Диметилсульфоксид в градиенте сахарозы

При центрифугировании денатурированной ДНК или однонитевых РНК бывает необходимо предотвратить их реассоциацию и агрегацию за счет образования случайных водородных связей между основаниями. Для ДНК это осуществляют подщелачива-нием раствора NaOH (до 0,1 М). В случае РНК щелочь непригодна (гидролиз ), но можно создать градиент плотности растворением сахарозы не в воде, а в концентрированных растворах формамида или диметилсульфоксида (ДМСО), иногда даже в 100%-ном формамиде или ДМСО, Полученные градиенты называют денатурирующими градиентами сахарозы . Следует помнить, что ДМСО ядовит и легко проникает через кожу, поэтому работать необходимо в перчатках. Кроме того, ДМСО разрушает нитроцеллюлозные и поликарбонатные пробирки. Из него необходимо удалять следы тяжелых металлов перемешиванием в течение 1,5 ч с 3%-ной суспензией бифункциональной ионообменной смолы. Перед нанесением на градиент препараты нуклеиновых кислот целесообразно прогревать в течение 2— 3 мин при 80 для разрушения уже образовавшихся агрегатов. [c.212]

Пробирки любого типа можно использовать для центрифугирования водно-солевых растворов, в том числе для градиентов солей цезия, KI, Nal, а также сахарозы, глицерина,. метризами-да, фиколла и перколла (см. главу 5). Вместе с тем следует проявлять осторожность при выборе материала пробирок для центрифугирования кислот, щелочей и органических растворителей. Так, поликарбонат не выдерживает контакта с этими веществами, а в нитроцеллюлозных пробирках можно использовать из органических растворителей лишь толуол и хлороформ. Полиалломерные и полипропиленовые пробирки устойчивы к действию 10%-ных растворов щелочей, 50%-ной Hj OOH, ТХУ, этанола, метанола, изопропанола, диметилформ амида и диметилсульфоксида, однако и их нельзя использовать для центрифугирования суспензий, содержащих фенол, толуол, хлороформ, ацетон или диоксан. Для этого пригодны лишь полиэтиленовые пробирки и стаканы с завинчивающимися крышками, которыми комплектуются низкоскоростные центрифуги. Впрочем, и полиэтилен плохо выдерживает контакт с хлороформом в этом случае, кроме стекла, пригодна только нитроцеллюлоза. Отметим также, что водные растворы гуанидинтиоцианата разрушают поликарбонатные пробирки, но безвредны для полипропиленовых. [c.185]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология