Тотальный препарат нуклеиновых кислот

Выделение тотальных препаратов нуклеиновых кислот из А. tumefa iens [c.76]

Для выделения используют небольшие объемы ночных культур. Методика включает ферментативную обработку агробактерий с последующим удалением белков из экстракта смесью фенол/хлороформ и концентрирование нуклеиновых кислот путем осаждения этанолом. Описанная ниже методика успешно использовалась для ряда штаммов агробактерий. В следующем разделе 1.12 представлены результаты расщепления суммарной ДНК, агробактерий ферментами рестрикции и примеры анализа по Саузерну последовательностей плазмид, содержащихся в различных мини-препаратах тотальной нуклеиновой кислоты агробактерий. [c.76]

Получение тотальных препаратов нуклеиновых кислот [c.54]

Кроме того, микрометоды (разд. 4.2.3.1 и 4.3.3.2) выделения, тотальной ДНК из трансформированных клеток растений позволяют получить предварительные данные о ее организации. Для таких методов требуется всего лишь 20 мг лиофилизиро-ванной либо 0,5 г свежей растительной ткани, а очистка в градиенте плотности СзС1/БЭ не применяется. Выделенная ДНК имеет достаточно большую мол. массу, однако сильно загрязнена РНК и в меньшей степени полисахаридами. Концентрацию нуклеиновой кислоты в таких неочищенных препаратах невозможно определить спектрофотометрически, однако содержание ДНК может быть определено достаточно точно очень чувствительным методом с использованием дифениламина (разд. 4.6). [c.238]

Из тотального препарата нуклеиновых кислот СТАВ удаля-. ют путем осаждения этанолом (СТАВ растворим в этаноле [c.240]

Выделение тотальных препаратов нуклеиновых кислот из А. tu mefa iens.............. [c.403]

Таким образом, используя комбинированный метод солевого фракдионирования с хроматографией на дорошко-вой целлюлозе, из тотального препарата РНК из зараженных клеток можно выделить три типа РНК рибосомальную хозяйскую, вирусспедифическую репликативную и репликативную промежуточную формы, Франклин показал, что в указанных условиях нативная ДНК и г-РНК не сорбируются на целлюлозе, а денатурированная ДНК элюируется 15%-ным этанолом. Однако этим методом невозможно разделить различные типы односпиральных РНК. Но при сочетании этого метода с фракционированием на МАК е и в градиенте плотности сахарозы можно добиться хорошего разделения основных типов нуклеиновых кислот, выделяемых из зараженной вирусом клетки [c.185]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология