Селекция клеток также по типам

Способы селекции. Как указывалось выше, генетическая природа используемых маркеров может быть различна. По-видимому, тип получаемых вариантов зависит от способа селекции. Следующие способы могут быть использованы для получения устойчивых к ядам вариантов соматических клеток 1) массовую культуру чувствительных клеток обрабатывают ядом в определенной концентрации, так что большая часть клеток погибает и выживает незначительная часть популяции с частотой 10 —10 такая селекция называется одношаговой, она не дает возможности получать высокоустойчивые варианты 2) популяции клеток обрабатываются ядом в концентрации, при которой погибает только некоторая часть клеток и через несколько клеточных генераций почти все клетки становятся устойчивыми к яду в данной концентрации при этом способе селекции, последовательно повышая концентрации яда и повторяя циклы, можно получить высокоустойчивые варианты, такая селекция называется многошаговой. Вариантом второго способа селекции может быть чередование культивирования клеток на среде с ядом и без яда. Подращивая выжившие после обработки ядом клетки на среде без яда, можно также получать высокоустойчивые варианты Изменения в геноме клеток, полученных в результате одношаговой и многошаговой селекции, могут быть различны. Во всех случаях очень важно, какое время вновь полученные варианты культивируются на среде с селективным агентом. [c.148]

Векторы для спаренных генов с внутреннйм промотором не эксплуатируют вирусную систему сплайсинга. Однако нередко и они не могут обеспечить эквивалентную экспрессию обоих генов. Кроме тех случаев, когда LTR или внутренний промотор оказываются неспособными эффективно функционировать в инфицируемых клетках конкретного типа, экспрессия любого маркера может подавляться также вследствие неблагоприятного взаимодействия двух промоторов. Эмерман и Темин [23], работая с вектором, содержащим внутренний промотор, обнаружили, что селекция, направленная на экспрессию 5 -гена, вызывает эпигенетическую супрессию З -промотора и наоборот. Хотя Э шт эффект, зависящий от специфического сочетания используемых промоторов, по-видимому, наиболее ярко проявляется в векторах, основанных на ретровирусах птиц, он также свойствен я векторам, принадлежащим к семейству MLV [24]. [c.304]

Основными методами, позволяющими проводить широкий круг экспериментов на этих клетках, являются методы получения клонов, происходящих из одной клетки, и методы создания селективных условий, позволяющих выявлять и изолировать мутантные формы, частота спонтанного возникновения которых равна примерно 1(Н в популяции клеток дикого типа. Это относится также к генно-инженерным модифицированным клеткам, которые получаются с относительно низким выходом, но могут быть селектированы с помощью стандартных приемов селекции соматических клеток. Особо следует отметить методы направленного изменения функций тех или иных генов с помощью гомологичной рекомбинации (таргетинг генов). [c.250]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология