Перепечатывание колоний метод

Самыми распространенными методами непрямого выявления таких мутантов являются случайный поиск соответствующих колоний и метод перепечатывания колоний с одной чашки на другую (метод отпечатков). Оба метода требуют проверки большого числа бактериальных колоний. По существу, эти методы отличаются только способом осуществления этой проверки. В методе случайного поиска одномоментно со среды на среду переносится одна колония — пока не обнаружится вызванное мутацией нарушение. Это утомительная и требующая больших затрат времени процедура. Поэтому иногда такой метод называют подходом в лоб . Один из способов повышения вероятности выявления нужного мутанта в лоб этим методом — использование в цач - [c.35]

Рис. 13.2. Метод перепечатывания колоний с чашки на чашку (метод отпечатков), предназначенный для отбора ауксотрофных мутантов исследуемого штамма, А. Колонии в исходной чашке, выращенные на полной среде (чашка 1), Б, В. Перепечатывание колоний на бархат с исходной чашки (чашки 1), Г. Отпечаток колоний с бархата на агар в чашке с минимальной средой (чашке 2), Д. Отпечаток колоний с бархата на агар в чашке с полной средой (чашке 3), Е. По истечении определенного срока сравнивают рост колоний в чашках 2 и 3 для выявления колоний ауксотрофных мутантов.

Рис. 8.1. Метод перепечатывания колоний, при котором бактерии быстро переносят i с одной питательной среды на другую. На рисунке схематически изображена последовательность операций, позволяющая идентифицировать ауксотрофные мутанты, способные к росту на исходной обогащенной среде, но не образующие колоний на новой (минимальной) среде. [Stent G. S., alendar R., (1978) Mol. Geneti s,

Во всех таксономических исследованиях следует учитывать возможность ошибки, связанной с тестированием, и, как бы ни подходил тот или иной тест в конкретном случае, от него следует отказаться, если он характеризуется плохой воспроизводимостью или часто приводит к ошибкам в интерпретации результатов. Если число ненадежных тестов составляет лишь небольшую часть общего числа тестов, используемых для нумери-чсского анализа, то общий результат можно считать надежным, т. е. статистически достоверным. Чем большее число признаков включено в анализ, тем более точным будет общее представление о фенотипе организма. Если тестов слишком мало (например, менее 40), результаты могут быть статистически недостоверными. Принято считать, что оптимальное количество признаков для нумерической таксономии — от 100 до 200. Такое количество можно с успехом тестировать в большинстве лабораторий, особенно при наличии отработанных методов ускоренного получения и учета результатов, например, с помощью многоточечной инокуляции в лунки или на пластинки агара (разд. 20.2.4) и перепечатывания колоний с чашки на чашку (разд. 20.2.5). [c.101]

Для перепечатывания реплик к чашке с питательным агаром, на котором растут небольшие колонии бактерий, прижимают стерильную бархатную подушечку, после чего ее используют для перепечатывания реплик в чашки с минимальной средой. Исходные колонии и колонии, образовавшиеся в чашках-репликах (с минимальной средой), сравнивают, после чего отбирают колонии ауксотрофов (которые не росли на минимальной среде). На втором этапе ауксотрофы можио тем же методом реплик перенести в чашки с минимальной средой, содержаш,ей различные питательные добавки (аминокислоты, пурины, пиримидины, витамины и т. д.). Отбор становится проще при предварительной обработке пенициллином (дополнение 7-Г) облученных клеток в минимальной среде. Пенициллин убивает растущие клетки, тогда как ауксотрофы, которые не растут на минимальной среде, выживают. В дальнейшем производят разрушение пенициллина, добавляя пенициллиназу (дополнение 7-Г). В результате этих операций процентное содержание ауксотрофных мутантов в суспензии значительно увеличивается [3]. [c.188]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология