Котрансформация

Один из экспериментальных подходов к получению безмаркерных трансгенных растений включает котрансформацию растений двумя разными ДНК, одна из которых несет маркерный ген, а другая — интересующий исследователя чужеродный ген. В этом случае от 30 до 80% растений содержат оба гена, которые, однако, интегрированы в разные сайты хромосомной ДНК. После отбора трансформантов маркерный ген можно удалить из трансгенного растения с помощью обычного скрещивания. [c.386]

Кроме такого прямого подхода, порядок генов и их относительное сцепление можно изучать по частотам котрансформации этих генов. Такие эксперименты сводятся к измерению частот совместного встраивания в геном одной клетки двух разных генов. Гены, кодирующие галак-токиназу (GALK), растворимую тимидинкиназу (ТК1), и проколлаген [c.307]

Частота котрансформации по устойчивости к стрептомицину и пенициллину приблизительно равна произведению частот трансформации по каждому из этих маркеров. Частота котрансформации по устойчивости к стрептомицину и по способности сбраживать маннит превосходит в 17 раз произведение частот трансформации по каждому из этих маркеров. Как объяснить эти факты [c.224]

В специальную группу можно также выделить нуклеотидные последовательности ранних и других районов аденовирусов, папова-вирусов и герпесвирусов, которые клонированы в составе различных плазмидных векторов и обладают трансформирующим действием. Эти гены способны заменять по своему функциональному действию онкогены как ядерного , так и неядерного типа при тестировании их трансформирующей способности по комплементации с клеточными онкогенами при котрансформации нормальных клеток. [c.226]

При введении в первичные эмбриональные фибробласты крысы онкогенов, принадлежащих к тому или другому классу, фокуды морфологической трансформации получить не удается. Однако введение различных онкогенов методом котрансформации с доминантными маркерами устойчивости позволяет определить, какие признаки привносятся в нормальную клетку тем или иным онкогеном. Так, [c.226]

Для проведения котрансформации 3 10 первичных эмбриональных фибробластов крысы, на 60 мм чашку можно использовать от 0.1 до 2 мкг ДНК плазмиды, несущей ген устойчивости к микофеноловой кислоте с добавлением 10-кратного избытка ДНК плазмиды, несущей онкогенные последовательности, так чтобы в сумме общее количество ДНК на чашку не превышало 20 мкг. [c.228]

Д. Армалео с соавторами в 1990 г показали, что плазмиды можно вводить в нативные клетки дрожжей при бомбардировке последних разогнанными до большой скорости (около 500 м/с) вольфрамовыми микрочастицами (диаметр 0,5-0,65 мкм), на которых адсорбированы молекулы плазмидной ДНК (так называемая генная пушка). Если адсорбировать на микрочастицах молекулы двух разных плазмид, данным методом удается осуществлять трансформацию дрожжей обеими плазмидами одновременно (котрансформацию) с частотой, близкой к 100%. [c.293]

Котрансформация дрожжей линеаризованным вектором и продуктами ПЦР [c.329]

При анализе клонов ТК, выросших после котрансформации клеток L ТК , не удалось выявить последовательности вводимой в большом избытке неселектируемой ДНК. Это еще раз свидетельствует о наличии субпопуляции компетентных клеток в используемой культуре. [c.343]

Котрансформацией с вирусным селективным геном в клетки тератокарциномы вводили ген 8-глобина человека. Чужеродные гены стабильно сохранялись в геноме трансформантов в интегрированном состоянии. [c.448]

В клетке плазмидные ДНК рекомбгаируют между собой и хромосомной ДНК. В результате плазмида может интегрироваться в хромосомную ДНК растения в индивидуальном или, чаще, в мультимерном виде. Встройка в хромосомную ДНК растений происходит случайным образом, как и в клетках млекопитающих. Метод бомбардирования позволяет осуществлять котрансформацию растений разными плазмидами, при этом плазмиды обычно встраиваются в геном растения как коинтегранты. На основании полученных результатов можно полагать, что механизм интеграции чужеродной ДНК в хромосомы клетки при прямом переносе плазмид, не содержащих протяженных областей гомологии с хромосомной ДНК, схож у растений, животных и дрожжей. [c.467]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология