Белковые растворы III

Однако при каком-то pH степень диссоциации аминогрупп и степень диссоциации карбоксильных групп приобретают одинаковое значение тогда макромолекулы белка становятся электронейтральными, так как посылают в раствор равные количества ионов Н+ н ОН . Для них, как и для частиц гидрозолей, наступает изоэлектрическое состояние положительные заряды одних ионогенных групп компенсируются отрицательными зарЯ дами других групп. В изоэлектрическом состоянии свойств, белковых растворов резко меняются. [c.207]

При выделении фермента используют метод фракционирования белков путем изменения pH. Очистка фермента на этой стадии достигается за счет денатурации белков, которые отделяют центрифугированием. Изменение pH белкового раствора следует осуществлять осторожно, по возможности не использовать сильные кислоты и щелочи. Рекомендуется добавлять уксусную кислоту, трис-буфер, карбонат натрия и др. Добавление соответствующего буфера или кислоты проводят на холоде. Их вносят по каплям, по стенке сосуда, при постоянном перемешивании. После нейтрализации раствора проводят короткую инкубацию при 25—30° С, чтобы перед центрифугированием произошла полная агрегация денатурированных белков. [c.199]

Правда, в белке имеются различные кислые и основные группы, но формула (V. 5) остается приближенно правильной, если отнести значения Ка Кв наиболее сильным группам. Для полного определения молярного содержания различных ионо генных групп в белке и их констант диссоциации измеряют ход поглощения Н+ - и 0Н - ионов в широком интервале pH (примерно, pH 2—12), прибавляя к белковому раствору различные количества кислоты или щелочи и измеряя равновесное pH водородным или стеклянным электродом. При помощи этих кривых титрования белков определяют также максимальную емкость поглощения кислот и оснований, т. е. максимальное число зарядов на белковой молекуле. Например, для сывороточного альбумина человека при pH = 2 эта величина составляет 7]о = 100 элементарных зарядов на молекулу белка. [c.114]

Денатурирующими агентами могут быть различные химические факторы кислоты и щелочи, изменяющие реакцию среды белковых растворов, выходящую за пределы значения pH от 3 до 10, т. е. лежащего вне зоны устойчивости белковых молекул разные легко гидратирующиеся соли, которые могут не только высаливать белки, по и денатурировать их в этом отношении остается справедливым лиотропный ряд для анионов Гофмейстера, в котором роданид и близлежащие к нему анионы вызывают денатурацию, в противоположность сульфатному концу ряда органические растворители, например ацетон, этиловый и метиловый спирты и др., снимающие водную оболочку у белков соответствующие окислители, производящие разрыв дисульфидных мостиков в белковой молекуле гуанидин и карбамид (мочевина), изменяющие количество водородных связей и, следовательно, конфигурацию белка (как бы производят плавление его комплексной спиральной структуры) и др. [c.209]

Тизелиусом был сконструирован прибор, принципиальная схема которого изображена на рис. 81. Основная часть прибора состоит из широкой и-образной трубки (<3), нижняя и средняя части которой заполняются исследуемым раствором белков, а верхняя — буферным раствором. В средней части прибора имеется специальное приспособление (2) для смещения отдельных частей трубки на шлифах в горизонтальном направлении. При подготовке прибора, к опыту после заполнения трубки белком верхняя часть ее смещается, и избыток белка может быть удален. После удаления избытка белкового раствора верхняя часть [c.132]

Предположим, что мы имеем белковый раствор, в котором имеются три фракции, различающиеся между собой электрофоретическими скоростями и, и и и", причем электрофоретическая скорость и" имеет наибольшую величину, а и наименьшую. На схеме рис. 82 эти фракции обозначены соответственно черными и белыми кружками. Фракция промежуточной скорости и обозначена наполовину зачерненным кружком. После удаления избытка исходного белка и заполнения верхней части трубки буферным раствором (рис. 82, а) прибор устанавливается в исходное положение (рис. 82, б) и включается электрическое поле. Направление поля таково, что частицы белков, имеющих одинаковый знак заряда, но различную скорость смещения, передвигаются слева направо. При этом частицы, имеющие наибольшую [c.133]

Неудивительно, что свойства белковых растворов заметно изменяются при переходе через изоэлектрическую точку, по- [c.299]

Абсолютные значения квантовых выходов флуоресценции или фосфоресценции можно рассчитывать по данным измерений в одних и тех же произвольных единицах интенсивности поглощаемого и испускаемого света. Должны быть сделаны поправки на различия в пространственном и спектральном распределениях возбуждающего света и испускаемого излучения, необходимо также знать кривую спектральной чувствительности фотоприемника. Направленный возбуждающий пучок можно рассеять для сравнения с изотропным испускаемым излучением с помощью матовой поверхности или, лучше, с помощью белкового раствора, рассеивающую силу которого можно рассчитать. Процедура коррекции спектрального распределения испускаемого излучения может быть упрощена. Для этого испускаемое излучение образца и рассеянный возбуждающий свет надо последовательно направить на подходящее флуоресцирующее вещество, которое преобразует все падающее излучение в свой собственный спектр флуоресценции с постоянным [c.192]

Экспериментальное определение изоэлектрической точки белковых растворов, как и определение изоэлектричеекого состояния лиофобных золей, может быть произведено прямым или косвенным методами. [c.340]

В связи с этим при построении калибровочного графика для определения белка по Лоури в растворитель для стандартного белка необходимо включать все компоненты, содержащиеся в анализируемых пробах. В некоторых случаях целесообразно предварительное осаждение белков из растворов, например трихлоруксусной кислотой, с последующим растворением их в щелочных растворах, или очистка белковых растворов от низкомолекулярных компонентов путем диализа или гель-фильтрации на сефадексе G-25. [c.81]

Приготовление исследуемых белковых растворов. Сыворотка крови. Кровь в количестве 4—6 мл, взятую из уха кролика, обрабатывают, как описано на с. 112. Сыворотка перед употреблением может храниться при низкой температуре (2—4 °С) не более 20 ч. [c.115]

Тепловая обработка. К отфильтрованному супернатанту добавляют 1 М имидазол до конечной концентрации 20 мМ. Проверяют pH белкового раствора и, если нужно, доводят его значение до 7,0 СНзСООН или аммиаком. На водяной бане (80°С) нагревают белковый раствор до 60° С, инкубируют 5 мин при постоянном перемешивании. После этого ргствор быстро помещают в лед и охлаждают до 10" С. Выпавший осадок отделяют центрифугированием (20 мин, 10 000 g). [c.272]

Сначала разрушают стенки дрожжевых клеток путем механической, щелочной, кислотной или ферментативной обработки с последующей экстракцией гомогенной дрожжевой массы подходящим органическим растворителем. После такой очистки от органических и минеральных примесей дрожжевой продукт обрабатывают щелочным раствором для растворения белков. Далее белковый раствор, отделенный центрифугированием от оставшейся массы дрожжей, подвергают диализу. Очищенные от низкомолекулярных примесей белки осаждают, высушивают и используют в качестве белковых добавок в различные пищевые продукты сосиски, паштеты, мясные и кондитерские начинки. Белки дрожжей применяют также при получении искусственного мяса. Для этого их нагревают с последующим быстрым охлаждением или продавливанием белковой пасты через отверстия малого диаметра. В белковую пасту добавляют полисахариды и другие компоненты. [c.13]

Белковые растворы, мутные фруктовые и ягодные соки [c.20]

Таким образом, как в кислой, так и в щелочНой среде молекулы белка облад кут нескомпенсированным зарядом разного знака. Регулируя pH белкового раствора, можно добиться перевода белка в изоэлектрическое состояние. [c.185]

Этот способ был испытан в промышленной стадии на водных экстрактах шрота из сои, рапса, сока из листьев люцерны, красных вод (стоков) крахмального производства. Он оказался весьма эффективным для разбавленных белковых растворов благодаря высокой пропускной способности и возможности предварительно концентрировать белки. [c.448]

Устойчивость белковых растворов также сильно зависит от pH среды. Наличие зарядов на зелковой молекуле в кислой или щелочной области от изоэлектрической точки приводит к повышению [c.192]

В соответствии с этим механизмом при подогреве белкового раствора он становится непрозрачным (мутным) или прозрачным. [c.519]

Пример колбаса типа страсбургской. Состав постная говядина— 37 %, жир и шейная часть туши (50 50) — 37, лед — 20, белковый раствор с порошком при содержании в нем 90 % белка (в 5 частях воды) — 6 %. [c.637]

Внешние проявления денатурации сводятся к потере растворимости, особенно в изоэлектрической точке, повышению вязкости белковых растворов, увеличению количества свободных функциональных 8Н-групп и изменению характера рассеивания рентгеновских лучей. Наиболее характерным признаком денатурации является резкое снижение или полная потеря белком его биологической активности (каталитической, антигенной или гормональной). При денатурации белка, вызванной 8М мочевиной или другим агентом, разрушаются в основном нековалентные связи (в частности, гидрофобные взаимодействия и водородные связи). Дисульфидные связи в присутствии восстанавливающего агента меркаптоэтанола разрываются, в то время как пептидные связи самого остова полипептидной цепи не затрагиваются. В этих условиях развертываются глобулы нативных белковых молекул и образуются случайные и беспорядочные структуры (рис. 1.12). [c.47]

Важной для клинической практики является проблема парентерального белкового питания. Как известно, белки пищи могут быть использованы организмом человека только после предварительного переваривания и расщепления их в пищеварительном тракте до свободных аминокислот. Введение белков парентерально, т.е. минуя кишечный тракт, приводит к развитию сенсибилизации (повышенная чувствительность организма к чужеродному белку), а повторное введение белков может вызвать анафилаксию—шоковое состояние. Между тем такой метод введения белка иногда вынуждены использовать, в частности, в хирургической практике при непроходимости пищевода в результате ожогов и отравлений, при тяжелых раковых поражениях пищевода и желудка, после операций на желудке и кишечнике и др. Для предотвращения тяжелых осложнений, возникающих после парентерального введения белковых растворов, в настоящее время для белкового питания используют гидролизаты белков (смесь аминокислот). Введение аминокислотной смеси не вызывает аллергических реакций, поскольку свободные аминокислоты не обладают в отличие от белков ни видовой, ни тканевой специфичностью. Длительные наблюдения больных в клинических условиях свидетельствуют, что потребности организма в белках могут быть полностью компенсированы введением смеси аминокислот. Нельзя не отметить, однако, ряд побочных отрицательных реакций организма в ответ на введение гидролизатов белков, в частности возможность нарушения нормальной психической деятельности. [c.417]

Истоки производства текстурированных растительных белков по технологии варки-экструзии сводятся к патентам, полученным Ансоном и Пэйдером [4]. Принцип описанного в этих патентах процесса основан на способности некоторых белковых растворов к образованию геля после соответствующей термообработки. Первый этап одного из вариантов этого процесса состоит в приготовлении предшественника геля путем суспендирования в воде очищенных белков из семян сои или арахиса с концентрацией в пределах 20—40 % и pH 6—8. Такая суспензия после введения в нее при необходимости различных добавок, таких, как углеводы, липиды, красители, ароматизаторы и витамины, продавливается через решетку с помощью поршневого пресса (плунжерного экструдера). Выдавливаемые цилиндрики , или нити, белковой пасты диаметром около 200 мкм собираются в пучки и после обволакивания крахмалом и белками молока или обработки паром во избежание повторного слипания (реагломерации) фиксируются посредством термической коагуляции. Преимущество полученных таким способом продуктов заключается в сохранении ими структуры после тепловой обработки. [c.547]

К физическим факторам могут быть отнесены температурный—нагревание растворов выше 50—60° С многократное чередование замораживания и оттаивания денатурация под высоким давлением в 1000 кг/см и выше так, напрнмер, ферменты трипсин и химотрипсин при pH 5,0—5,2 под воздействием давления 7750 кг см через 5 мин инактивируются на 50% денатурация при воздействии ультразвуковых волн связана с разворачиванием молекул, а при более сильном воздействии ультразвука происходит даже paзpyшefIi e ковалентных связей при образовании мономолекулярных пленок на поверхности белковых растворов наблюдается так называемая поверхностная денатурация белка ультрафиолетовые лучи и ионизирующая радиация вызывают химические говреждеиия белковой молекулы, разрушая водородные связи, окисляя дисульфидные группировки, обусловливают исчезновение нативных третичных и вторичных структур белка. Интересными также являются наблюдения, указывающие на процессы денатурации, происходящие при старении белков. [c.209]

Насос прогонял белковый раствор через колонки и далее через диализный блок (две пластины плексигласа с каналами, разделенные диализной пленкой). Первоначально ядрышковые белки вносили в систему в 2 IM растворе гуанидинхлорида в буфере (20 мМ MOPS, pH 7,4, + 10 мМ ЭДТА -f- 0,1 мМ ФМСФ) и такой же раствор подавали в каналы нижней пластины диализного блока. 1—2 мг белка, растворенные в 100 мл буфера, циркулировали в этой систе- [c.427]

В этой работе интересно отметить подбор оптимального соотношения количества аффинного сорбента и белкового раствора. Недостаток сорбента, естественно, ведет к неполной экстракции рецептора, а избыток затрудняет конкурентную элюцию свободным гормоном и требует использования повышенной концентрации дорогостоящего препарата. Подбор вели титрованием к определенному количеству экстракта добавляли порциями сорбент, комплекс его с рецептором удаляли центрифугированием и следили за убылью рецептора в супернатанте по связыванию им радиоактивного гормона (детектирование на тех же фпльтрах). В результате такого подбора элюцию удавалось осуществлять меченым гормоном в указанной выше, очень малой концентрации. График элюции показан на рис. 147. [c.433]

Тепловая обработка. К полученному после диализа раствору белка (измеряют объем) добавляют L-цистеин (или 2-меркаптоэтанол). до 0,03 М концентрации, ЭДТА — до 0,5 мМ и 2 М. раствором триса доводят pH до 7,5. Инкубируют при 37° С в течение 30 мин в термостатированной бане, затем раствор охлаждают до 25° С и центрифугируют при комнатной температуре. Осадок отбрасывают, а pH супернатанта увеличивают до 8,2, добавлением 2 М раствора триса, инкубируют в тех же условиях. К охлажденному до 25° С белковому раствору добавляют 1 н. СНзСООН до pH 7,0. В случае образования мути раствор центрифугируют, осадок отбрасывают. [c.222]

Фракционирование сульфатом аммония. К полученному супернатанту медленно, при постоянном перемешивании, добавляют хорошо измельченный сульфат аммония до 54%-ного насыщения (320 г/л). При насыщении сульфатом аммония белковый раствор тщательно охлаждают в сосуде с тающим льдом. Перемешивание продолжают в течение 30 мин, атем центрифугируют 20 мин при 10 ООО g. Осадок отбрасывают. К супернатанту добавляют сульфат аммония до 67,5%-ного насыщения (83,5 г/л). Перемешивание продолжают 30 мин и вновь ценгрифугируют. Супернатант отбрасывают, осадок суспендируют в 80%-ном растворе сульфата аммония, содержащем 10 мМ 2-меркаптоэтанол. Концентрация белка в суспензии составляет-20— 40 мг/мл. На этой стадии фермент может храниться при 4° С несколько дней без потери активности. [c.272]

При растворении белков в воде происходит гидратация их молекул. Вокруг каждой из них образуется водная оболочка (гидросфера). Наличие оболочек, состоящих из ориентированных в пространстве молекул воды, является наряду с зарядом белковых частиц фактором устойчивости белковых растворов. Под действием факторов, умень-шаюпшх гидратацию белковых частиц (например, водоотнимающих средств) и нейтрализующих их заряд, рас- [c.5]

В настоящее время имеется ряд новых методов определения молекулярного веса, которые могут соперничать с ультрацентрифугированием. Один из них — это простая гель-фильтрация. Колонку тщательно заполняют гелем (например, сефадексом) и калибруют, пропуская ряд белковых растворов. Измеряют Уе — объем элюата, собранного с момента нанесения вещества на колонку до момента его выхода из колонки, и делят этот объем на Уо — объем элюата для очень крупных частиц, совершенно не проникающих внутрь частиц геля. Далее строят зависимость Уе/Уо ОТ логарифма мол. веса для ряда белков с известным молекулярным весом. Как и при оценке молекулярных весов по константам седиментации, здесь предполагается, что молекулы всех белков имеют примерно сферическую форму для неизвестного белка значение молекулярного веса определяют по местоположению отвечающей ему точки на описанном выше графике [153, 154]. Модификацией этого метода служит хроматография при высоких концентрациях гуанидинхло-рида — соли, вызывающей денатурацию белков. Предполагается, что в таком растворителе белковая молекула представляет собой статистический клубок [154]. [c.182]

В процессе ультрафильтрации животных белковых растворов происходит формирование примембранных белковых отложений, прочно связываемых с поверхностью мембраны. [c.569]

Пенообразующая способность неионогенных ПАВ не зависит от pH в интервале 3-9. Белковые растворы проявляют максимальную пенообразующую способность в изоэлектрической точке. Растворы желатина и яактальбумина [c.273]

Наконец, проводившиеся работы имеют смысл, если новые продукты, которые предлагаются к разработке, отвечают потребностям промышленных потребителей (Группа по изучению растительных белков ) и в конечном счете потребителей готовых изделий. Особое внимание привлекают исследования, касающиеся функциональных свойств. Необходимость развертывания работ по этой теме твердо и единодушно была подчеркнута в 1979 г. комиссией, объединившей промышленников и ученых, целью которой было определить состояние исследований и потребностей в различных секторах использования белковых веществ любого происхождения. Первоначальные исследования пригодности к филированию, а также качества филированных продуктов были завершены фундаментальными научными изысканиями по реологии белковых растворов и более прикладными, технологическими разработками особо важных свойств (водоудерживающая, эмульгирующая и пенообразующая способности) и способов получения белков в моделированных условиях и сложных средах, характерных для технологии пищевой промышленности. [c.12]

Иммуноадсорбция очень часто использовалась в сочетании с тем или другим иммунохимическим методом, принадлежащим к вышеописанным группам. Она позволяет удалить некоторые антитела из антисыворотки с помощью антигена или смеси антигенов. Иммуноадсорбция позволяет также с помощью антисыворотки или ее фракции IgG удалить некоторые антигены из белкового раствора. [c.108]

Одной из важных проблем при этих операциях приготовления смесей, перемещения и перемешивания является образование пены этими белковыми растворами. Пена снижает степень использования буферных баков. Было предложено несколько технических решений для преодоления этой трудности водный аэрозоль в баке (разрушение намачиванием), ультразвук (механическая дестабилизация), противопенные добавки. Однако использование этих последних требует осторожности. Действительно, по своей природе (силиконы, высшие спирты, растительные масла и пр.) они могут на последних этапах связываться с белками и находиться в изоляте в концентрированном виде. [c.436]

Соответственно образуется растворимая фракция, состоящая из двух семейств субъединиц с коэффициентом седиментации (3-Ь4)5 (главная фракция) и 7S. По данным этих авторов, когда белковый раствор подвергается термическому воздействию в присутствии 0,01 М (З-меркаптоэтанола, осаждение ускоряется и обнаружить растворимые агрегаты невозможно. Поскольку осаждение происходит в присутствии восстановителя в концентрации 0,5 М, и Вульф и Тамура [45] предположили, что это явление не может быть следствием образования дисульфидных мостиков за счет реакции обмена SH/SS-rpynn. Однако если ал-килируют сульгидрильные группы, то осадок не появляется. [c.511]

Первый этап влажного прядения волокон состоит в образовании очень вязкого белкового раствора, называемого прядильным раствором белка. Эта операция выполняется путем овод-нения порошка и повышения величины pH добавлением щелочи, обычно NaOH. Прядильные белковые растворы содержат от 10 до 30 % белков и имеют pH в пределах 10—12,5. В ходе перемешивания прядильного раствора белки сильно денатурируют. Четвертичные и третичные структуры постепенно разрушаются, а полипептидные цепи принимают конфигурацию статистического клубка. Такое изменение конформации молекул приводит к очень сильному загустению консистенции прядильного раствора. Затем [c.534]

Эта технология текстурирования основана на явлении криоконцентрации, при которой белковый раствор замораживается, образуются кристаллы льда, а макромолекулы концентрируются в той части воды, которая остается жидкой. Количество остающейся в жидком состоянии воды зависит от условий замораживания и состава раствора, в котором диспергированы белки. В этом случае макромолекулы очень сильно сближаются (рис. 11.11), спо- [c.558]

Наилучшие результаты при освобождении белков от низкомолекулярных примесей получают с помощью гельхроматографии и ультрафильтрации. Последняя основана на продавливании растворов белка через специальные мембраны, задерживающие белковые молекулы, что позволяет не только освободить белковые растворы от низкомолекулярных примесей, но и концентрировать их. [c.32]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология