Надосадочная жидкость

Кровяная плазма, полученная по описанной выше методике, представляет собой жидкость, слегка окрашенную каротиноидамн, и содержит следующие белки альбумины (растворимы в 5%-ном солевом растворе), липопротеины, фибриноген и протромбин. Из цельной крови без защитных добавок при стоянии через несколько минут выделяются хлопья в результате превращения растворимого глобулярного фибриногена в н< растворимый нитевидный белок—фибрин, нити которого образуют ячеистую структуру сгустков. Это превращение происходит под влиянием протромбина и ионов кальция. Центрифугирование свернувшейся крови приводит к отделению смеси фибрина и красных кровяных тел. Надосадочная жидкость представляет собой кровяную сыворотку, которая отличается от плазмы тем, что не содержит фибриногена. Витамин К является антигеморрагическим агентом, так как он снижает концентрацию протромбина. Цитрат и гепарин предупреждают свертыванис крови, связывая ионы кальция. [c.670]

Для определения глюкозо-6-фосфата энзиматическим методом при осаждении белков используют 0,5 н. раствор хлорной кислоты. Из безбелкового раствора хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Надосадочную жидкость используют для определения глюкозо-б-фосфата (с. 40). [c.66]

С этой целью изучалась седиментационная устойчивость смесей арланской нефти в присутствии н-пентана и н-гептана. Сущность экспериментов заключалась в центрифугировании при 4000 об/мин в течение 10 мин испытуемых смесей при изменяемой от 5 до 50% мае. кратности растворителя. Полнота осаждения оценивалась весовым методом по количеству образовавшегося осадка. Надосадочную жидкость и осадок анализировали методами ЭПР и ИК-спектрометрии. Результаты проведенных исследований представлены на рис. 5,13, б, из которых видно, что полученные зависимости идентичны. При увеличении дозы осадителя в нефти до величины 1 10 для С,Н 2 и до 1 5 для С Н количество отложений уменьшается. При этом количество парамагнитных центров в осадке возрастает, а в надосадочной жидкости уменьшается во всем диапазоне рассматриваемых концентраций. [c.128]

Рис. 5.13. Изменение массы отложений (1), концентрации ПМЦ в надосадочной жидкости (2) и в осадке (3) после центрифугирования смесей а — нефть н-пентан б — нефть н-гептан

Осаждение белков спиртом. Навеску (2—3 г) измельченной ножницами на холоде ткани переносят в гомогенизатор с 5 объемами охлажденного 96%-ного этанола гомогенат сливают в центрифужный стакан, оставляют при комнатной температуре на 20 мин, затем центрифугируют 10 мин при 3000 Надосадочную жидкость сливают в колбу с узким горлом (при обработке 2—3 г мышц объем колбы 200 мл, при получении экстракта из большой навески можно пользоваться делительной воронкой), осадок трижды промывают 15 мл [c.191]

Непрямой метод. В центрифужную пробирку берут 25— 100 мг исследуемой ткани, 1 мл гомогената или безбелкового фильтрата, добавляют 3 мл 30%-ного раствора КОН и нагревают в кипящей водяной бане в течение 20 мин. Затем пробы охлаждают, добавляют равный объем (4 мл) спирта, хорошо перемешивают стеклянной палочкой и помещают в кипящую водяную баню. Когда спирт закипит, пробы охлаждают и осадок гликогена отделяют центрифугированием в течение 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, осадок гликогена растворяют в 1 мл дистиллированной воды [c.24]

Получение экстракта, содержащего митохондрии. Гомогенат мышц центрифугируют в течение 10 мин при 600 и температуре 4°С для удаления обломков клеток и ядер. Надосадочную жидкость (экстракт мышц) фильтруют через четыре слоя влажной марли. Экстракт содержит гликолитические ферменты, митохондрии и микросомы. Измеряют pH и доводят его до значения 7,4. До опыта экстракт хранят при низкой температуре. Получение гомогената и экстракта рекомендуется проводить в холодной комнате и использовать в день получения, чтобы сохранить достаточно высокую активность митохондрий. [c.50]

Посторонние примеси. Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качеств сорбента силикагель Р1. Для приготовления подвижной фазы встряхивают смесь 2 объемов этилацетата Р, 2 объемов аммиака ( 260 г/л) ИР и 8 объемов гексана Р, дают слоям разделиться и используют верхний слой. Для приготовления испытательного раствора растворяют 0,10 г испытуемого вещества в смеси 100 объемов метанола Р и I объема соляной кислоты ( 420 г/л) ИР и разводят до 20 мл той же смесью растворителей к 2,0 мл раствора добавляют 1,0 мл салицил-альдегида ИР, центрифугируют и сливают надосадочную жидкость (раствор А). Для приготовления раствора сравнения растворяют 25,0 мг гидразина сульфата Р в Ш мл воды и разводят до 100 мл смесью 1 объема соляной кислоты ( 420 г/л) ИР и 100 объемов метанола Р разводят 1,0 мл полученного раствора до 100 мл той же смесью растворителей. К 2,0 мл этого раствора добавляют 1,0 мл салицилальдегида ИР, центрифугируют и сливают надосадочную жидкость (раствор Б). Наносят на пластинку отдельно по 40 мкл каждого из растворов А и Б. После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть на воздухе и опрыскивают ее 4-диметиламинобензальдегидом ИР6. Оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 нм). Любое пятно, которое даст раствор А, кроме основного пятна, не должно быть более интенсивным, чем пятно, которое дает раствор Б. [c.171]

Только что извлеченные из организма мышцы (сердце, печень, мозг) помещают в хорошо охлажденную ступку и заливают жидким азотом. Сильно промерзшую ткань тщательно растирают, подливая жидкий азот, и быстро делают навески по 0,3—0,4 г (с. 29). Навески помещают в пробирки, стоящие во льду, приливают двойной объем охлажденного раствора кислоты и ткань тщательно размешивают в течение 5—10 мин. Белок удаляют центрифугированием (10 мин, 3000 ) надосадочную жидкость используют для электрофоретического или хроматографического анализа. Перед проведением хроматографического разделения необходимо освободиться от трихлоруксусной кислоты экстракцией эфиром, а от хлорной кислоты — осаждением КОН (с. 29, 33). При необходимости надосадочную жидкость концентрируют лиофилизацией. [c.183]

Необходимое количество геля подбирают следующим образом. В несколько пробирок наливают одинаковое количество ферментного раствора (минимальный объем) и добавляют разные количества геля. Перемешивают до получения однородной суспензии, центрифугируют и в центрифуге определяют ферментативную активность. То соотношение геля к ферментному раствору, при котором в надосадочной жидкости остается примерно 90% первоначальной активности при адсорбции балластных белков и около 10% при адсорбции исследуемого фермента, считается оптимальным. На основании полученного соотношения рассчитывают количество геля, которое необходимо добавить на весь объем ферментного раствора. [c.204]

Элюцию фермента с геля также проводят под контролем определения ферментативной активности. Для этого осадок геля 10—15 мин перемешивают с элюирующим буфером, центрифугируют и в надосадочной жидкости измеряют ферментативную активность. Обработку повторяют с новыми порциями буфера (но с меньшими объемами) до тех пор, пока не будет элюировано основное количество фермента, [c.204]

Перед началом работы колонку необходимо укрепить в вертикальном положении и наполнить на две трети буферным раствором. Ионит, предназначенный для наполнения колонки, размешивают несколько раз с соответствующим буферным раствором, оставляют стоять на непродолжительное время, после чего над осадочную жидкость сливают. Ионит должен оседать быстро, а надосадочная жидкость должна быть прозрачной. Если ионит оседает медленно или надосадочная жидкость остается мутной, то операцию отмучивания необходимо повторять до тех пор, пока не будет достигнута однородность зернения ионита. Ионообменники, обработанные посредством седиментации в токе жидкости [56, 93], уже не требуют такой подготовки. [c.553]

При отсасывании порошкообразных веществ, которые отделяются центрифугированием, можно применить аналогичную методику. После центрифугирования при помощи баллончика отсасывают надосадочную-жидкость, осадок размешивают с чистым растворителем и после центрифугирования снова отделяют надосадочную жидкость от промытых кристаллов. Обычно выгодно не промывать отцентрифугированные кристаллы, а сразу проводить перекристаллизацию, что позволяет быстрее и с меньшими потерями получить конечный продукт. [c.702]

Оставляют колбы стоять при 18—37 °С до появления-роста и затем выдерживают при 35—37 °С в течение 16 ч, постоянно встряхивая для максимальной аэрации. Центрифугируют и стерилизуют надосадочную жидкость путем фильтрации через подходящий мембранный фильтр. [c.226]

Методика приготовления. Помещают 50 мл воды в стакан емкостью 100 мл и прибавляют 2,0 г оксиэтилцеллюлозы Р. Через 15 ч растирают раствор в течение I мин и центрифугируют в течение 15 мин. При помощи пипетки отделяют 20 мл надосадочной жидкости. [c.341]

Диметилформамид. Проводят испытание, как описано в разделе Газовая хроматография (т. 1, с. 105). Готовят внутренний стандарт, состоящий из смеси 20 мкл ди метил ацетамид а Р и 100 мл воды. Вводят следующие 3 раствора (1) смесь 2 мкл диметилформамида Р и 10 мл воды, содержащую 10 мл раствора внутреннего стандарта (2) для определения времени удерживания испытуемого вещества растворяют 1,0 г его в 10 мл воды, добавляют, помешивая 10 мл соляной кислоты (0,5 моль/л) ТР, оставляют на 15 мин, центрифугируют и в 5 мл надосадочной жидкости растворяют 0,10 г тринатрия ортофосфата Р (3) растворяют 1,0 г испытуемого вещества в 10 мл раствора внутреннего стандарта, добавляют, помешивая, 10 мл соляной кислоты (0,5 моль/л) ТР, оставляют на 15 мин, центрифугируют и затем в 5 мл надосадочной жидкости растворяют 0,10 г тринатрия ортофосфата Р. [c.157]

Другие кобаламины. Проводят испытание, как описано в разделе Хроматография на колонках (т. 1, с. 100), встряхивая 20 г диэтиламиноэтилцеллюлозы Р с 200 мл раствора гидроксида натрия (0,5 моль/л) ТР, разводят водой для получения гомогенной суспензии, дают ей осесть и отбрасывают надосадочную жидкость. Используя подходящий фильтр, промывают водой, пока промывные воды не будут свободны от щелочи, затем переносят сорбент в трубку высотой 22 см и диаметром [c.176]

Аналогичным образом заполняют вторую колонку, готовят суспензию карбоксиметилцеллюлозы Р в соляной кислоте (0,5 моль/л) ТР, разводят водой, дают осесть и удаляют надосадочную жидкость. Используя подходящий фильтр, промывают водой, пока промывные воды не освободятся от кислоты, затем переносят сорбент в трубку высотой 22 см и диаметром [c.177]

Другие кобаламины. Проводят испытание, как описано в разделе Хроматография на колонках (т. 1, с. 100), встряхивая 20 г диэтиламиноэтилцеллюлозы Р с 200 мл раствора гидроксида натрия (0,5 моль/л) ТР, разводят водой до получения гомогенной суспензии, дают ей осесть и удаляют надосадочную жидкость. Используя подходящий фильтр, промывают водой, пока промывные воды не станут свободны от щелочи, затем переносят сорбент в трубку высотой 22 см и диаметром 1,2 см, снабженную запорным краном. Дают осесть и спускают жидкость, пока сорбент не опустится до 14 см. Промывают водой, пока pH элюата не сравняется с pH воды. [c.180]

Изменение парамагнитной активности системы и, конкретно, надосадочной жидкости и осадка можно объяснить следующими представлениями. Введение легкого алкана в нефтяную систему приводит к конформационным изменениям асфальтеновых агрегатов с образованием новых комбинаций и гсерераспределением асфальтеновых частиц различной молекулярной массы в этих комбинациях. Наивысшая степень дезагрегирования с выделением в систему максимального количества наиболее высокомолекулярных асфальтеновых фрагментов наблюдается при когн1 ентрациях легкого алкана, соответствующих максимальным значениям массы осадка. В этих же условиях в системе непрерывно изменяется сорбционная активность асфальтеновых агрегатов, которая, впрочем, приводит к их взаимодействиям. [c.130]

Изменения количества парамагнитных центров в осадке и в надосадочной жидкости находится в соответствии с концентрацией в них асфальтеновых частиц, которая увеличивается в осадке и уменьшается в жидкой фазе по мере увеличения разбавления системы. Как видно, наиболее интенсивное изменение парамагнитной активности осадка и надосадочной жидкости происходит до концентраций осадителя, соответствующих экстремальной точке на линии изменения массы осадка, что является следствием интенсивного проявления межмолекулярных взаимодействий уже при низких концентрациях аьлкана. [c.130]

Седиментация представляет собой перемещение более плотных частиц дисперсной фазы или молекул растворенных высорюмолеку-лярных Беществ относительно менее плотной дисперсионной среды в направлении приложенной силы. Этому перемещению противостоит броуновское движение, а также любые воздействия на систему, приводящие к возникновению конвекционных токов — встряхивание, локальные изменения температуры и т. п. В поле земного тяготения с заметной скоростью осаждаются (седиментируют) лишь частицы не слишком мелких суспензий. Это осаждение может быть существенно ускорено применением центрифуг. При этом, как правило, возникают столь плотные осадки, что надосадочную жидкость (супернатант) можно просто слить с осадка опрокидыванием пробирки. Поэтому центрифугирование широко используют в лабораторной практике и в промышленных установках вместо фильтрования, особенно в тех случаях, когда осажденное вещество образует мелкодисперсную суспензию. В ультрацентрифугах удается осадить коллоидные частицы и молекулы полимеров. [c.333]

Рассмотренный только что для обычной сефарозы, этот вариант элюции, естественно, находит применение и при использовании гидрофобизированной агарозы. В качестве примера процитируем недавно опубликованную работу по мягкой очистке HMG-белка из ядер печени на колонке со-аминобутилагарозы. Этот белок растворим в растворе сульфата аммония вплоть до концентрации, достигающей 70% от насыщения. Сначала такой концентрацией СА в нейтральном 0,01 М трис-буфере высаливали из экстракта ядер большое количество балластного белка. Затем надосадочную жидкость, содержащую около 40 мг белка, вносили на колонку размером 2 X X 30 см, уравновешенную тем же раствором СА. Элюцию вели снижающимся линейным градиентом концентрации СА в том же буфере (500 мл) со скоростью 20 мл/ч, т. е. примерно 7 мл/см -ч. Низкая скорость элюции характерна для всех опытов такого рода ввиду повышенной вязкости концентрированных солевых растворов и соответствующего снижения скорости диффузии макромолекул. Около 30% белка не садилось на колонку и удалялось при первоначальной промывке. В ходе элюции выходило четыре пика, в первом из которых методом электрофореза идентифицировали HMG-белок [ onner. omings, 1981]. [c.181]

Получение экстракта, не содержащего митохондрий. Гомогенат мышц центрифугируют 10 мин при 12 000 —15 000 и температуре 4°С. Надосадочную жидкость, представляющую собой экстракт мышц, свободный от митохондрий, ядер и обломков клеток, фильтруют через четыре слоя влажной марли. Хранят до опыта в холодильнике. Работать необходимо со свежевыделенным экстрактом. Только в крайних случаях, когда работа не может быть выполнена в день получения, экстракт замораживают и в таком виде хранят. Предварительно измеряют pH, доводят его до значения 7,4. [c.50]

Высушенный порошок заливают 200 мл смеси хлороформ — мети- ловый спирт (1 1). Проводят экстрагирование фосфолипидов при встря- хивании на механической качалке в течение 30 мин. Раствор центри- фугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Центрифугат отделяют и [сохраняют Обработку осадка повторяют. Если центрифугирование не даег полного просветления надосадочной жидкости, проводят фильтро- вание на воронке Бюхнера. Центрифугаты (фильтраты) объединяют и I выпаривают на роторном испарителе. [c.77]

Выделение нуклеиновых кислот. 20 г ткани гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе или растирают в ступке с 5-кратным объемом солевого раствора. К гомогенату добавляют 20%-ный раствор ДСН до конечной концентрации 2% и выдерживают 30 мин в термостате при 37°С. К образовавшемуся вязкому раствору добавляют 5 М Na l до концентрации 1 М для диссоциации нуклеопротеидного комплекса. Гомогенат переносят в колбу с притертой пробкой и тщательно встряхивают в течение 10—15 мин с 2,5 объемами смеси хлороформа И изоамилового спирта в соотношении 24 1. Смесь переносят в стеклянные центрифужные стаканы на 50 мл, центрифугируют 30 мин при 800—1000 g. Надосадочная жидкость расслаивается на три фракции в верхней содержатся нуклеиновые кислоты, в средней (плотной) — белки, в нижней, хлороформной фракции — липиды и другие компоненты. [c.167]

Препараты ДНК, полученные из различных тканей жнЬотных, дважды промывают этанолом и высушивают в вакуум-эксикаторе. Высушенные осадки смачивают 1—2 каплями концентрированной H IO4 и гидролизуют в запаянных ампулах в кипящей водяной бане в течение 1 ч . Препараты ДНК, полученные по методу Мармура, берут для гидролиза в количестве 5—10 мг. После вскрытия ампул гидролизаты переносят капилляром в центрифужные пробирки, добавляют к ним 2 капли 4 М КОН и осторожно, по каплям—1 М КОН до нейтральной реакции. После этого добавляют капилляром 1 каплю концентрированной НС1 и центрифугируют 10 мин при 3000 g. Объем надосадочной жидкости доводят водой до 1 мл и подвергают хроматографическому анализу. [c.178]

Осаждение хлорной кислотой. Навеску мышечной ткани (3—5 г) освобождают от жира, соединительной ткани и измельчают ножницами на холоде. К кашице добавляют 5 объемов охлажденного 0,5 н. раствора НСЮ4, гомогенизируют или тщательно растирают в ступке. Суспензию центрифугируют (20 мин, 1000 g), надосадочную жидкость собирают, осадок вновь суспендируют в 1 —1,5 объемах хлорной кислоты. Промывные воды соединяют с центрифугатом. Хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Полученный центрифугат упаривают на роторном испарителе при температуре 40—45° С. [c.191]

Получение апофермента. Для отщепления НАД+, прочно связанного с мышечной глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой, препарат фермента обрабатывают норитом (активированный уголь), 500 мг норита суспендируют в 10 мл 10 мМ фосфата натрия, содержащего 5 мМ ЭДТА, pH 7,2. Через 2—3 мин надосадочную жидкость декантируют для удаления мелких частиц норита. Эту процедуру повторяют [c.256]

Очистка препарата тяжелого меромиозина осаждением сернокислым аммонием. Наиболее простым способом очистки служит высаливание фермента сернокислым аммонием. При этом собирают фракцию, выпадающую между 40—60% насыщения Следует, однако, соблюдать два условия во-первых, использовать сернокислый аммоний, перекристаллизованный с ЭДТА, так как даже следовые количества ионов магния, прочно связываясь с ТММ, ингибируют активность, и, во-вторых, перед добавлением к раствору фермента раствора насыщенного сернокислого аммония необходимо проконтролировать pH последнего и в случае необходимости довести его до нейтрального или слабощелочного. Выпавший в осадок тяжелый меромиозин отделяют центрифугированием, растворяют в небольшом объеме (3—6 мл) бидистиллята и диализуют при О—4 °С в течение ночи против 1 л бидистиллированной воды, чтобы освободиться от сернокислого аммония. Внешний раствор несколько раз меняют и проводят контроль на присутствие в нем ионов 5042- с помощью насыщенного раствора хлористого бария. В диализном мешочке может вновь выпасть осадок, который следует отцентрифугировать и отбросить. В надосадочной жидкости одним из общепринятых методов определяют содержание белка, которое обычно составляет 1—10 мг/мл. [c.395]

Подготовка сефадекса и заполнение колонки. Сухой сефадекс суспендируется в большом об ьеме дистиллированной воды. После осаждения основной массы сефадекса надоса Чочную жидкость с мельчайшими частицами геля декантируют. Этуоперадию отмывки повторяют несколько раз, пока надосадочная жидкость не будет со держать мельчайших частиц. Для отмывки и набухания сефадекса требуется 3 часа. [c.33]

Методика приготовления. Растворяют 40 г йодида тетрабутиламмония Р в 90 мл безводного этанола Р, прибавляют 20 г тонкоизмельченной очищенной окиси серебра Р и энергично встряхивают в течение 1 ч. Центрифугируют небольшой объем смеси и проверяют надосадочную жидкость на йодиды. Если реакция положительная, прибавляют дополнительно 2 г окиси серебра Р и встяхивают еще 30 мин. Повторяют эту процедуру до получения жидкости, не содержащей йодидов, фильтруют смесь через тонкий стеклянный фильтр и споласкивают реакционный сосуд и фильтр тремя порциями, каждая по 50 мл, сухого бензола Р. Прибавляют промывную жидкость, к фильтрату и разводят до 1000 мл сухим бензолом Р. Пропускают сухой азот, не содержащий углекислоты, через раствор в течение 5 мин. [c.348]

Б. Растворяют 10 мг испытуемого вещества в 4 мл этанола ( — 750 г/л) ИР, добавляют 1,0 мл серной кислоты ( — 100 г/л) ИР и 0,05 г порошка цинка Р и оставляют на 10 мин. Сливают надосадочную жидкость или при необходимости фильтруют. О.хлаждают полученный раствор на льду и добавляют 0,5 мл раствора нитрита натрия (100 г/л) ИР и через 2 мин 1,0 г мочевины Р, затем 1,0 мл раствора 2-нафтола ИР1 и 2,0 мл раствора гидроксида натрия ( — 400 г/л) ИР появляется красная окраска. Повторяют испытание, но без порошка цинка Р красная окраска не появля стся. [c.75]

Посторонние примеси. Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве сорбента силикагель Р4 и готовя покрытие пластинки следующим образом к 8 г силикагеля Р4 добавляют 16 мл воды, содержащей 1 г формата натрия Р, и покрывают пластинки слоем 0,5 мм толи нной. В качестве подвижной фазы используют смесь 50 объемов хлороформа Р, 50 объемов этанола ( — 750 г/л) ИР и 7 объемов муравьинной кислоты (—1080 г/л) ИР. Наносят на пластинку (в форме полосы шириной 4 см) 20 мкл раствора в уксусной кислоте ( — 90 г/л) ИР, содержащего 72 мг испытуемого вещества в 1 мл (раствор А). После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть на возду хе и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 нм). Отмечают прямоугольные участки вокруг каждой группы полос выше и ниже основной полосы, количественно переносят отмеченные участки силикагеля в пробирку с притертой пробкой, добавляют 5 мл метанола Р, встряхивают в течение 15 мин, центрифугируют и измеряют поглощение прозрачной надосадочной жидкости в кювете толщиной 1 см при максимуме около 256 нм. Для приготовления контрольного раствора аналогичным образом обрабатывают соответствующего размера участки силикагеля, соседствующие с ранее извлеченными участками. Готовят раствор Б следующим образом растворяют 0,14 г испытуемого вещества в достаточном для получения 100 мл количестве уксусной кислоты ( — 90 г/л) ИР и разводят 200 мкл этого раствора до 50 мл метанолом Р. Поглощение элюированного раствора А не должно быть больше поглощения раствора Б. [c.78]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология