Фоновое и неспецифическое окрашивание

При проведении электропереноса с последующим иммуноферментным проявлением блота возможны осложнения, связанные с фоновыми явлениями трех типов 1) фоновое окрашивание всей поверхности носителя, 2) неспецифическое окрашивание отдельных зон за счет примесей или перекрестной реакционной способности препарата первых антител и 3) нонсенс-окрашивание зон за счет взаимодействия со вторыми антителами (без предварительной обработки первыми антителами) или с индикаторным реагентом. [c.359]

Фоновое и неспецифическое окрашивание [c.420]

Окрашивание всей поверхности носителя может проявляться при недостаточном блокировании центров сорбции. Однако чаще оно обусловлено слишком высокой концентрацией вторых антител, использованием недостаточно чистого конъюгата (рекомендуется использовать препараты, подвергнутые аффинной очистке) или отсутствием мягкого детергента на этапах отмывки. Развитие фонового окрашивания второго типа, по-видимому, связано со слишком высокой концентрацией первых антител. Более всего хлопот доставляет, как правило, именно нонсенс-окрашивание. Оно. часто проявляется даже при работе с высокоочищенными препаратами вторых антител. Это, вероятно, обусловлено сильным неспецифическим гидрофобным взаимодействием очень крупных комплексов [антитела—фермент] с белками на носителе. Появлению такого окрашивания способствует работа в условиях перегрузки антигенами, т., е. при нанесении на гель избыточных количеств анализируемого материала. [c.359]

Моноклональные антитела УРС2/12.1 к опухоли толстой кишки человека взаимодействуют с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) (гликопротеин с мол. массой 180 кДа). Антитела радиоактивно метили 1 и вводили внутривенно. Сцинтиграммы были получены через 48 ч. Изображение получено с исключением фонового окрашивания, обусловленного неспецифическим окрашиванием антител крови. (Фото любезно предоставлены проф. К. Зокога). [c.386]

Во-первых, в зависимости от области применения существует возможность выбора наиболее подходящего и удобного источника получения моноклональных антител культуральной или асцитной жидкости. При использовании препаратов асцитной жидкости возникают определенные трудности при интерпретации полученных результатов, обусловленные примесью естественных мышиных антител к моноклональным антителам (высокие фоновые уровни). Однако в 1 мл асцитной жидкости содержится несколько мг МКА. Поэтому, когда используют разведение 1 1000 или более, значительная часть посторонних мышиных антител удаляется разбавлением. Иногда необходимо полностью удалить из препарата примесь естественных иммуноглобулинов (например, при использовании моноклональных антител для выделения и очистки небольшого количества белкового антигена с целью биохимического анализа). В последнем случае предпочтительно выделять моноклональные антитела из культуральной жидкости. При использовании в иммунологических реакциях асцитной жидкости следует иметь в виду присутствие посторонних фоновых антител. В некоторых случаях в организме мыши может существовать высокий титр природных антител, реагирующих с антигеном, специфически распознаваемым моноклональными антителами. При использовании асцитной жидкости возникают и проблемы неспецифического характера. Например, культуральная жидкость дает более ясное и точное окрашивание образца в иммуногистологических исследованиях. [c.148]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология