Плазмидная трансформация клеток дрожжей

До 1983 г. все генно-инженерные эксперименты проводились на протопластах S. erevisiae. Однаш X. Ито с соавторами обнаружили, что плазмидн)оо трансформацию клеток дрожжей можно осуществить и без удаления клеточной стенки. Для этого клетки обрабатывают полиэтиленгликолем в присутствии катионов щелочных металлов (Li+, s+, Rb+, К+, Na+). Особенно хорошие результаты дает использование солей лития. Интересно отметить, что компетентность клеток дрожжей индуцирует в основном ПЭГ, а перечисленные катионы лишь повышают эффективность плазмидной трансформации. [c.293]

Развитие методов генной инженерии привело к разработке системы трансформации для дрожжей, что способствовало более глубокому изучению у них механизма рекомбинации. Гибридные плазмиды, содержащие участки дрожжевой ДНК с известными маркерами, клонированные на векторе Е. соИ, могут быть введены в клетки дрожжей. При этом может происходить встраивание плазмидной ДНК в хозяйскую хромосому за счет рекомбинации между гомологичными последовательностями хромосомы и участка дрожжевой ДНК, входящего в состав плазмиды. При использовании плазмидной ДНК в замкнутой кольцевой форме удается с заметной частотой отобрать трансформированные дрожжевые клетки. В то же время введение двухцепочечного разрыва в дрожжевую [c.150]

Д. Армалео с соавторами в 1990 г показали, что плазмиды можно вводить в нативные клетки дрожжей при бомбардировке последних разогнанными до большой скорости (около 500 м/с) вольфрамовыми микрочастицами (диаметр 0,5-0,65 мкм), на которых адсорбированы молекулы плазмидной ДНК (так называемая генная пушка). Если адсорбировать на микрочастицах молекулы двух разных плазмид, данным методом удается осуществлять трансформацию дрожжей обеими плазмидами одновременно (котрансформацию) с частотой, близкой к 100%. [c.293]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология