Питательный бульон и агар

Двухфазная система в принципе состоит из толстого слоя затвердевшей питательной среды, покрытого тонким слоем питательного бульона (рис. 9.1). Чтобы приготовить такую систему, частично заполняют сосуд горячей средой, содержащей 2—3% агара. После затвердения агарового слоя на него наливают с соблюдением правил асептики небольшое количество питательной среды, засевают ее и инкубируют. Для выращивания аэробов культуральный сосуд помещают на качалку, что обеспечивает хорошее снабжение кислородом и перемешивание среды во время инкубации. Культура развивается в жидкой части среды, но постепенно клетки диффундируют в твердую питательную среду и значительно концентрируются. Таким способом можно получить популяции с плотностью более 10" клеток/мл, причем данный метод пригоден для выращивания бактерий любого типа. [c.364]

Чашки, в которой ставилась проба с бумажными дисками, отбирают колонии разных размеров, наносят их штрихами на минимальный агар для очистки от посторонних мутантов, выращивают в питательном бульоне или делают посев соответствующих разведений на минимальный агар. После 2—3 сут инкубации при 37 °С определяют относительные размеры колоний. Частичные ревертанты и супрессированные штаммы, как правило, имеют колонии значительно меньших размеров. [c.34]

Для выявления медленно растущих загрязняющих микроорганизмов образцы (обычно 0,5—1 мл) Культуральной среды, клеточной суспензии или трипсина вносят в серии питательных бульонов (20 мл) или на питательный агар. Величина инокулята выбирается произвольно, но при очень низком содержании бактериального загрязнения она может оказаться лимитирующим фактором. [c.110]

Обычно популяции клеток культивируют в жидкой среде. Питательный бульон готовят, растворяя необходимые питательные вещества в воде, доводят pH среды до нужного значения, и стерилизуют среду в автоклаве паром высокого давления. В зависимости от объемов используемой среды применяют самые различные емкости — от пробирок с ватными пробками до колб, бутылей разного размера и громадных чанов на десятки тысяч литров (используемых в пивоварении и фармакологической промышленности). В питательную среду вносят небольшое число клеток и инкубируют при постоянной температуре. Если для организмов необходим кислород (а он необходим почти всегда), то культуру инкубируют на механической качалке или через нее пропускают стерильный воздух. Клетки выращивают также на поверхности агара изолированными колониями или, если они посеяны достаточно густо, единым слоем. [c.87]

В среде, содержащей все необходимые питательные вещества, микроорганизмы растут и размножаются. Если к жидкой питательной среде, например бульону или пивному суслу, добавить агар или желатин, она затвердевает. В пробирках и чашках Петри на поверхности твердой питательной среды невооруженным глазом можно наблюдать как образуются и растут [c.10]

В лабораториях часто применяют природные питательные среды. Для культивирования некоторых микроорганизмов используют мясной отвар в виде мясо-пептонного бульона или мясо-пептонного агара, солодовое сусло, молоко и т. п. [c.53]

Непосредственный посев материала на питательные среды (мокрота, гной) обычно не дает положительного результата, так как в присутствии сапрофитов, особенно гнилостных микроорганизмов, рост пневмококков подавляется. Поэтому гной и мокроту предварительно обрабатывают (выбирают комочки, растирают их в фарфоровой ступке, добавляя 1 мл ИХН) и для проведения биопробы вводят внутрибрюшинно белым мышам. Они очень чувствительны к пневмококку и погибают от септицемии через 18 — 72 ч. Труп мыши вскрывают, кровь из сердца, кусочки внутренних органов и перитонеальную жидкость сеют в чашку с кровяным агаром и в пробирку с сывороточным бульоном для подращивания. Колонии пневмококка напоминают колонии стрептококка мелкие, почти плоские, непрозрачные, с ореолом зеленого цвета, реже полного гемолиза. Характерно вдавление в центре колонии. [c.114]

При производстве санитарно-бактериологического исследования воды пользуются жидкими и плотными питательными средами. Из жидких сред употребляются мясо-пептонный бульон и глюкозо-пептонная среда Эйкмана. Наиболее употребительными плотными средами являются мясо-пептонный агар, фуксин-сульфитная среда Эндо и розоловый дифференциальный агар Киченко. [c.184]

Чтобы приготовить среду менее плотной консистенции, предназначенную для глубинного посева, надо в 100 мл воды расплавить 5 г сухого питательного агара и добавить 50 мл готового мясо-пеп-тонного бульона. [c.187]

Для приготовления питательных подкладок можно использовать асбестовые фильтрующие пластинки типа Зейтца ( Ф ) размером 300 мм, ГОСТ 480-1 или обычную листовую фильтровальную бумагу, сложенную в 8—10 раз. Из указанного материала вырезают диски диаметром 40—45 мм, несколько больщнм, чем диаметр мембранного фильтра. Диски стерилизуют в сушильном щкафу ири температуре 100—120"С. Среду для пропитки подкладок готовят следующего состава на 100 мл питательного бульона Хоттиигера добавляют лактозы 2 г, агар-агара 0,1 г, 0,17о спиртового раствора розоловой кислоты 0,2 мл, расплавляют при нагревании и стерилизуют при 112°С 12 мин. После охлаждения до 70—60°С асентично добавляют 10 мл 2% водного раствора ТТХ. [c.158]

В санитарно-бактериологических исследованиях, как правило, возникает необходимость быстро определить ферментацию одного или двух углеводов, но многими штаммами, выделенными в первичных посевах на элективных средах. В этих случаях более пригоден способ, предложенный А. П. Каланчой (1974) с изолированной заливкой дисков с посевами агаром. Изучаемую колонию эмульгируют в 0,5 мл питательного бульона, вносят пастеровской пипеткой в места, заранее отмеченные карандашом на дне чашки. Затем на места посевов наносят УБД. Для улавливания газа каждый диск заливают расплавленным и остуженным до 50—45°С агаром. Изолиро- [c.203]

Двуслойная комплексная среда для определения подвижности бактерий, лизиндекарбоксилазы, продукции индола [Ссл слл, 51сс1, 1065 цит, по Г. П. Калннс, 1373). 0,2% питательный агар разливают в пробирки столбиком высотой 4—5 см. Состав среды для верхнего слоя питательного бульона 100 мл, тиосульфата натрия 0,05 г, лизина 0,5 г, фосфата калия двуосновного 0,1 г, фосфата калия одноосновного 0,04 г, 1,6% щелочного раствора бромтимолового синего 0,3 мл. После стерилизации и охлаждения агара в пробирки стерильно наслоить 2 мл среды для верхнего слоя. [c.234]

Бактерии получают как при поверхностном (на питательном агаре в чашках Петри), так и при глубинном (например, в питательном бульоне в колбах) культивировании. В условиях массового производства предпочтение отдают глубинному культивированию в ферментерах. На рисунке 46 (см. стр. 306) показан процесс получения спорового препарата В. thuringiensis и дальнейшей обработки биомассы способом распылительной сушки. [c.153]

Методика. Растущую культуру Е. oli, содержащую 2-107 клеток в 1 мл, заражают фагами Т2Л и Т2г в среднем по 5 частиц каждого фага на клетку через 5 мин, в течение которых происходит адсорбция фагов на клетках-хозяевах, зараженную культуру разбавляют в Ю раз питательным бульоном и инкубируют на протяжении 60 мин. Полученный урожай фага высевают для подсчета стерильных пятен на чашки с агаром, засеянным смешанной культурой индикаторных бактерий Е. oli (Tto - - Tto ), на которых можно учитывать все четыре генотипа. [c.288]

Для продолжительного поддержания культуры нужен кровяной агар. В качестве жидкой среды рекомендуется питательный бульон, обогащенный 0,3 /о-ным дрожжевым экстрактом, 0,1%-ным солянокислым цистеииом, 1%-иой глюкозой и 5%-иой асцитической жидкостью человека. В случае другого штамма Euba terium при добавлении субстратных количеств аргинина к основной среде с пептоном рост значительно стимулируется [207]. [c.225]

К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это триптические гидролизаты рыбных продуктов или казеина, из которьк готовят жидкую среду—питательный бульон и плотную —питательный агар. Такие среды служат основой для приготовления более сложных сахарных, кровяных, сывороточных и других комбинированных, удовлетворяющих пищевые потребности более требовательных патогенных бактерий. В качестве основных иногда используют синтетические питательные среды, приготовленные из навесок определенных минеральньпс солей, к которым добавляют аминокислоты, витамины, глюкозу. К ним также можно добавлять пептон, кукурузный или дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Синтетические среды чаще всего применяют в научно-исследовательской практике, а синтетические среды с упомянутыми [c.43]

Кровяные, сывороточные и асцитические среды. К расплавленному и остуженному до 45—50°С питательному агару стерильно добавляют 5—10% дефибриниро-ванной крови или в таком же количестве сыворотку крови, или 25% асцитической жидкости, хорошо перемешивают и сразу же разливают в чашки Петри, пробирки или др ую лабораторную посуду. Для приготовления жидкой среды такие же количества сыворотки или асцитической жидкости добавляют к питательному бульону. [c.45]

Постановка флюктуационного теста Лурия и Дельбрюка для выявления частоты спонтанных мутаций, возникающих в бактериальной популяции без предварительного воздействия какого-либо мутагена. Для определения частоты Str спонтанных мутантов в культуре Е. oli, чувствительной к стрептомицину, ее засевают одновременно в одну пробирку с 10 мл питательного бульона и в 10 пробирок с 1 мл той же среды так, чтобы в каждой пробирке содержалось примерно 100—1000 клеток. После суточной инкубации посевов из каждой пробы делают высевы на чашки Петри с питательным агаром, содержащим 100 ЕД стрептомицина. Пробы из 1-й пробирки ( общей культуры) в объеме 0,1 мл засевают на 10 чашек, пробы из 10 пробирок ( независимых культур) в объеме 0,1 мл —на отдельные чашки. Таким образом, делают посевы на 20 чашек, которые инкубируют в течение 18-20 ч (рис. 39). [c.70]

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на чашки с питательным агаром, кровяным агаром и в пробирку с питательным бульоном. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18—20 ч. В бульоне культура Вас. anthra is растет в виде хлопьевидного осадка на агаре вирулентные штаммы образуют колонии в R-форме, имеющие под малым увеличением микроскопа вид львиной гривы или головы медузы . Авирулентные или слабовирулентные бактерии образуют S-формы колоний. [c.208]

Косяки с обогащенным питательным агаром Обогащенный питательный бульон 17о-ный раствор ВаС1г 1 %-ный раствор H2SO4 X. ч. [c.210]

Микробиологический контроль эксперимента состоял в учете числа жизнеспособных клеток в биопрепарате, в контрольных и опытных сосудах на питательных средах - мясопеп-тонный агар (МПА), мясопептонный бульон (МПБ) и среда Раймонда (для углеводородокисляющих бактерий) - посредством метода предельных разведений. [c.201]

Определение бактериоциногеновара. Определение циногенной активности микроорганизмов также проводят для внутривидовой дифференциации микроорганизмов с эпидемиологической целью. На чашки с соответствующей питательной средой сеют уколом суточную агаровую или 4-часовую бульонную исследуемую культуру и помещают на 48 ч в термостат при 37 °С. Инактивируют рост макроколоний хлороформом или УФ-лучами. Затем заливают поверхность агара 4 мл 0,7%-го МПА с 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры эталонного штамма, чувствительного к бактериоцинам данного вида. Посев помещают в термостат при температуре 37 °С на сутки. Наличие зон задержки роста эталонных культур свидетельствует о продукции бактериоцинов. Использование эталонных продуцентов бактериоцинов и штаммов, чувствительных к соответствующим бактериоцинам, позволяет установить условный или точный бактериоциногеновар изучаемой культуры. [c.40]

Бактериологическое исследование. Менингококк растет на специальных питательных средах с нативным белком (бульон или агар с сывороткой, асцитической жидкостью или кровью). Для исследования материала, обильно контаминированного нормофлорой (мазки из носоглотки), применяют посев на плотные селективные среды с антибиотиками (ристомицином, ванкомицином, ко-листином и нистатином). Спинномозговую жидкость лучше сеять после центрифугирования (3000 об/мин в течение 5 мин). Засевают 2— 3 капли полученного осадка на поверхность подогретой пи- [c.117]

Среда Файлдса. 150 мл 0,85%-го раствора хлорида натрия, 6 мл химически чистой соляной кислоты (относительная плотность 1,13), 50 мл дефибринированной крови лошади или барана и 1 г пепсина смешивают до растворения и оставляют при 55 °С на 24 ч, время от времени взбалтывая (5 — 6 раз). Жидкость загустевает, напоминая по консистенции полужидкий агар. По окончании переваривания прибавляют 12 мл 20 % раствора гидроксида натрия, и перевар снова становится жидким. Доводят pH среды до 7,6, а затем по каплям добавляют концентрированную соляную кислоту до тех пор, пока pH не станет 7,2 —7,0. После этого в среду добавляют 0,5% хлороформа, оставляют на 2 — 3 дня, периодически взбалтывая, затем разливают в ампулы и запаивают. Для приготовления питательной среды к стерильному бульону или расплавленному питательному агару асептически прибавляют 5 % пептического перевара Файлдса. [c.176]

Бактериологическое исследование. Выделение чистой культуры и ее идентификация необходимы для подтверждения диагноза листериоза. Листерии растут на простых питательных средах, но более интенсивный рост отмечается на кровяном агаре или средах, обогащенных глюкозой, глицерином, дрожжевым экстрактом, сывороткой, печеночной тканью. Материал засевают на плотные среды. Для подавления роста сопутствующих микроорганизмов используют специально разработанные селективные среды с антибиотиками и/или красителями, хлоридом лития, фенилэтано-лом (агары Оксфордский, PAL САМ яла др.). Те же добавки используют в составе бульонных сред для обогащения исследуемого материала (накопление листерий ведут при 30 °С в течение 24 — 48 ч). Иногда используется также метод холодового обогащения (материал выдерживают при 4 °С в течение 10 — 50 сут). Посевы на плотных средах инкубируют при 37 С до 7 сут. [c.179]

Бактерии, принадлежащие к различным классам или семействам, по-разному относятся к питательным средам или субстратам. На универсальных питательных средах мясопептоппом бульоне (МПБ), сладком пивном сусле, картофельном отваре, либо на этих средах, уплотненных агар-агаром,— мясо-пептопный агар (МПА), хорошо размножается большинство бактерий. При росте на поверхности плотных питательных сред (МПА, сусло-агар) преобладающее большинство изученных бактерий образуют скопления [c.15]

Можно также с мембранных фильтров сделать отпечатки на плотных элективных средах (Эндо, висмут-сульфитный агар, среда Плоскирева или Левина). Фильтры, снятые с плотной среды, после отпечатков помещают в среды накопления (желчный бульон и др.) с последующим высевом на среду Эндо через 24—48 часов. После отпечатков с фильтра материал распределяют шпаделем равномерно по поверхности питательной среды, как описано выше. [c.151]

Количественный высев на питательный агар из бульона Хоттингера с ТТХ через 18 ч инкубации показал, что концентрации ТТХ 0,005% и 0,01% почти полностью тормозят рост как грамположительных, так и грамотрица- [c.150]

Стерильную бумагу пропитывают в течение около 3 ч стерильной питательной средой (на 100 мл мясо-иептои-ного бульона Хоттингера 2 г лактозы, 0,1 г агара и 11 мл 2% водного раствора ТТХ). Бумагу сушат в сушильном шкафу при 40—50°С, после чего нарезают полоски нужных размеров. Готовые индикаторные бумажки имеют бледно-кремовый или слегка розовый цвет хранят индикаторные бумажки в полиэтиленовых пакетах или в стерильных чашках Петри, защищая от света. [c.165]

Для ускорения роста клостридий необходимы высокопитательные основы сред. Используют бульоны Вейн-берга. Попе, Хоттингера, однако лучшими являются казеиново-грибная среда и готовая сухая китово-печеночно-дрожжевая (КПД) (цит. по Г. И. Сидоренко, 1969). Сравнительными исследованиями, выполненными Т. 3. Артемовой по оценке скорости образования черных колоний на средах с питательными основами КПД, АКЖ (автолизат кильки, желатин), мясо-пептонного бульона (МПБ) и сухого питательного агара Дагестанского НИИ питательных сред из гидролизата рыбы, было показано, что на л<елезо-сульфитной среде, приготовленной на основе сухого питательного агара из гидролизата рыбы, черные колонии начинали образовываться через 4—5 ч, а пол- [c.181]

А. И. Мельникова (1974) предложила выращивать посев на мембранном фильтре на 1,5% питательном агаре в течение 18 ч с последующей заливкой на 20 мин 0,1% бульонным раствором ТТХ для окрашивания газона Е. oli. Бляшки четко видны на розово-красном газоне Е. oli и бело-розовом мембранном фильтре. [c.193]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология