Перколл

Перколл (Pharma ia)-коллоидные частицы силикагеля, покрытые поливинилпирролидоном (ПВП). Содержание ПВП в покрытых частицах 12% 1 ч- 2% свободного ПВП. Средний диаметр покрытых частиц 21 ч- 22 нм (при разбросе 15 30 нм). В отсутствие солей или сахарозы может быть стерилизован автоклавированием при 120°С в течение 20 мин без разложения. Макс. возможная плотность в градиентах 1,30 г/мл. Низкое осмотическое давление. Низкая [c.472]

Для выделения различных мембранных структур из гомогената, имеющих разные величины коэффициента седиментации, применяют зональное центрифугирование в градиенте плотности определенных веществ. Исследуемый раствор наносят на предварительно приготовленный в центрифужной пробирке градиент плотности и центрифугируют. Градиент создается путем последовательного наслоения растворов градиентной среды уменьшающейся концентрации (плотности) в центрифужной пробирке. Субклеточные структуры разделяются на отдельные зоны в соответствии с их относительной плотностью. Для создания градиента плотности необходимо подбирать вещества в чистом состоянии, не взаимодействующие с компонентами суспензии и реагентами исследуемого раствора. Чаще всего для этого используют сахарозу, однако ее растворы с высокой концентарцией имеют большую вязкость, вследствие чего происходит дегидратация органелл или их лизис. Кроме того, серьезным недостатком этого метода является проницаемость многих органелл для сахарозы, что вызывает их осмотическое разрушение и изменение эффективной плотности. Поэтому в настоящее время для создания градиента плотности предпочитают применять другие среды фиколл, перколл и др. (табл. 16). [c.218]

Методика выделения ДНК из лимфоцитов существенно близка используемой для культивируемых клеток, если лимфоциты свободны от примеси эритроцитов. Эритроциты могут быть или лизированы (табл. 3 (Б)), или удалены с помощью центрифугирования в градиенте фиколла или перколла. Эти методы описаны в табл. 3 (В). [c.68]

Чтобы улучшить эффективность высева протопластов после поглощения ДНК, можно разделить поврежденные и интактные протопласты с помощью дифференциального центрифугирования в градиенте плотности. Для этого обычно протопласты центрифугируют в/на среде, которая имеет то же осмотическое давление, что и раствор для поглощения ДНК, но большую плотность. Например, протопласты, отмытые в растворе, содержащем 13% (вес на объем) маннитола, можно ресуспендировать в растворе, содержащем 21% (вес на объем) сахарозы, без осмотического шока. При центрифугировании (400 об/мин, 10 мин) интактные протопласты будут флотировать, образуя компактную зону на поверхности раствора, тогда как более плотный дебрис будет осаждаться. Аналогичным образом можно использовать градиенты перколла или фиколла. Альтернатива заключается в осаждении через плотную сахарозную подушку, которая удерживает менее плотные протопласты нг своей поверхности. [c.211]

X ЗФР. После этого объем смеси доводят до 100 мл ЗФР, и этот маточный раствор, который далее мы будем называть 100%-ным перколлом, может храниться в течение года при 4°С. [c.235]

Для приготовления ступенчатого градиента 100%-ный маточный раствор перколла смешивают с ЗФР или сбалансированным солевым раствором (СР), чтобы получить 74%-ный (плотность 1,085), 68%-ный (1,080), 63%-ный (1,075) или 52%-ный (1,060) растворы перколла. 2 мл каждого из растворов последовательно (в соответствии с уменьшающейся плотностью) наслаивают в коническую пробирку на 15 мл. Наконец, клетки, ресуспендированные в 5 мл СР, наносят на градиент и центрифугируют 30 мин при 1400 g. Клетки, локализованные в более низкой зоне — между 74%- и 68%-ным перколлом, собирают и после двух-трех промывок СР используют для тестирования пролиферативной активности. При использованном методе выход этих клеток составляет 5—20% общего числа взятых клеток. [c.235]

Эффект тестирования во многом зависит от исходной клеточной популяции. Идеальной является гомогенная популяция покоящихся В-клеток. После обработки спленоцитов антителами против Т-клеток и комплементом с последующим фракционированием в градиенте плотности перколла и выделением клеток, собирающихся в интерфазе между плотностями 1,080 и 1,085, получают фракцию, содержащую более 90% клеток с поверхностными иммуноглобулинами (М. Julius, личное сообщение). [c.236]

Клетки осаждают и супернатант удаляют. Клеточный осадок суспендируют в 5 мл СР, наслаивают его на градиент перколла (как описано в разд. П) и центрифугируют 30 мин при 1400 2. [c.237]

Клетки, локализованные в интерфазе между 74%-ным и 68%-ным перколлом, отбирают и отмывают их 3 раза СР с 5% СПК. [c.237]

Готовят, как описано выше, 75%-ный и 35%-ный растворы перколла в среде Хэнкса без Са + и М +. Эти растворы могут храниться при 4°С в течение нескольких месяцев. [c.458]

В градуированную пластмассовую пробирку наливают 3 мл 75%-НОГО перколла и осторожно наслаивают на него пипеткой 3 мл 35%-ного перколла. На пробирке карандашом отмечают положение границ каждого слоя. Это поможет в идентификации индивидуальных популяций клеток на каждой границе при последующих процедурах. [c.458]

На слой 35%-ного перколла наносят 5—10 мл суспензии лимфоидных клеток (до 1,5-10 клеток). [c.458]

Обычно почти 100% клеток, выделенных из зоны между слоями 35%-НОГО и 75%-ного перколла, жизнеспособны (по окраске трипановым синим). 90—95% клеток на границе между средой и 35%-ным перколлом мертвые. Выход жизнеспособных клеток при использовании этого метода составляет 70—90%. [c.458]

Мертвые клетки удаляют центрифугированием суспензии в градиентах перколла (см. выше) и перед использованием клетки два раза промывают. Из сегментов подвздошной кишки длиной 10 см, выделенных из 1—3-месячных ягнят, обычно получают 5-10 — 1 -10 жизнеспособных клеток. [c.459]

Пробирки любого типа можно использовать для центрифугирования водно-солевых растворов, в том числе для градиентов солей цезия, KI, Nal, а также сахарозы, глицерина,. метризами-да, фиколла и перколла (см. главу 5). Вместе с тем следует проявлять осторожность при выборе материала пробирок для центрифугирования кислот, щелочей и органических растворителей. Так, поликарбонат не выдерживает контакта с этими веществами, а в нитроцеллюлозных пробирках можно использовать из органических растворителей лишь толуол и хлороформ. Полиалломерные и полипропиленовые пробирки устойчивы к действию 10%-ных растворов щелочей, 50%-ной Hj OOH, ТХУ, этанола, метанола, изопропанола, диметилформ амида и диметилсульфоксида, однако и их нельзя использовать для центрифугирования суспензий, содержащих фенол, толуол, хлороформ, ацетон или диоксан. Для этого пригодны лишь полиэтиленовые пробирки и стаканы с завинчивающимися крышками, которыми комплектуются низкоскоростные центрифуги. Впрочем, и полиэтилен плохо выдерживает контакт с хлороформом в этом случае, кроме стекла, пригодна только нитроцеллюлоза. Отметим также, что водные растворы гуанидинтиоцианата разрушают поликарбонатные пробирки, но безвредны для полипропиленовых. [c.185]

Для создания градиентов плотности среды при зонально-скоростном центрифугировании нашли применение растворы следующих веществ сахарозы, глицерина, метризамида ( Ме1п8ат1-с1е ), фиколла ( р1соП ) и перколла ( РегсоИ ). Первые два вещества общеизвестны, поэтому приведем краткие характеристики трех остальных. [c.206]

Перколл представляет собой коллоидные частицы SiO размером около 17 мкм, покрытые поливинилпирролидоном и поэтому совершенно инертные. Суспензии перколла той же концентрации, что и других перечисленных веществ, имеют наибольшую плотность. Вязкость этих суспензий в воде велика, но резко снижается при добавлении Na l до 0,15 М. Суспензии перколла. можно автоклавировать. [c.208]

Перколл применяют лишь для очистки клеток и достаточно крупных клеточных органелл, осуществляемой обычно в режиме равновесного центрифугирования. [c.208]

Хотя фиколл и перколл не используют для фракционирования белков и нуклеиновых кислот, интересно сопоставить плотность (р) и вязкость (т]) растворов всех пяти названных веществ в зависимости от концентрации (рис. 50). Следует обратить внимание на то, что концентрации выражены отнощением массы растворенного вещества к объему раствора (т/У) Значения р и т) даны для 20°. [c.209]

Фиколл и перколл явно непригодны для зонально-скоростного центрифугирования белков и нуклеиновых кислот. При тех ко 1центрациях, которые необходимы для обеспечения устойчивости градиента плотности, вязкость их растворов слишком высока. [c.209]

После центрифугирования при 2000 g и 25 °С в течение 45 мин живые клетки концентрируются в области с плотностью 1.08 г/мл. Клетки собирают и промывают от перколла центрифугированием дважды при 37 g, полученный осадок миоцитов ресуспензируют в среде Джоклика, содержащей 1 % бычьего сывороточного альбумина и 2 10 М СаСЬ- Было показано [20], что при центрифугировании в градиенте перколла удаляется значительная часть погибших клеток, при этом до 90 % клеток полученной фракции жизнеспособны и имеют палочковидную форму. [c.294]

Выделение нейтрофилов в градиенте плотности перколла (1,130). На 63 %-ный раствор перколла сначала наслаивают 72 %-ный [c.90]

Митохондрии выделяли с помощью дифференциального центрифугирования (Войников, 1980). Очистку органелл проводили в ступенчатом градиенте перколла, состоящем из 18, 23, 35% перколла (Войников и др., 1991). [c.8]

Рис. 5 Схема выделения (А) и очистки на градиенте перколла (Б) митохондрий проростков растений (по Войников, 1991)

Справочник химика 21

Химия и химическая технология