Дрожжи трансформация

В книге изложены основы микробиологического получения белковых и хлебопекарных дрожжей, бактериальных удобрений, вакцин, липидов, полисахаридов, спиртов, органических кислот, аминокислот, витаминов, антибиотиков, ферментов. Показаны принципы микробиологической трансформации органических соединений и сущность очистки сточных вод. Эти вопросы рассмотрены в технологическом аспекте с краткой характеристикой биохимии и микробиологии каждого процесса. [c.2]

Развитие методов генной инженерии привело к разработке системы трансформации для дрожжей, что способствовало более глубокому изучению у них механизма рекомбинации. Гибридные плазмиды, содержащие участки дрожжевой ДНК с известными маркерами, клонированные на векторе Е. соИ, могут быть введены в клетки дрожжей. При этом может происходить встраивание плазмидной ДНК в хозяйскую хромосому за счет рекомбинации между гомологичными последовательностями хромосомы и участка дрожжевой ДНК, входящего в состав плазмиды. При использовании плазмидной ДНК в замкнутой кольцевой форме удается с заметной частотой отобрать трансформированные дрожжевые клетки. В то же время введение двухцепочечного разрыва в дрожжевую [c.150]

Таблица 7.5. Трансформация дрожжей метод с использованием ацетата литня

Технологический процесс разделяется на два этапа получение биомассы дрожжей и трансформация предшественника с помощью накопленной биомассы дрожжей. [c.417]

Препараты плазмидной ДНК, выделенные из дрожжей, можно использовать для рестрикционного анализа, а также для трансформации клеток Е. соИ с целью амплификации плазмиды. Эти процедуры описаны в табл. 7.8. [c.231]

Фруктоза (фруктовый сахар, левулеза) в свободном состоянии содержится в зеленых частях растений, нектаре цветов, семенах, меде. Входит в состав сахарозы, образует высокомолекулярный полисахарид инсулин. Сбраживается дрожжами. Получают из сахарозы, инсулина, трансформацией других моноз методами биотехнологии. [c.45]

Рис. 31.13. Частота трансформации у дрожжей зависит от того, происходит ли внедрение фрагмента в хромосомную ДНК или он сохраняется в виде плазмиды.

Таблица 7.4. Трансформация дрожжей метод с использованием сферопластов

В последние годы в генетико-селекционной работе все чаще используются микробные протопласты. С помощью слияния протопластов можно получать генетические рекомбинанты у тех видов и щтаммов микроорганизмов, у которых не обнаружены собственные системы обмена наследственной информацией и которые в естественных условиях никогда не скрещиваются между собой. Трансформация протопластов, по-видимому, является универсальным способом введения молекул ДКК в клетки бактерий, актиномицетов, дрожжей и грибов. [c.124]

Таким образом, было получено первое прямое доказательство генетической роли ДНК у бактерий. В дальнейшем предпринимались многочисленные попытки трансформации низших эукариот — дрожжей, водорослей, а также многоклеточных животных и растений. Эти попытки оставались безуспешными до конца 70-х годов XX в., когда стала развиваться технология генной инженерии и были разработаны методы так называемой векторной трансформации (см. гл. 11). В настоящее время проблема трансформации эукариот решена и роль ДНК как универсального носителя генетической информации не вызывает сомнения. [c.114]

Высокочистый З-этил-З-оксибутират (98% ее) с выходом 98% может быть получен при использовании анаэробно выращенной биомассы дрожжей Р1ск1а хр.80-11. Однако время трансформации в последнем случае значительно увеличивается до 50 часов. [c.43]

Трансформацией мезо-циклопент-2-ен-1,4-диола (68) с помощью клеток дрожжей Тг1ско5рогоп beigelii в присутствии этанола получен 4-(К)-оксицикло-пент-2-ен-1-(8)-ацетат (69) - интермедиат синтеза таких природных продуктов, как простагландины, проста-циклины, тромбоксаны и антивирусные агенты [c.455]

Для трансформации дрожжей обычно используют три способа. В первом случае экзогенную ДНК добавляют к клеткам дрожжей, клеточные стенки которых удалены химически или энзиматически (протопласты) (1). В других случаях клетки перед добавлением чужеродной ДНК обрабатывают ацетатом лития (2) или подвергают электропорации (3). Трансфекцию культур животных клеток осуществляют инкубацией клеток с ДНК, осажденной фосфатом кальция или ДЕАЕ-декстраном (1), либо электропорацией в присутствии очищенной трансфицирующей ДНК (2). Как уже упоминалось в гл. [c.136]

Все это заставило ученых исследовать возможность получения гетерологичных белков с помощью других видов дрожжей и с использованием эукариотических систем. В частности, изучались соответствуюшие векторы — системы экспрессии, содержащие видоспецифичные регуляторные последовательности транскрипции и трансляции, возможность трансформации этих видов и получения высокого выхода белков и возможность крупномасштабного культивирования организма-хозяина. В качестве альтернативы S. erevisiae можно использовать Kluyveromy es la tis, дрожжи, которые применяют для промышленного производства лактозы [c.140]

В большой степени образование липидов у дрожжей и других фибов связано с дыхательной активностью клетки. Ингибирование процесса дыхания ведет к торможению биосинтеза липидов. При недостаточном снабжении кислородом резко тормозятся процессы образования триацилглицеринов, но накапливается значительное количество свободных жирных кислот и фосфолипидов. С интенсификацией аэрации средь( возрастает степень ненасыщенности липидов путем частичной трансформации олеиновой кислоты в кислоты с двумя и тремя двойными связями. [c.70]

Существенное увеличение оптической чистоты целевого продукта, образующегося при восстановлении карбонилсодержащих соединений некарскими дрожжами, оказывают органические растворители [55, 56]. Показано, что в нетролейном эфире дрожжи способны восстанавливать этилацетоацетат, этил-5-фенил-З-оксопентонат и N-фенил-З-оксобутиламид с очень высокой энантиоселективностью (99-100 % ее) и выходом 69-82 % [57, 58]. Высокоселективное восстановление различных уЗ-кето-эфиров имело место также в процессе трансформации лиофиль-но высушенными дрожжами в бензине [59]. [c.287]

Другая система предоставляет возможность для выделения дискретных точек начала репликации. Клетки дрожжей S. erevisiae, мутантные по какой-то функции, могут быть трансформированы путем добавления ДНК, которая несет копию гена дикого типа. Схема эксперимента представлена на рис. 31.13. Мутация клетки-хозяина должна затрагивать ген, продукт которого можно селектировать. ДНК клеток дикого типа выделяют, фрагментируют и клонируют в составе плазмид Е. oli. Гибридные плазмиды инкубируют с мутантными клетками дрожжей в таких условиях, в которых эти клетки способны выжить только в случае экспрессии гена дикого типа. В зависимости от частоты возникновения трансформированных клеток различают два типа трансформации. [c.403]

Дрожжи давно уже входят в число излюбленных объектов биологов-экснериментаторов с открытием и введением в исследовательскую практику методов трансформации дрожжевых клеток экзогенной ДНК [5, 6] интерес к дрожжам пробудился с новой силой. В значительной степени это объясняется тем, что дрожжи — организмы эукариотические, что делает их такими же удобными объектами для биохимических и генетических [c.208]

Выбор штамма-хозяина диктуется типом векторной плазмиды, которую предполагается использовать для трансформации хозяин должен нести мутацию в гене, копия которого б плазмиде выполняет роль селективного маркера. Так, если доминантным селективным маркером служит плазмидный ген сир1 (обеспечивающий устойчивость к ионам меди), перед исследователем открывается широкий выбор штаммов-хозяев (гаплоидных, диплоидных или даже не охарактеризованных пивных дрожжей), поскольку большинство из них чувствительно к ионам меди, а это единственное необходимое условие их пригодности для работы с данным вектором. [c.220]

Для трансформации дрожжей пригоден и другой метод, связанный с использованием ионов лития (табл. 7.5). Аналогичная методика также описана Р. Ротстейном в гл. 3 первого тома этой серии. Процедура, представленная в табл. 7.5, соответствует разработке 2утодепе1 сз и приводится для того, чтобы дать представление о возможных вариантах принципиально одного и того же метода. [c.229]

Метод трансформации сферопластов используется наиболее широко и обеспечивает относительно высокий уровень трансформации. Это обстоятельство может иметь большое значение прн скрининге библиотеки, клонированной в дрожжах. Однако для отбора нескольких трансформантов при субклонировапии [c.229]

РГнкубацию следует проводить в закрытом сосуде, чтобы предотвратить выпаривание жидкости. Процесс образования сферопластов можно контролировать, как описано в методике трансформации дрожжей. Указанное время является ориентировочно необходимым для формирования сферопластов. [c.231]

Как боковые ветви обмена углерода, заканчивающиеся биосинтезом и накоплением специфических веществ экологического или структурного назначения, могут функционировать и основные пути обмена, при условии блокирования дальнейшей трансформации промежуточных продуктов биосинтеза, накапливающихся в клетке или в культуре. Примером этого может служить накопление этилового алкоголя у дрожжей (спиртовое брожение) или молочной кислоты у мукоровых грибов или, наконец, маннита у видов рода Aspergillus. В основе этих боковых путей углеродного обмена лежит всего один дополнительный этап, состоящий в восстановлении [c.74]

Разработке промышленных способов производства L-триптофана как незаменимой аминокислоты в СССР уделяется большое внимание. Разработаны и освоены технологии получения L тpиптoфaнa с различной степенью его очистки, предназначенные для использования в медицине, сельском хозяйстве и практике научных исследований. Промышленные способы микробиологического производства состоят в проведении процесса биосинтеза как с помощью бактериальных штаммов-мутантов, недостаточных по тирозину и фенилаланину, так и путем трансформации различных предшественников в L-триптофан под действием ферментных систем некоторых дрожжей. [c.46]

Двуступенчатый способ биосинтеза L-триптофана. Он предполагает на первом этапе размножение в асептических условиях штамма дрожжей С. utilis по традиционной схеме от пробирок до основного ферментатора с целью накопления максимально возможного количества биомассы используемого микроорганизма, а на втором — проведение в том же биореакторе трансформации предшественника с помощью накопленной биомассы. [c.48]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология