Электрофорез на бумаге высоковольтный

Электрофорез, процесс разделения молекул, основанный на разной скорости перемещения их в электрическом поле, проводят самыми разными способами. Очень небольшое количество раствора, содержащего смесь белков (например, белков сыворотки крови), наносят в виде тонкой полоски на лист фильтровальной бумаги или ацетата целлюлозы. Лист насыщают буфером и пропускают через него электрический ток. Напряжения в несколько сот вольт достаточно для разделения белков сыворотки в течение 1 ч. Для ускорения процесса и снижения диффузии низкомолекулярных веществ широко используют высоковольтный электрофорез. Прикладываемое напряжение составляет в этом случае 2—3 тыс. вольт. Образец постоянно охлаждают с помощью термостатируемых пластин иногда для той же цели всю систему погружают в сосуд с керосином. Электрофоретическое разделение больших количеств материала проводится в плоских лотках, заполненных крахмальным или каким-либо другим гелем. Одним из наиболее распространенных и чувствительных методов разделения белков является электрофорез в колонке, заполненной полиакриламидным гелем. Этот метод, в настоящее время сильно усовершенствованный, позволяет проводить разделение молекул одновременно и по размеру, и по электрическому заряду его называют методом электрофоретического молекулярного сита 127, 128]. [c.164]

В горизонтальных аппаратах для высоковольтного электрофореза одного типа охлаждение обеспечивается циркуляцией водопроводной воды в охлаждающей плите, изготовленной из металла. Металлическую плиту, разумеется, необходимо отделить от фильтровальной бумаги полиэтиленовой пленкой с соответствующими изоляционными свойствами. В аппаратах для высоковольтного электрофореза с водяным охлаждением фильтровальная бумага охлаждается и сверху и снизу двумя плитами, которые прижимаются друг к другу надувным резиновым кольцом. Если в ходе эксперимента применяли пришивание, то, для того чтобы обеспечить [c.113]

Метод пептидных карт представляет собой сочетание бумажной и тонкослойной хроматографии с высоковольтным электрофорезом. В качестве носителей используют силикагель или порошок целлюлозы. Вначале проводят хроматографию, для чего пробу наносят в точку вблизи одной стороны бумаги или пластинки, а затем под углом 90° проводят высоковольтный электрофорез. Метод применяют для разделения смеси низкомолекулярных соединений. [c.149]

Рис. 12.26. Способ переноса образца при двухмерном разделении методом высоковольтного зонного электрофореза на бумаге [82].

При высоковольтном электрофорезе градиент напряжения равен 50—100 В/см. Сила используемого тока также увеличивается, а следовательно, возрастает теплообразование и повышается температура бумаги. Для рассеяния образующегося тепла необходимо более эффективное охлаждение. [c.113]

Буферный раствор состоит из 32 мл уксусной кислоты, 18 мл пиридина и 1950 мл дистиллированной воды. Стартовая точка находится на расстоянии одной трети длины листа от катода. Гидролизат наносят на сухую бумагу, причем стартовое пятно должно быть как можно меньше. Электрофорез продолжается 110 мин при градиенте напряжения 80 В/см. Если нет высоковольтной аппаратуры, то можно работать при среднем напряжении, пропорционально увеличив продолжительность электрофореза. Аппарат с непосредственным жидкостным охлаждением нельзя применять для первого электрофореза, поскольку ДНС-производные Про, Вал, Иле, Лей, Фен и Тир могут быть экстрагированы органическими растворителями. [c.276]

То же, выпускается также в рулонах шириной 1 м. 20—22. Мягкая бумага ( быстрая ). 23—27. Средняя бумага. 28—31. Жесткая бумага ( медленная ).. 32—37. Промытые сорта бумаг W 20—31. 38—40. Для препаративных работ. 41. Для высоковольтного электрофореза. 43— [c.151]

В последние годы методы определения аминокислот были значительно улучшены были достигнуты высокие выходы из относительно малых количеств исходных веществ. При применении соответствующих буферов и высоковольтного электрофореза на бумаге для 10—20 мкг аминокислот открытие составило 100 5% [c.402]

В книге изложены современные химические методы, применяемые в исследованиях по биохимии белка. В сжатой форме автор дает описание различных методов и на конкретных примерах показывает возможности их успешного использования. Большое внимание уделяется описанию методов исследования состава и структуры индивидуальных белков хроматографии на бумаге, ионообменной хроматографии аминокислот и пептидов (на смолах), высоковольтного электрофореза на бумаге, определения последовательности аминокислот в белках и др. Описание отдельных методов сопровождается большим числом иллюстраций, изображающих используемую аппаратуру. [c.4]

Упомянем также об обнаружении фосфорилированных под действием киназ аминокислот после кислотного гидролиза белков. В этом случае наиболее удобным оказался двумерный высоковольтный электрофорез на бумаге ( Whatman ЗММ ) при pH 3,5 и 1,9 [ linton et al., 1982]. [c.485]

Метод высоковольтного электрофореза на бумаге [c.53]

Методом высоковольтного электрофореза на бумаге ири напряжении 1—1,5 кВ в среде 0,1 М КС1 можно разделить Сг и СгО за 5—10 мин [19]. [c.53]

В установках другого типа, где бумага зажата между твердыми поверхностями или погружена в непроводящую жидкость, испарение полностью предотвращается. В этом случае легче добиться воспроизводимости положения зон и измерить подвижность, но зоны часто получаются более широкими, вероятно, из-за влияния слоя жидкости, образующегося между поверхностью бумаги и оболочкой, даже если последняя и не смачивается водой. При такой конструкции прибора легче осуществить хороший теплоотвод и можно резко повысить напряженность поля до 50 в см и более, уменьшив время разделения до десятков минут. Такой высоковольтный электрофорез, часто в сочетании с хроматографией, успешно применяется для быстрого разделения аминокислот, пептидов и других низкомолекулярных объектов. Белки этим методом разделяются плохо. [c.94]

Сушественное значение имеет содержание влаги в бумаге. Крупнопористые бумаги с большим содержанием влаги дают обычно худшие результаты. Важен также способ расположения бумаги в аппарате — горизонтальный, вертикальный, с изгибами, насколько высоко от уровня жидкости в сосуде с электролитом находится бумажная полоска и т. д., так как этим определяется распределение влаги вдоль нее. Описание различных конструкций имеется в обзорах [6, 20, 33, 36, 37, 38], а по высоковольтному электрофорезу — [33, 39]. [c.94]

Для анализа белковых гидролизатов разработаны очень удобные хроматографические методы. Тем не менее электрофорез, особенно электрофорез на бумаге, очень часто применяют, когда смеси не очень сложны и когда имеющиеся в смеси аминокислоты значительно отличаются по кислотно-основным свойствам. Пример успешного разделения довольно сложной смеси приведен на рис. 16. Электрофоретическое разделение аминокислот можно провести очень быстро, особенно если применить высоковольтный электрофорез. Проявление электрофореграмм осуществляют с помощью нингидрина. [c.105]

Приборы для высоковольтного электрофореза снабжаются устройством для отвода джоулева тепла. Чаще всего используется система постоянного теплоотвода [34, 107]. Прибор с жидкостным теплообменником проще по конструкции (правда, отвод тепла в нем менее эффективен) и позволяет получить очень однородную миграцию зон. Для отвода тепла используются такие инертные жидкости, как толуол, высщие фракции нефти, например с т. кип. 145—200 °С или фторированные углеводороды. Пропитанную буферным раствором бумагу помещают в жидкость, которую можно охлаждать с помощью погруженного в нее холодильника. [c.291]

Рис. 51. Подвижность антибиотиков группы тетрациклина (тетрациклина, хлор- и окситетрациклина) в электрическом поле. Высоковольтный электрофорез на бумаге (Дг = 25 в/см).

Более быстрым методом разделения пептидов энзиматического гидролизата является метод пептидных карт ( отпечатка пальцев , или фингерпринта ), сочетающий высоковольтный электрофорез и хроматографию на бумаге. С помощью этого метода возможно сопоставление пептидных смесей, получаемых при расщеплении различных белков, и выявление столь малых различий в аминокислотном составе отдельных пептидов, как замещение единичной аминокислоты какой-либо другой. Такие различия имеют большое значение при сравнительном изучении гомологичных белков различных видов растений и животных, а также прй определении генетических изменений в структуре белка, возникающих в результате точечной мутации. [c.81]

ВЫСОКОВОЛЬТНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ НА БУМАГЕ [c.40]

До самого последнего времени проводилось лишь качественное разделение аминокислот. Однако теперь почти не остается сомнений в том, что при помощи высоковольтного электрофореза на бумаге можно получить довольно хорошие количественные результаты. Уже предварительные исследования [12, 22] показали, что при электро- [c.48]

Зонный электрофорез на бумаге. Различают бумажный электрофорез низковольтный (при градиенте напряжения 20—30 В/см) и высоковольтный (с градиентом напряжения до 200 В/см). Высоковольтный электрофорез применяют для разделения низкомолекулярных соединений. Приборы оборудуют устройствами для отвода джоулевой теплоты, для чего используют инертные жидкости (тетрахлорид углерода, толуол), в которые помещают пропитанные буферным раствором бумажные полоски (фореграммы). Сама жидкость охлаждается с помощью погруженного в нее холодильника. [c.363]

В смеси инертных комплексов миграция их под действием диффузионных электрофоретических или каких-либо других сил происходит для каждого сорта ионов с характерной скоростью. На этом основано применение хроматографии при синтезе комплексных соединений. Хроматография и электрофорез могут быть использованы при синтезе, очистке и разделении координационных соединений. Например, очистка [Сг(ННз)в] " от [Сг(ННз)б (Нр) и [Сг(ЫНз)4 (Н20)2] на ионообменной колонке с AljOg использование для синтеза хлороаквокомплексов Rh , и и т. д. высоковольтного электрофореза на бумаге. [c.195]

Т. к. раств. в воде, для выделения из клеточной стенки их обычно Экстрагируют 10%-ной трихлоруксусной к-той при 2-4 °С в течение 24 ч с послед, осаждением этанолом или ацетоном. Более продолжит, экстракция может приводить к частичному гидролизу фосфодиэфирных связей или потере О-ацильных заместителей. Иногда Т.к. экстрагируют водным р-ром NaOH или диметилгидраэином, но в этих условиях более вероятна частичная деструкция полимера. Ли-по-Т. к. выделяют обработкой разрушенных клеток водным фенолом. Дальнейшую очистку Т.к. проводят методами гель-хроматографии, ионообменной хроматографии, высоковольтного электрофореза на бумаге и аффшшой хроматографии на лектинах. [c.510]

По сравнению с хроматографией на бумаге разделение веществ при помощи электрофореза происходит гораздо быстрее (время разделения при высоковольтном электрофорезе составляет от 1 до 2 час). Подбором соответствующего pH при помощи буфера можно добиться разделения даже очень близких веществ. На рис. 486 показаны примеры разделения смеси аминокислот и пептидов на приборах со средним и высоким напря кением. [c.541]

Важнейшей деталью аппаратуры для электромиграции является источник постоянного тока. Для электрофореза на бумаге необходим источник с регулируемым напряжением порядка 200—600 б и с силой тока до 50 ма, для высоковольтного электрофореза — источник с напряжением 3000—10 ООО б и с силой тока до 500 ма. При электромиграции в геле или в пористой среде сила тока достигает 1 а при напряжении 200—600 в. Наиболее подходящим источником постоянного тока являются выпрямители с регулировкой выходного напряжения в требуемом диапазоне, питающиеся от обычной электросети. При небольшой силе тока достаточен, например, простой селеновый выпрямитель при электромиграции в агаре или силикагеле используют тиратроновые выпрямители и т. д. В большинстве случаев специального охлаждения не требуется. [c.542]

Исследована [1332] подвижность комплексов 8Ь(1П), Зп(1У) Hg(II), РЬ(П), В1(П1), А (1), Си(П), 2п(П), Мп(П), №(П), Со(П) и Ре(1П) с ЭДТА и нитрилотриуксусной кислотой при высоковольтном электрофорезе (10 000 й) при pH 3—8. Изменение концентрации указанных веществ в пределах 0,01—0,05 М по-разному влияет на подвижность и размер пятен указанных элементов. Нитрилотриуксусная кислота оказалась более эффективной. Иногда вместо введения комплексообразующих реагентов в анализируемый раствор используют бумагу, импрегнированную этими реагентами [1116]. [c.118]

Электрофорез не заменяет хроматографию, но дает очень ценную дополнительную информацию, так как разделение при электрофорезе основано на других свойствах молекул (заряд, размер, форма). Высоковольтный электрофорез на бумаге применен для разделения не только моно-, но и олигосахаридов. Этот метод может быть использован не только для производных углеводов, содержащих заряженную группу (как, например, гексуроновые кислоты, аминомоносахариды, сульфаты и фосфаты моносахаридов), но и для нейтральных соединений, способных образовывать заряженные комплексы с такими электролитами, как борат, арсе-нит или молибдат натрия. Относительные подвижности углеводов зависят от природы комплексообразователя [57]. Правильный выбор электролита часто позволяет идентифицировать углевод. Разделение кислых полисахаридов [58] проводят с помощью высоковольтного электрофореза на бумаге, нейтральные полисахариды предварительно превращают в боратные производные [59]. [c.226]

Общие методы разделения включают хроматографию в смесях водных и органических растворителей или электрофорез, или и то и другое на бумаге. Из двух методов более медленным является хроматография, в то время как высоковольтный электрофорез может быть проведен в течение 30 мин. Способы обнаружения фосфатов на бумаге варьируют в зависимости от исследуемых соединений наличие в молекуле нефосфатного фрагмента может позволить применить быстрый недеструктивный метод анализа, например нуклеотиды можно определять по поглощению в УФ-свете. [c.411]

Аппараты для высоковольтного электрофореза, относящиеся к другой группе, устроены таким образом, что фильтровальная бумага погружена в охлаждающую жидкость, не смешивающуюся с водой тепло, воспринятое этой жидкостью, поглощается затем в системе водяным охлаждением. В таких аппаратах бумага помещается вертикально между двумя ваннами, содержащими буферный раствор. В связи с вертикальной укладкой бумаги важно правильно выбрать полярность электродов. Из-за электроэндоосмоса происходит перемещение буферного раствора от анода к катоду. Если, например, отрицательный полюс источника тока соединить с верхней ванной, то специфическое образование хвостов при электрофорезе, вызванное электроэндоосмотическим потоком снизу вверх,, будет полностью компенсировано неспецифическим образованием хвостов , обусловленным движением буферного раствора сверху вниз под влиянием силы тяжести. [c.114]

Для разделения Zn, u и Ga был использован метод высоковольтного электрофореза на бумаге Ватман № 3 [637]. Разделение проводят в 0,1 М растворе винной кислоты при напряжение 80 в/см в течение 28 мин. при 25 С. Этот же метод используется для количественного анализа смеси 38 неорганических июнов (в том числе Ga +) на бумаге Ватман № 1 в 1 лимонной кислоте при 30 в/см и силе тока 2—3 ма [1309. [c.65]

Применение ацетата целлюлозы для двумерного разделения меченых нуклеотидов описано в работах [И, 66]. Сэнджер с сотр. [66] разделял смеси компонентов нуклеиновых кислот из Es heri hia соИ. Сначала проводили высоковольтный электрофорез на 3-сантиметровых полосках ацетата целлюлозы, после чего разделенные компоненты промоканием переносили на ДЭАЭ-бумагу. Затем проводили электрофорез на бумаге. Полученную электрофоретограмму высушивали и авторадиографиро-вали. Таким образом достигалось разделение сложной смеси нуклеотидов. С некоторыми видоизменениями метод использовали и другие исследователи [12, 67]. [c.155]

Простая, но изящная методика высоковольтного электрофореза развилась на основе работы Виланда [1], вышедшей в 1948 г. В ряде случаев при помощи этой методики удается получить удовлетворительные результаты при разделении аминокислот или пептидов в условиях традиента потенциала 5—20 в1см, однако для разделения сложной смеси этих веществ такие условия оказываются недостаточными. Высокие скорости диффузии веществ с низким молекулярным весом ограничивают аналитические возможности электрофореза на бумаге поэтому исследователи начали проводить опыты в условиях градиента потенциала 50—200 в см. Четкая очерченность зон при таких градиентах потенциала видна на фиг. 21 и 22. [c.40]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология