Раствор акриламида нанесения образцов на гел

Соответствующее количество смешанной с водой агарозы кипятят с обратным холодильником, интенсивно перемешивая, при 100 °С в течение 15 мин. Затем раствор охлаждают до 40 °С водой с температурой 30 °С (для предотвращения локального переохлаждения). Исходные растворы буфера, катализатора и акриламида смешивают в соответствующих пропорциях, смесь подогревают до 35°С и к ней добавляют расплавленную агарозу до конечной концентрации 0,5%. После добавления персульфата смесь быстро наливают в форму и охлаждают до 20 °С. Затем в соответствующее место вставляют охлажденную на льду гребенку для формирования лунок и раствор оставляют примерно на 1 ч для полимеризации. Перед нанесением образца рекомендуется провести предварительный электрофорез для удаления остатков персульфата. Пикок и Дингман [984] использовали раствор мономеров, содержавший акриламид и быс-акриламид в соотношении 19 1, а также ДМАПН в качестве катализатора (конечная концентрация 0,4%) и персульфат аммония (0,05%). Последний обеспечивал образование геля с нужными свойствами и медленную полимеризацию акриламида. [c.381]

Электрофорез проводят в соответствии с оригинальной методикой Леммли (Laemmli, 1970). Градиентные гели с концентрациями акриламида 7—15% готовят, заливая соответствующие растворы между двумя стеклянными пластинами с помощью градиент-смесителя. Получают гели толщиной 0,75 мм, длиной 21 см и шириной 16 см. Полимеризация геля наступает через 1 ч после наслаивания на него изобутилового спирта. Применяют 4%-ный концентрирующий гель, в котором с помощью шаблона делают 17 или 26 карманов для нанесения образцов. Электрофорез проводят при постоянном токе (8 мА). [c.495]

В течение ночи при комнатной температуре перемешивают 15 г сефадекса G-75, сверхтонкого (Pharma ia, Упсала, Швеция), с 280 мл раствора, содержащего 4% акриламида, 0,13% N,N -Me-тиленбисакриламида и 2,8 /о амфолинов — носителей соответствующего диапазона pH. На желатинизированные стеклянные пластинки Илфорд с помощью тонкослойного распределителя (Desaga, Гейдельберг, ФРГ) наносят слой сефадекса толщиной 1 мм. Пластинки оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Нанесение образца и фокусирование проводят как описано выше, за исключением того, что электроды накладываются на слой сефадекса. Напряжение медленно повышают до 150 Bj- [c.126]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология