей площади. Намокание диска должно быть равномерным и одновременным во избежание его деформаций, препятствующих нормальному переносу бактериальных колоний. Следите за тем, чтобы между агаром и диском не было пузьфьков воздуха. [c.32]

Этот вариант скрининга обусловлен низким выходом интересующего рекомбинантного клона. Высев колоний в этом случае можно производить до нескольких десятков тысяч на 90-мИ чашку (лучше не более 30 ООО). Вместо нитроцеллюлозы для переноса бактериальных клонов лучше использовать бумагу Whatman 542 (или 540, 541), так как в этом случае не требуется исключительных навыков по одергиванию колоний с агара и, в отличие от НЦФ, не возникает проблем с неполным или неравномерным отпечатыванием колоний на фильтре. Гибридизацию зовда с ДНК, иммобилизованной на бумажных фильтрах щюводят гак же, как и в случае с НЦФ (см. далее). [c.32]

Для выявления конкретных последовательностей нуклеотидов в клонотеках генов рекомбинантные бактерии или фаги рас-севают на чашках Петри и образовавшиеся колонии или бляшки переносят на нитроцеллюлозные или нейлоновые фильтры [235, 236]. Для этого стерильные фильтры накладывают на поверхность чашек, в результате чего часть бактериальных клеток или фаговых частиц прочно связывается с поверхностью фильтров. Расположение их на фильтрах и поверхности чашек Петри точно совпадает. Бактериальные клетки или фаговые частицы, сорбированные на фильтрах, лизируют щелочью, что сопровождается одновременной денатурацией заключенной в них ДНК. Освободившуюся ДНК фиксируют на фильтрах и гибридизуют с меченым олигонуклеотидным зондом, последовательность нуклеотидов которого точно соответствует последовательности нуклеотидов искомой ДНК. В результате гибридизации происходит специфическое прочное связывание зонда с идентичными и/или гомологичными последовательностями нуклеотидов в ДНК, содержащейся в отдельных бактериальных колониях или бляшках. [c.163]

A. Bee колонии появились только в результате встраивания ТпЮ в бактериальный геном, потому что выживание зависит от присутствия гена устойчивости к тетрациклину, переносимого ТпЮ. Наличие смешанных колоний с синими и белыми секторами-это ключевой результат. Поскольку частота встречаемости секторных колоний высока, а транспозиция-это редкое событие, то секторные колонии должны возникать в основном при единичной транспозиции. В случае репликативного механизма может переноситься только одна цепь родительского гетеродуплекса и, таким образом, могут образовываться только белые или синие колонии в зависимости от того, какая из цепей переносится. При нерепликативном способе, напротив, переносятся обе цепи гетеродуплекса, и в результате репликации и сегрегации в дочерних клетках бактерий они дают начало секторным колониям. (Если исходно бактерии были распределены по поверхности агаровой среды в чашке Петри, то все потомки первоначальной инфицированной клетки, оставаясь в непосредственном контакте друг с другом, образуют колонию. Если при первом делении образуются две разные дочерние клетки, то их потомки размножаются рядом, создавая единую колонию, но с секторами, образуемыми двумя вариантами бактерий.) Чисто синие и чисто белые колонии возникают в результате транспозиций, в которых участвуют гомодуплексы. Количественное соотнощение синих, белых и секторных колоний определяется тем, что гетеродуплексы (дающие начало секторным колониям) и гомодуплексы (дающие начало колониям одного цвета) содержались в смеси в равных количествах. [c.305]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология