ДЭАЭ-бумага, перенос ДНК

Применение ацетата целлюлозы для двумерного разделения меченых нуклеотидов описано в работах [И, 66]. Сэнджер с сотр. [66] разделял смеси компонентов нуклеиновых кислот из Es heri hia соИ. Сначала проводили высоковольтный электрофорез на 3-сантиметровых полосках ацетата целлюлозы, после чего разделенные компоненты промоканием переносили на ДЭАЭ-бумагу. Затем проводили электрофорез на бумаге. Полученную электрофоретограмму высушивали и авторадиографиро-вали. Таким образом достигалось разделение сложной смеси нуклеотидов. С некоторыми видоизменениями метод использовали и другие исследователи [12, 67]. [c.155]

Недавно было показано, что с пероксидазой в роли индикаторного фермента может весьма успешно конкурировать глюкозооксидаза. Важнейшим преимуществом этого фермента является более низкий уровень фона, чем при использовании пероксидазы (Porter, Porter, 1984). Следует добавить также, что для весьма широкого круга ферментов продемонстрирована возможность непосредственного обнаружения (окрашивания соответствующих зон) после переноса на ДЭАЭ-бумагу (M Lel-lan, 1981). [c.362]

Фракционируемую сыворотку (1—30 мл) наливают в химический стакан, добавляют к ней необходимое количество влажного ионообменника и перемешивают до получения гомогенной суспензии. Смесь оставляют при 4 С на 1 ч и затем переносят на фильтровальную бумагу, выстилающую воронку Бюхнера. Гель промывают холодным 0,01 М фосфатным буерным раствором pH 6,5 до тех пор, пока в элюате не перестанет обнаруживаться белок (в реакции с суль-фосалициловой кислотой). Собранный буферный раствор, содержащий белок, смешивают со свежей порцией ДЭАЭ-сефадекса, полученную суспензию вновь оставляют при 4° С на 1 ч и снова, как описано выше, отмывают белок, не связавшийся с ионообменником. Отмывающий буферный раствор, который в данном случае уже содержит только чистый IgG, можно лиофилизировать или сконцентрировать диализом под давлением. [c.219]

Переносят смесь, в толстостенную центрифужную пробирку, центрифугируют (4000 об/мин, 4 °С, 20 мин) и собирают супернатант —фра кци1ю IgG. Можно поступить иначе перенести ДЭАЭ в шприц, перекрытый фильтровальной бумагой, и вытеснить раствор IgG, нажимая на поршень. При этом ДЭАЭ задерживает все сывороточные белки, кроме IgG. Некоторые авторы рекомендуют применять 0,02 М фосфатный буфер и pH 8,0. [c.105]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология