Антитела определение титра

Рис. 40. Определение титров антител в асците.

Серологическое исследование. Антитела в сыворотках крови больных накапливаются в достаточном количестве ко 2-й нед заболевания. Для их обнаружения используют непрямую РИФ, ИФА, РСК, РНГА. Определение нарастания титра антител при изучении парных сывороток позволяет считать диагноз обоснованным. [c.240]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРА ПРЕЦИПИТИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ ПО РАЗВЕДЕНИЮ АНТИГЕНА [c.121]

Кратность разведений антигена определяется той точностью, с которой должен быть определен титр антител можно приготовить десяти-, пяти-, трех- и двукратные разведения антигена. [c.124]

В некоторых реакциях преципитации количественный анализ образовавшегося преципитата дает абсолютные величины содержания антигена или антител (метод количественной преципитации). Другие реакции позволяют получать лишь относительные величины (определение титра). [c.17]

Определение титров антител [c.498]

Область применения. Определение титра антител в иммунных сыворотках. [c.123]

Титр антисыворотки сильно зависит от концентрации антигена, используемого дл я тестирования и от способа его определения. Например, одна и та же сыворотка может иметь титр 100 в тесте иммунопреципитации и 100 000 в тесте иммуноферментного анализа. Поэтому при тестировании сыворотки и определении титра лучше всего применять тот же метод, что и при анализе, а концентрацию антигена выбирать близкую к минимальной в том диапазоне, который выбран для анализа. Кроме того, следует учитывать, что в иммуноферментном анализе используют как гомогенные, так и гетерогенные методы определения концентрации антигена, которые могут сильно отличаться по структуре образующихся иммунных комплексов. В частности, в твердофазных методах вероятность образования циклических комплексов антиген — антитело значительно меньше, чем в гомогенных, а следовательно, и Наблюдаемая аффинность антител в обеих системах будет разная. [c.158]

Определение титра нейтрализующих антител по уменьшению числа бляшек [c.88]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРОВ АНТИТЕЛ В АСЦИТНЫХ ЖИДКОСТЯХ [c.321]

Реакция Николаева основана на идентификации величины белковой корпускулы по способности выпадать в осадок при определенной концентрации сульфата аммония. Известно, что чем больше относительная молекулярная масса белковой молекулы, тем при меньшем насыщении соли она выпадает в осадок. Антитела и антигены любой специфичности и природы будут иметь корпускулы меньшей относительной молекулярной массы, чем образуемые при их взаимодействии иммунные комплексы, состоящие не менее чем из 2 молекул. Следовательно, выпадение белков в такой системе будет происходить при добавлении меньшего количества химического реагента, чем в случае, когда реакция антиген — антитело не произойдет. В связи с этим учет реакции основан на сравнении объемов раствора сульфата аммония, необходимого для появления заметной мути (т. е. начала выпадения глобулинов) в опытных и контрольных пробирках. Достигается это повторными добавлениями равных объемов соли (по 0,1 мл, а затем по каплям) и регистрацией мути (визуально или с помощью нефелометра). Если при достижении некоего объема раствора соли муть появится лишь в опытных пробирках, но будет отсутствовать в контрольных, реакцию считают положительной, а разведение сыворотки принимают за титр. В реакции используют сыворотки и их разведения в объеме 1 мл (реже 0,5 мл), а антиген в объеме 0,1 мл. Добавление сульфата аммония начинают через 2—3 мин после тщательного смешивания антигена с сывороткой. [c.247]

Для исследования реактивности организма, подвергающее гося воздействию различных промышленных ядов в низких концентрациях, наибольшей популярностью пользуются различные модификации фагоцитарной реакции нейтрофилов кро-ви. Довольно часто применяют и определение титра иммунных антител. В литературе можно встретить также экспериментальные исследования, в которых изучались тесты на реактивность количество комплемента, пропердина, интен-сивность бактерицидных свойств сыворотки крови титры лизоцима в слюне и тканях, барьерные функции крови и ели- [c.281]

Было изучено связывание гаптена антителами при различном их соотношении и показано, что меченные иминоксрмьными сво-бодпыдгп радикала.ми гаптены могут быть использованы для определения титра антител. [c.172]

Поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках для определения титра специфических антител в сыворотке, полученной от кролика на предыдущем занятии. [c.109]

При использовании антигенов, полученных с помощью хроматографических методов и поэтому, по крайней мере частично, растворимых, смешайте 0,2—2,0 мг интактного гибридного белка, растворенного в 1 мл физиологического раствора или PBS с 1,25 мл полного адъюванта Фрейнда и получите гомогенную эмульсию, как описано выше. Сделайте зафиксированному кролику подкожные инъекции в несколько мест. Повторите инъекции 0,2—1,0 мг антигена в неполном адъюванте Фрейнда на 14-й и 21-й день и с 28-го дня начинайте брать кровь. Для определения титра антител берите кровь еженедельно и повторите введение 0,2—1,0 мг антигена, когда титр антител начнет уменьшаться. После получения достаточного количества антисыворотки, пока титр антител остается достаточно высоким, возьмите под анестезией кровь из сердца кролика. [c.163]

Несмотря на то что методы преципитации в геле занимают значительное место в изучении и количественном определении антигенов, а также широко применяются для контроля специфичности и определения титра преципитирующих антител, предел чувствительности данных методов составляет около 5 мкг/мл, и их невозможно использовать для количественного определения антигенов небольшой мол. массы, которые образуют только нерастворимые комплексы. По этой причине возникла необходимость в разработке альтернативных методов количественного определения антигенов. В 1945 г. Кумбс и сотр. [c.12]

Какой бы метод детекции антител ни был выбран, его надо отработать до начала получения гибридом, так как потом на это не будет времени. Основные требования к методу детекции — надежность и быстрота. Проверке должно подвергаться сразу большое число проб. Точное количественное определение титра антител на данной стадии не требуется. [c.111]

Определение титра антивирусных антител в опытах по защите мышей [c.85]

Ниже приведены иммунологические методы обнаружения специфических антител к вирусу краснухи, особенно эффектив-I ные для диагностики заболевания плода и определения титра [c.313]

Серологическая диагностика острых и хронических стрептококковых инфекций. При некоторых острых, но главным образом при хронических стрептококковых заболеваниях (хронический тонзиллит, ревматизм, нефрит) больные, как правило, длительное время получают большие дозы антимикробных препаратов сульфаниламидов, антибиотиков. Выделение же возбудителя из слизистого отделяемого носоглотки, мокроты, гноя ран, абсцессов и крови представляет большие трудности. Поэтому проведение трудоемких бактериологических исследований на стрептококки в таких случаях оказывается безрезультатным. В то же время проведение полного серологического анализа с обнаружением в крови стрептококкового антигена и определение титра стрептококковых антител может оказать большую помощь в установлении этиологического фактора болезни. [c.180]

Титрование исследуемой сыворотки. Схема постановки реакции агглютинации для определения титра антител приведена в табл. 16. Сначала готовят основное разведение сьшоротки, которое в зависимости от титра может составлять 1 50, 1 100 или 1 1000. Затем делают серию разведений сыворотки путем последовательного переноса 1 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда. Из последней пробирки 1 мл разведенной сыворотки удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль антигена) вносят [c.109]

Присутствие АОК в селезенке животных после иммунизации можно выявить путем анализа бляшкообразования (см. гл. 29). Как установлено. АОК в этом органе появляются примерно за сутки до того, как антитела в доступных для определения титрах обнаруживаются в сыворотке крови. [c.211]

Реакция нейтрализации при исследованиях с вирусами полиомиелита применяется в двух основных модификациях. В одном случае с ее помощью производят идентификацию выделенных вирусов, в другом — ее используют для определения титров антител в сыворотках. [c.137]

Определение .v-реактивного белка (со специфической иммунной сывороткой в модификации П. М. Пашинина [5]) на фоне 43 дней отравления показало наличие его у подопытных кроликов. Изучение динамики содержания .v-реактивного белка на фоне острофазовой реакции , вызванной тетравакциной, показало, что его уровень выше, чем у контрольных животных. Определение титра антител после первой (на фоне 43 дней отравления) и второй (на 112 день) вакцинации показало замедленную выработку О- и Н-агглютининов у подопытных кроликов, причем различия были более выраженными после повторной вакцинации. Очевидно, вследствие нарастающего действия продуктов термоокислительной деструкции пентапласта изменения реактивности организма кроликов усиливались. [c.157]

Отбор высокоактивных иммунных антисывороток, определение конечного и рабочего титра Оценка аффинности и концентрации фракции высокоаффинных антител [c.158]

Определение титра аитисыворотки. Титр — это эффективная величина, характеризуюи ая связывающую способность антител, зависящая от их концентрации и аффинности. Абсолютное значение титра также зависит от метода и условий проведения эксперимента (температуры, времени, pH и т. д.) и от начальной концентрации свободного антигена. [c.157]

Рис. I. Схема процедуры слияния клеток. Показаны три этапа, на которых используется иммунофермеитиый метод для выявления антител исследование первичных культур, исследование клонов к определение титра асцитной жидкости.

Диагностические эталонные типоспецифические сьшоротк против вщ уса клещевого энцефалита и других арбовщ>усов Получены путем иммунизации животных определенными арбо вирусами или используются сыворотки людей, переболевши соответствующей арбовирусной инфекцией. В каждом случш предварительно устанавливают титр антител. [c.245]

Принципиальное различие этих этапов заключается в следую-ш,ем при определении титра исследуют связывание выбранной концентрации антигена при различных разведениях антисыворот-ки. При определении аффинности и концентрации антител исследуют связывание антисыворотки (в определенном разведении) с различными концентрациями меченого антигена. При изучении специфичности антисыворо ток в соответствуюш,ем разведении и при постоянной концентрации меченого антигена добавляют различные концентрации перекрестно реагируюш,его антигена. [c.157]

Определение титра компонентов системы a-ELISA. Удоб-йее всего титровать компоненты системы с помощью модифицированного варианта методики, использованной для получения данных табл. 14-3. В такого рода предварительных тестах вполне можно обойтись лишь ограниченным набором разведений Ig. В их число должны войти разведения, соответствующие минимальному и максимальному количествам специфических антител, которые предстоит определять в данной системе, например 0,05 и 100 нг на лунку. Целесообразно включить в тест также два промежуточных разведения. [c.219]

При различных инфекционных заболеваниях накопление специфических антител в сьшоротке вдет с неодинаковой скоростью и достигает разных величин. В связи с этим принято говорить о диагностическом титре антител—той величине титра, при которой можно с уверенностью поставить серологический диагноз заболевания в определенный его период. При многих инфекциях наиболее надежным диагностическим признаком считается не наличие антител, а нарастание их титра в динамике заболевания, которое выявляется путем постановки серологических реакций с парными сьшоротками, т. е. полученными дважды от одного и того же больного. [c.108]

Иммуноанализ антител. 1. Антиген в солевом растворе инкубируют на пластиковой подложке или в пробирках, в результате чего небольшое его количество адсорбируется на поверхности пластика. 2. Свободный антиген удаляют путем отмывания. (Подложку затем можно обработать избытком постороннего белка, чтобы предотвратить последующее неспецифическое связывание белков.) 3. Добавляют исследуемые антитела, которые связываются с антигеном. 4. Несвя-завшиеся белки удаляют отмыванием. 5. Антитела определяют при помощи меченого лиганда. Лигандом может служить, например, стафилококковый белок А, который связывается с F -областью IgG чаще используют другие антитела, специфичные по отношению к исследуемым антителам. Применяя лиганд, который связывается с антителами определенного класса или подкласса, можно дифференцировать изотипы антител. 6. Несвязанные антитела удаляют отмыванием. 7. Определяют связавшуюся метку. Типичная кривая титрования представлена внизу. С повышением количества антител интенсивность сигнала возрастает линейно от фонового значения до уровня плато. Титр антител можно определить правильно лишь в линейной области. Уровень плато, как правило, в 20-100 раз выше фонового. Чувствительность метода обычно составляет приблизительно 1-50 нг специфических антител в 1 мл. Специфичность метода можно проверить, добавив свободный тест-антиген в повышающихся концентрациях к исследуемым антителам на зтапе (3). Антиген связывается с антителами и блокирует их соединение с антигеном, фиксированным на подложке. Добавление возрастающих количеств свободного антигена снижает интенсивность сигнала. [c.534]

Псевдоаллели. Гены, проявляющиеся как истинные аллели в тестах на аллелизм, но разделяющиеся в процессе кроссинговера не занимают гомологичной позиции в хромосоме (например, С4). Псевдогены. Гены, структурно сходные с обычными генами, но неспособные экспрессироваться с образованием функционально активных продуктов (например, J/сЗумыши). Радиоиммуноанализ (РИА). Ряд высокочувствительных методов для определения титра антигена или антител с использованием радиоактивно меченных реагентов. [c.562]

Как уже отмечалось, картина преципитации, получаемая при иммуноэлектрофорезе, сильно зависит от свойств иммунной сыворотки. Для каждого компонента смеси антигенов существует определенный диапазон концентраций, в котором получаются хорошо сформированные четкие линии преципитации (зона эквивалентности). В многокомпонентных смесях концентрация отдельных антигенов может различаться в широких пределах. Концентрация (титр) антител в применяемой иммунной сыворотке также может варьировать в значительной степени. Таким образом, вполне возможна ситуация, при которой зоны эквивалентности для разных компонентов смеси не будут перекрываться. В связи с этим иммуноэлектрофорез многокомпонентных смесей рекомендуется проводить при нескольких относительных концентрациях антиген-антитело, так как при использовании только одной такой концентрации можно не обнаружить какие-то компоненты. Предложен, в частности, метод иммуноэлектрофореза с применением последовательных разведений сыворотки человека [618, 619]. Этот метод иммуноэлектрофоретического титрования полезен для полуколичественного определения от- [c.239]

Реакция пассивной кожной анафилаксации (ПКА) является тестом для полуколичественного определения титра кожно-сенсибилизирующих антител и методом для идентификации их класса. Проводится в случае положительной реакции АКА, что явилось обоснованием для ее применения в работе [137]. [c.257]

С целью количественного определения титра кожно-сенсибилизирующих антител и их идентификации на 15-ти морских свинках поставлена реакция пассивной кожной анафилаксии, однако положительный результат пассивного переноса не удалось получить ни в одном случае. Это не противоречит данным некоторых авторов [ 132 ] о том, что лошадиная сыворотка не способствует формированию ПКА у морских свинок. Положительные результаты в реакциях системной и активной кожной анафилаксии без сомнения доказывают наличие состояния сенсибилизации экспериментальных животных. Следовательно, отрицательные результаты в реакции ПКА обусловлены гетерогенностью классов иммуноглобулинов, участвующих в развитии анафилактических реакций. Очевидно, гомоцитотропные антитела представлены классом иммуноглобулинов С, которые имеют очень короткий (порядка нескольких часов) период фиксации в коже и при тестировании после 24 часов не выявляются. [c.262]

Описанный метод используют главным образом для одновременного количественного определения всех компонентов какой-либо гетерогенной смеси. Для этой цели нужна антисыворотка, содержащая антитела ко всем анализируемым компонентам, причем титр этих антител должен быть достаточно высоким, чтобы образовались преципитаты, поддающиеся измерению. Подобную сбалансированную антисыворотку трудно получить путем иммунизации. Ганрот [424] предлагает готовить антисыворотки высокого титра для нескольких антигенов, а затем смешивать их в таком соотношении, при котором обеспечивается адекватное содержание антител для каждого антигена. Очевидно, более выгодно использовать при перекрестном иммуноэлектрофорезе смесь антигенов в двух разных концентрациях [1017]. Само количественное определение заключается в измерении площадей под пиками преципитации. Его можно провести с помощью полуавтоматического электронного планиметра [873, 1386]. Другой способ состоит в том, что пластинку проецируют на лист белой бумаги, пики обводят карандашом, вырезают и взвешивают. Если методика электрофореза отличается высокой [c.256]

В луики с адсорбированным антигеном виосят по 0,2 мл стандартных — положительной и отрицательной и испытываемых сывороток в разведении 1 30. Для количественного определения антител в сыворотках их титруют последовательным двукратным разведением в ТФБ, начиная с разведения 1 30. Тщательно перемешивают в течение 5—7 с и инкубируют в термостате 1,5—2 ч при 37 С. Затем 4—5 раз луики отмывают от несвязавшихся антител ТФБ. При качественной постановке реакции (ответ есть или нет ) постановку осуществляют аналогично, ио сыворотки ие титруют, а ставят ие менее тре.ч повторных опытов с разведением 1 30. [c.275]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология