ДЭАЭ-сефадексы

ДЭАЭ-сефадекс А-25, уравновешенный 10 мМ триэтаноламин-НС1-буфером, pH 8,0 (с. 109). [c.251]

ДЭАЭ-сефадекс Л-25, уравновешенный 0,02 М трис-НС1 буфером, pH 9,2 (с. 109). [c.285]

В. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ СЫВОРОТКИ НА КОЛОНКЕ С ДЭАЭ-СЕФАДЕКСОМ [c.215]

Рекомендуется проводить регенерацию геля ДЭАЭ-сефадекса после извлечения его из колонки и перед каждым опытом заполнять колонку вновь благодаря этим операциям гель становится гомогенным. [c.217]

Область применения. Фракционирование на ДЭАЭ-сефадексе с успехом можно использовать во всех областях биохимии, белковой химии, иммунологии и клинической химии для выделения белковых фракций. [c.215]

Подготовить ДЭАЭ-сефадекс к хроматографии можно и другим способом ионообменник на сутки оставляют набухать в большом избытке стартового буферного раствора, несколько раз меняя его. Если через сутки не наступит равновесие, то смену надосадочной жидкости продолжают до тех пор, пока ее pH не будет равен pH стартового бус рного раствора. [c.216]

Заполнение колонки ионообменником. К набухшему и уравновешенному стартовым буферным раствором ДЭАЭ-сефадексу добавляют немного буферного раствора и, закрыв выходное отверстие, полученной негустой, тщательно перемешанной суспензией заполняют колонку, в которую предварительно на одну треть высоты наливают стартовый буферный раствор. Затем выходное отверстие открывают и продолжают постепенно заполнять колонку ионообменником до нужной высоты. После этого проверяют, уравновешена ли колонка если равновесия нет, ее продолжают промывать стартовым буферным раствором до тех пор, пока pH вытекающей жидкости не будет равен pH стартового буферного раствора. [c.216]

Емкость ДЭАЭ-сефадекса обычно составляет 3 мэкв/г. В соответствии с этим на колонку ДЭАЭ-сефадекса, приготовленную из [c.217]

Для катионообменной хроматографии можно использовать КМ-сефадекс G-50. Его предварительную обработку следует проводить так же, как и ДЭАЭ-сефадекса, с той лишь разницей, что КМ-сефадекс сначала обрабатывают 0,5 н. НС1, а затем отмывают щелочью. Процедура хроматографии на КМ-сефадексе G-50 та же, что и на КМ-целлюлозе. [c.217]

Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе очень удобна для выделения из сыворотки IgG и для разделения белков этой фракции, обладающих разной электрофоретической подвижностью. Стартовый буферный раствор сначала вымывает из колонки IgG, имеющие низкую электрофоретическую подвижность. Быстро мигрирующие белки этого же класса выходят только при градиентном элюировании. Хроматография, на ДЭАЭ-сефадексе является также общепринятой методикой очистки миеломных IgG. [c.217]

Рис. 18. Хроматографическое разделение т.РНК дрожжей на ДЭАЭ-сефадексе А-25 в 7 М мочевине [44].

ДЭАЭ-сефадекс обрабатывают так же, как и для колоночной хроматографии, затем уравновешивают 0,01 М фосфатным буферным раствором pH 6,5. Когда уравновешивание закончится, буферный раствор удаляют, насколько это возможно, так, чтобы ионообменник оставался едва влажным. Удобнее всего это сделать, поместив ДЭАЭ-сефадекс на выстланную фильтровальной бумагой воронку Бюхнера и пропуская через него буферный раствор под вакуумом, создаваемым водоструйным насосом. [c.219]

Кинетические параметры гидролиза этилового эфира М-ацетил-Ь-тирозина ДЭАЭ-декстран — субтилизином, ДЭАЭ-сефадекс — субтилизином и субтилизином при различной ионной силе раствора [c.429]

При изучении распределения полиметакриловой кислоты между ДЭАЭ-сефадексом и раствором [44] оказалось, что сорбция возрастает с увеличением pH от 1,5 до 3,0, т. е. с увеличением ионизации полиметакриловой кислоты. Далее сорбция возрастает с увеличением молекулярного веса полимера и повышением температуры (эндотермичность взаимодействия). Порядок величины изменения энтальпии таков, что во взаимодействии должны участвовать не только ионизированные, но также и неионизированные [c.219]

Мало проведено сравнительных исследований на ионообменных целлюлозах и аналогичных сефадексах. В идентичных условиях хроматографии - -глобулин сыворотки крови кролика дает один пик на ДЭАЭ-целлюлозе и два ника на ДЭАЭ-сефадексе [47]. По-видимому, различие в структуре обоих ионитов играет некоторую роль. На КМ-целлюлозе тот же белок был разделен на три фракции [48]. [c.220]

Сефадексы широко применяются в химии полисахаридов не только для быстрой очистки от низкомолекулярных примесей, но и для фракционирования полисахаридов и продуктов их ферментативного расщепления по их массе. Особенно большую ценность во многих случаях имеют ДЭАЭ-сефадексы, соединяющие свойства молекулярных сит (разделяющих по массе) и анионитов (разделяющих по степени кислотности). [c.56]

Олигонуклеотиды несут большой отрицательный заряд, поэтому они с успехом могут быть разделены на слабых крупнопористых анио-нообменниках. Для этой цели используют колонки, заполненные ДЭАЭ-сефадексом, ДЭАЭ-целлюлозой, Эктеола-целлюлозой и др. Нуклеотиды элюируются с колонки в градиенте концентрации Na l в порядке увеличения их молекулярной массы. Для подавления неспецифической сорбции нуклеотидов на полисахаридных матрицах хроматографию проводят в присутствии 7 М мочевины. [c.177]

Ионообменная хроматография. После диализа раствор наносят на колонку (4x20 см), заполненную ДЭАЭ-сефадексом А-50, уравновешенную буфером В. Колонку промывают тем же буфером (500 мл), после чего проводят элюцию 0,3 М трис-фосфатным буфером, pH 8,0, содержащим 0,1 мМ ЭДТА (500 мл). Фракции, содержащие фермент, объединяют и добавляют сульфат аммония до 807о-ного насыщения. Продолжают перемешивание в течение часа, центрифугируют (20 мин при 15000 ). Осадок осторожно суспендируют в буфере В, насыщенном сульфатом аммония, и хранят при 4° С. [c.245]

Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе. Готовят колонку (1,5X40см), заполненную ДЭАЭ-сефадексом А-25. Колонку уравновешивают указанным выше буфером. Наносят раствор белка (около 100 мг в 3 мл) и проводят элюцию тем же буфером, определяя во фракциях элюата содержание белка и активность фермента Фракции, содержащие наибольшую активность, объединяют и добавляют к ним сульфат аммония до концентрации 3,0 М. Доводят pH до 6,0. При этом около 90% [c.262]

Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе А-25. Через колонку с подвижным адаптером с ДЭАЭ-сефадексом Л-25 (5x26 см), уравновешенную 0,02 М трис-НС1 буфером (pH 9,2), пропускают последовательно (снизу вверх) 1 л 0,02 М раствора хлористого калия и ферментный раствор, полученный на предыдущей стадии. Как только ферментный раствор полностью впитывается, начинают пропускать 0,1 М хлористый калий, который используется в качестве элюирующего раствора. Скорость элюции — 90 мл/ч, объем элюируемых фракций — 3 мл. Во фракциях определяют белок и транскетолазную активность. Фракции с удельной активностью 0,1 Е/мг и выше объединяют и используют для дальнейшей работы (можно хранить в холодильнике в течение ночи). [c.286]

Л. извлекают из водорослей горячей водой или разб. к-тами сопутствующие кислые полисахариды отделяют осаждением в виде нерастворимых солей (напр., с катионными детергентами типа цетилтриметиламмонийбромида) или ионообменной хроматографией. М-Цепи и G-цепи разделяют хроматографически с использованием в качестве сорбента диэтиламиноэтилцеллюлозы (ДЭАЭ-сефадекс) в мо-либдатной форме. [c.577]

ДЭАЭ ДЭАЭ-сефадекс А-25 ДЭАЭ-сефадекс А-50 ДЭАЭ-сефароза L-6B ДЭАЭ-биогель А i-0- Hj- H2-NEt2 Сефадекс G-25 Сефадекс G-50 Сефароза L-6B Биогель А (4% агарозы) 3.5 + 0,5 3.5 + 0,5 0,15 + 0,02 0,02 0,005 5 28 Набухшая смола Набухшая смола Основание средней силы. рК, 9,5 Предел эксклюзии Г 1 О [c.438]

Подготовка колонки. Для анионообменной хроматографии белков обычно применяют ДЭАЭ-сефадекс А-50. 1,0 г ионообменника суспендируют в дистиллированной воде и оставляют на 1 ч, после чего надосадочную жидкость вместе с медленно оседающими мелкими частичками декантируют. Затем ионообменник отмывают от ионов С1" 0,5 М NaOH. Избыток щелочи отмывают дистиллированной водой и продолжают дальнейшее отмывание кислотой. В связи с тем, что белки сыворотки крови обычно фракционируют в фосфатном буферном растворе, в качестве кислого отмывающего раствора применяют 0,1 М фосфорную кислоту. Избыток кислоты в свою очередь отмывают дистиллированной водой, а затем ионообменник отмывают стартовым буферным раствором до тех пор, пока не наступит равновесие. Проще всего отмывание вести фильтрованием на воронке Бюхнера, поскольку при этом удобно не только отмывать, но и анализировать промывную жидкость. [c.216]

Набухшие ионообменники можно хранить в виде суспензии в нейтральных растворах в течение нескольких месяцев даже при комнатной температуре, если принять меры предосторожности против бактериального заражения. В суспензии КМ- и сульфоэтил-сефадекса (СЭ-сефаде1 с) добавляют 0,02% азида натрия, а в суспензию ДЭАЭ-сефадекса — 1 % бутанола. [c.218]

Г. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ БЕСКОЛОНОЧНОГО ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ НА ДЭАЭ-СЕФАДЕКСЕ [c.218]

При соответствующих условиях ДЭАЭ-сефадекс связывает все белки сыворотки, за исключением фракции IgQ. Поэтому фракционирование белков сыворотки с помощью этого ионообменника очень удобно для выделения иммунохимически чистого IgG, а также полезно при дальнейшей очистке препаратов IgG, полученных другими способами. [c.218]

Суть бесколоночного метода заключается в следующем. Фракционируемую сыворотку смешивают с уравновешенным соответствующим буферным раствором ДЭАЭ-сефадексом, который связывает почти все сывороточные белки, оставляя в растворе IgG, легко отделяемый при отмывании. Смешивание с ДЭАЭ-сефадексом повторяют дважды (каждый раз со свежей порцией ионообменника) и в результате получают препарат IgG, свободный от примеси других белков сыворотки, о чем судят по иммуноэлектрофоретическому анализу. Благодаря тому что фракция IgG совсем не связывается с ионообменником, белки этого класса удается выделить почти количественно в нативном состоянии, не опасаясь денатурации, что является большим преимуществом данного метода по сравнению с другими методами выделения IgG. [c.219]

Фракционируемую сыворотку (1—30 мл) наливают в химический стакан, добавляют к ней необходимое количество влажного ионообменника и перемешивают до получения гомогенной суспензии. Смесь оставляют при 4 С на 1 ч и затем переносят на фильтровальную бумагу, выстилающую воронку Бюхнера. Гель промывают холодным 0,01 М фосфатным буерным раствором pH 6,5 до тех пор, пока в элюате не перестанет обнаруживаться белок (в реакции с суль-фосалициловой кислотой). Собранный буферный раствор, содержащий белок, смешивают со свежей порцией ДЭАЭ-сефадекса, полученную суспензию вновь оставляют при 4° С на 1 ч и снова, как описано выше, отмывают белок, не связавшийся с ионообменником. Отмывающий буферный раствор, который в данном случае уже содержит только чистый IgG, можно лиофилизировать или сконцентрировать диализом под давлением. [c.219]

В качестве примера на рис. 2.1—2.3 приведены кривые гель-фильтрации некоторых полисахаридов ГМЦ, полученные ири ис-иользовании различных носителей [150, 189, 213]. Большой интерес представляют ДЭАЭ-сефадексы, сочетающие свойства молекулярных сит и анионитов [186]. [c.49]

При выделении суммарньк имм шоглобулинов можно использовать два подхода. Один из них базируется на высаливании Ig-ов насыщенным раствором аммония сульфата (3,9 М при 0°С или 4,06 М при 20°С) с последующей хроматографией растворенного осадка антилимфоцитарного Ig в подходящем буфере (налример, фосфатном — 0,01 М с pH 6,5). Хроматографию проводят на ионообмен-никах — ДЭАЭ-сефадексе или ДЭАЭ-целлюлозе. [c.595]

Несколько большего успеха удалось добиться с помощью ионообменной хроматографии. В качестве адсорбентов обычно используют слабые аниониты — диэтиламиноэтилцеллюлозу или ДЭАЭ-сефадекс. Транспортные РНК при хроматографии на ДЭАЭ- и ЭКТЭОЛА-целлюлозах двигаются компактной зоной, и лишь тщательный анализ показывает, что имеет место частичное разделение. [c.336]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология