Нитроцеллюлоза при гибридизации нуклеиновых кислот

Рис. 4-72. Методы Нозерн - и Саузерн -блоттинга. После электрофоретического фракционирования смеси молекул ДНК или РНК в агарозном геле проводят перенос различных фрагментов нуклеиновых кислот на лист нитроцеллюлозы или найлона ( блоттинг ). Этот лист затем инкубируют с радиоактивным ДНК-зондом в течение длительного времени в условиях, способствующих гибридизации. Затем лист тщательно промывают, гак что радиоактивно меченными оказываются лищь те фрагменты, которые гибридизуются с ДНК-зондом. На радиоавтографе,

В этой главе было описано использование мембранных фильтров в ряде отраслей биомедицины. Мы показали, что мембранные фильтры находят широкое применение в биомедицинских исследованиях как в своей обычной роли в качестве фильтрующих, так и в менее привычных ролях, а именно в качестве подложек при изучении белков и нуклеиновых кислот. Возможно, одна из наиболее широких областей применения мембранных фильтров связана с количественным определением радиоактивных веществ с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика, хотя в некоторых случаях, оказывается, лучше использовать стекловолоконные фильтры. Важным достижением в области молекулярной биологии стало применение мембран из нитроцеллюлозы для гибридизации нуклеиновых кислот. Без разработки методов гибридизации с помощью мембранных фильтров было бы значительно задержано развитие технологии рекомбинантных ДНК. [c.331]

Данный метод включает иммобилизацию вирусной нуклеиновой кислоты на нитроцеллюлозе и гибридизацию ее с комплементарной нуклеиновой кислотой в качестве зонда. Экстрагировать нуклеиновую кислоту из вирусных частиц перед нанесением на нитроцеллюлозу нет необходимости. Фракции сахарозных или цезиевых градиентов можно наносить непосредственно,, не удаляя среды, используемой для центрифугирования. [c.29]

Нитроцеллюлоза сорбирует только щелочные белки. Распространение этого метода на любые белки связано с использованием так называемой диазобумаги , на которой предварительно закреплены афинные сорбенты, например антитела или антигены [Erli h et al., 1979]. Диазобумага была разработана и нашла. себе применение главным образом для гибридизации нуклеиновых кислот [Alwine et al., 1977], поэтому здесь нет места для описания ее особенностей. Отметим только способ переноса белков из ПААГ на диазобумагу. После электрофореза белков в системе Лэммли ДДС-Na вымывают из геля 0,15 М. Na-фосфатным буфером (pH 7,4) с 0,15 М Na l и 0,5% Тритона Х-100 при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем гель кладут на стопку фильтровальной бумаги в кювету, заполненную тем же буфером, накрывают диазобумагой, а ее — несколькими слоями сухой фильтровальной бумаги. Всю пачку прижимают через стеклян- [c.108]

Для гибридизации ДНК/ДНК, когда как связанная, так и гибридизированная нуклеиновые кислоты является одноните-выми ДНК, необходимо предварительно обработать мембрану, чтобы блокировать центры неспецифического связывания ДНК на нитроцеллюлозе. С этой целью Денхардт [61] успешно использовал 0,02 %-ные растворы фикола, поливинилпирролидона и бычьего сывороточного альбумина. [c.320]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология