Нанесение нуклеиновых кислот на колонку

Нанесение нуклеиновых кислот на колонку [c.118]

На колонки с нитроцеллюлозой обычным образом наносят нуклеиновые кислоты в 0,01 М 7 /)ис-буфере (pH 7,3), содержащем 0,5 М КС1. (Концентрация КС1 в этих растворах может быть несколько выше или ниже.) После нанесения образца колонку промывают ио крайней мере двумя объемами солевого раствора для удаления неадсорбировавшегося материала. Адсорбированные нитроцеллюлозой нуклеиновые кислоты элюируют с колонки 0,01 М т /)ис-буфером с pH 7,3 или дистиллированной водой. Выход нуклеиновых кислот составляет от 80 до 100%. [c.126]

После нанесения нуклеиновых кислот все примеси радиоактивного ортофосфата можно удалить с колонки, промывая ее 50 мл или несколько большим количеством 0,1—0,2 М забуференного солевого раствора. Элюирование нуклеиновых кислот можно начать, пропустив сначала 50 мл 0,4 забуференного солевого раствора, а затем элюировать градиентом концентрации забуференной соли от 0,4 М до 1,0 М (по 150 мл каждого раствора). Нри этом разделяются тРНК, ДНК, рРПК и меченая нРПК (фиг. 3). [c.120]

На основании этих данных строят график хроматографического опыта. На горизонтальной оси откладывают номера фракций или объем элюируемой жидкости, а на вертикальной оси — вышеуказанные характеристики фракций На графике также строят кривую нарастания концентрации (градиент) соли. Для качественной и количеств вейной оценки этого этапа очистки необходимо иметь характеристики исходной вируссодержащей жидкости до нанесения на колонку. На основании этих данных рассчитывают эффективность концентрирования и очистки виру-са на обменнике нроцент выхода вируса и процент очист-ки его по белку и нуклеиновой кислоте (см. раздел Кри терии чистоты вирусных препаратов ). [c.115]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология