Сывороточный альбумин карбоксиметилирование

На рис. 6.12 показан пример разделения смесей пептидов в длинной колонке с сефадексом 0-100. Фрагмент N из сывороточного альбумина человека состоит из трех пептидных цепей, связанных дисульфидными мостиками. После восстановления, карбоксиметилирования и малеилирования эти три пептидные цепи разделяются на колонке с сефадексом 0-100 в соответствии с их молекулярными массами. Пептид ПЬЦис содержит 162 аминокислотных остатка, цепь 1-АСп — 88 остатков и цепь П-Ала — 36 аминокислотных остатков. [c.383]

Рис. 6.12. Фракционирование на сефадексе 0-100 смеси пептидов, образовавшейся из фрагментов N человеческого сывороточного альбумина после восстановления, карбоксиметилирования и малеилирования [28].

В качестве примера ниже приведена методика карбоксиметилирования сывороточного альбумина быка [81]. Раствор, содержа-ш,ий 500 мг кристаллического белка, 6 ммоль бромацетата и избыток окиси магния, осторожно встряхивают при 35°. За ходом реакции следят, отбирая пробы смеси для анализа различными метода-ьш. Полезными критериями для наблюдения за ходом реакции могут служить убыль аминного азота и отрицательный результат диазосочетания имидазольных и фенольных остатков. В случае бычьего сывороточного альбумина по мере протекания карбокснметилиро-вания дисульфидные связи становятся более доступными восстановлению это можно обнаружить, обрабатывая препарат сначала сульфитом, а затем раствором фосфомолибденовой кислоты по Фолину 82]. Спустя 27—72 час смесь центрифугируют и прозрачную надосадочную жидкость подкисляют до pH 2 соляной кислотой. Практически количественный выход карбоксиметилированного белка. [c.179]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология