Кролик, анестезия

Заражение в переднюю камеру глаза — нечасто применяемый способ. Животное фиксируют спиной кверху. В конъюнктивальную полость закапывают 1 — 2 капли 2%-го раствора новокаина или другого анестетика. Об анестезии глаза свидетельствует исчезновение роговичного рефлекса. Помощник фиксирует голову кролика к поверхности стола на боку и тупым концом пинцета выводит глазное яблоко из глазницы со стороны ее внутреннего угла. Левой рукой захватывают глазное яблоко за конъюнктиву с помощью глазного пинцета, а тонкой иглой, находящейся в правой руке, прокалывают роговицу параллельно радужной оболочке. Иглу медленно продвигают к центру роговицы, пока в ее просвете не окажется жидкость. После истечения 2—3 капель жидкости на иглу надевают шприц и в переднюю камеру глаза вводят 0,05 — 0,1 мл инфицирующего материала. [c.52]

При использовании денатурированных ДСН антигенов элюируемых из геля, необходимо, чтобы гель содержал макси мально возможное количество белка. Это количество колеб лется от 0,1 до 1 мг/мл в зависимости от стабильности гибрид ного белка и того, насколько он был очищен до электрофореза Животные плохо переносят акриламид, и поэтому антиген еле дует вводить в минимальном объеме. Измельчите срез геля пропустив его несколько раз через шприц. Смешайте пять объ емов полного адъюванта Фрейнда (Gib o) с четырьмя объема ми геля с помощью двух шприцов, соединенных переходником из нержавеющей стали. (Такой переходник можно сделать, спаяв вблизи оснований две стальные иглы № 18 для инъекций.) Полностью эмульгируйте антиген так, чтобы суспензия имела стабильную консистенцию, и сделайте инъекцию зафиксированному или находящемуся под анестезией кролику (весом 2,2— 2,7 кг) внутримышечно в несколько участков тела. Через 14 и 21 день повторите инъекции раствором антигена в неполном адъюванте Фрейнда. На 28-й день возьмите у животного кровь из ушной вены ( -(20 мл, что не представляет опасности для жизни животного). Кровь можно брать еженедельно до тех пор, пока животное остается здоровым, а дополнительные введения антигена можно проводить примерно каждые шесть — восемь недель. [c.163]

При использовании антигенов, полученных с помощью хроматографических методов и поэтому, по крайней мере частично, растворимых, смешайте 0,2—2,0 мг интактного гибридного белка, растворенного в 1 мл физиологического раствора или PBS с 1,25 мл полного адъюванта Фрейнда и получите гомогенную эмульсию, как описано выше. Сделайте зафиксированному кролику подкожные инъекции в несколько мест. Повторите инъекции 0,2—1,0 мг антигена в неполном адъюванте Фрейнда на 14-й и 21-й день и с 28-го дня начинайте брать кровь. Для определения титра антител берите кровь еженедельно и повторите введение 0,2—1,0 мг антигена, когда титр антител начнет уменьшаться. После получения достаточного количества антисыворотки, пока титр антител остается достаточно высоким, возьмите под анестезией кровь из сердца кролика. [c.163]

Некоторые авторы рекомендуют вводить антиген в смеси с адъювантом (подкожно) одновременно в область затылка (0,4 мл) и в обе задние лапы близ ахиллесова сухожилия (по 0,3 мл). В последние годы часто практикуется рассредоточенная подкожная инъекция — одновременно в 20 местах на спине животного. При введении раствора кожу следует слегка оттянуть так, чтобы игла под ней свободно перемещалась. Вводят раствор медленно, кожу смазывают иодом, но шерсть не выстригают— она предохраняет место инъекции от охлаждения, что способствует всасыванию антигена. Иногда, в случае необходимости экономии антигена, используют микровариант иммунизации с введением по 10—50 мкл 5%-ного белкового раствора по приведенной выше схеме в подушечки всех четырех лап кролика. Эту операцию производят с помощью шприца Гамильтона. Она очень болезненна и требует анестезии. В любом варианте иммунизация занимает несколько недель. [c.106]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология