Методика 25. Выделение ДНК из агарозного геля

Выделяют ДНК из различных штаммов Salmonella. Выделяют ее прямо из колоний, используя методику быстрого выделения ДНК- Затем выделенную ДНК расщепляют разными рестрикционными эндонуклеазами, проводят электрофорез в агарозном геле и разделенные фрагменты переносят на нитроцеллюлозу. После этого проводят гибридизацию таких полосок нитроцеллюлозы с ДНК, меченной с помощью ник-трансляции. С этими полосками экспонируют рентгеновскую пленку. После того как пленка проявлена, мол<но определить размеры тех рестрикционных фрагментов, которые гомологичны использованной ДНК-зонду. [c.50]

II. Линии и пики преципитации в гелях. Преципитат, полученный в геле, после отмывания и гомогенизации может быть использован для иммунизации. При этом легко и быстро получить моноспециф ические антитела, не прибегая к помощи трудоемких и требующих особых навыков методов выделения иммуногена. При проведении двумерного иммуноэлектрофореза (см. гл. 6) сложную смесь антигенов предварительно разделяют в одном направлении, а затем в другом (перпендикулярном первому) в слое агарозного геля, содержащего соответствующие антитела. Участки геля, где пики не перекрываются, можно аккуратно вырезать и использовать как очищенный комплекс для иммунизации. Данный метод применим к любому антигену, который мигрирует к аноду при pH 8,6 и содержится в исходной смеси в концентрации более 10— 20 мкг/мл, т. е. способен образовать видимый пик. Пример подобного подхода приведен на рис. 2.2. Для получения удовлетворительных результатов мы рекомендуем использовать следующую методику. [c.51]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология