Градиент плотности создание с помощью смесителе

Линейный градиент плотности раствора s l можно префор-мировать с помощью такого же смесителя градиента, какой был описан ранее при рассмотрении градиентов плотности сахарозы. Тяжелая жидкость должна иметь плотность р -1-Др/2, а легкая ро —Др/2. Обязательно надо позаботиться о том, чтобы площадь основания цилиндра, содержащего тяжелую жидкость (обычно смесителя), была больше площади основания второго цилиндра (резервуара) в соответствии с отношением плотностей двух жидкостей. Для приведенного выше примера это отношение равно 1,82 1,58=1,15. Можно рассчитать, что для создания такого соотношения площадей (в случае цилиндров равных диаметров) в резервуар придется вставить палочку, диаметр которой равен 0,36 диаметра цилиндра. [c.252]

Образец вносят либо в виде узкой зоны, либо распределяют по всему объему колонки при создании градиента. Фракционирование идет наиболее быстро и эффективно в том случае, когда образец внесен вблизи зоны фокусирования. Для внесения в виде узкой зоны образец (при создании ступенчатого градиента) растворяют в одной или двух промежуточных фракциях рабочего раствора или (при создании плавного градиента) в рабочем растворе промежуточной плотности, вытекающем из смесителя. Плотность зоны образца не должна превышать плотность нижнего слоя рабочего раствора. Плотность слоев можно определить ориентировочно с помощью обычного сахариметра. При распределении образца по всему объему колонки белок растворяют в разбавленном, а иногда и в концентрированном растворах, приготовленных для построения градиента. В этом случае раствор с образцом следует отделить от верхнего и нижнего электролитов, соответственно разбавленным или концентрированным рабочими растворами. [c.310]

Тем не менее, ввиду широкой распространенности метода ИЭФ в жидкостных колонках следует рассмотреть его особенности. Процесс ИЭФ белков здесь протекает в растворе амфолитов без носителя. Опасность конвекционного перемешивания слоев жидкости блокируется созданием по высоте колонки достаточно крутого линейного градиента плотности раствора сахарозы, которая не мешает формированию градиента pH и фокусированию белков. Колонку заполняют с помощью перистальтического насоса из смесителя градиента того же типа, что используется для приготовления линейных градиентов плотности растворов сахарозы для ультрацентрифугирования [Остерман, 1981]. На дно колонки амфолиты поступают в 50%-ном растворе сахарозы, к ее верхнему концу концентрация сахарозы снижается до 5%. [c.67]

В большинстве случаев для создания плавного градиента плотности пользуются специальным устройством. Оно состоит из двух цилиндрических сосудов строго определенного одинакового диаметра, сообщающихся друг с другом в нижней части с помощью стеклянной трубки с контрольным клапаном, что позволяет регулировать пропорции, в которых смешивается содержимое обоих сосудов. Один из них (смеситель) снабжен мешалкой и имеет выходное отверстие, через которое раствор стекает в центрифужные пробир- [c.50]

Сначала амфолиты-носи-тели с выбранныьм диапазоном pH смешивают с растворами, используемыми для создания градиента плотности. При работе с амфолином фирмы LKB его конечная концентрация составляет обычно 1%. Для получения необходимого градиента плотности в о)писанном выше приборе в нижнюю часть колонки наливают 50%-ную (масса/объем) сахарозу, а в верхнюю1 7о Ную или чистый раствор амфолина. Это делают с помощью градиентного смесителя, а при его отсутствии наслаивают друг на друга растворы сахарозы с постепенно убывающей плотностью. Исследуемую пробу можно смешать с одним из таких слоев. При использовании смесителя ее добавляют либо к легкому, либо к тяжелому раствору сахарозы. Кроме того, пробу можно нанести поверх сформированного градиента. После этого электродные сосуды наполняют соответствующими растворами. В катодный сосуд наливают разбавленный раствор этанолами-на или другого сильного органического основания (в случае же сильно основных белков используют гидро ксид натрия), а в анодный сосуд — разбавленную серную или фосфорную кислоту. [c.132]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология