Дрожжи создание плазмид

Генно-инженерное конструирование у дрожжей пошло по пути создания кольцевых плазмид с центромерами, а затем искусственных мини-хромосом, имеющих центромеру, теломеры и репликаторы (см. гл. 6). Таким образом, трансформация эукариот облегчается созданием векторов с репликаторами, специфичными [c.278]

Плазмида S p 1 является прекрасной модельной системой для изучения контроля экспрессии эукариотических генов и репликации хромосом. Зная молекулярно-биологическую организацию данной плазмиды, можно эффективно использовать ее для создания молекулярных векторов, последующего конструирования гибридных ДНК и введения их в клетки дрожжей. [c.291]

Обычно векторы для клонирования в таких системах представляют собой двойные репликоны, которые мог т существовать и в Е. OU. и в той клетке-хозяине. для которой они предназначены. Это достигается созданием гибридных векторов, содержащих реп-ликон какой-либо из плазмид Е. oli и требуемый репликон, например плазмиды В. subtilis или дрожжей, что позволяет проводить первоначальное клонирование и отбор требуемых генов в хорошо изученной системе Е. oli, а затем уже вводить выделенные рекомбинантные плазмиды в новый организм. [c.439]

Таким образом, описанный подход позволяет распределить копии чужеродных генов по разным участкам дрожжевого генома. Он может оказаться перспективным при создании про-мьш1ленных штаммов дрожжей, экспрессирующих чужеродные гены. Такие штаммы должны более стабильно сохранять свойства суперпродукции чужеродного белка (за счет дозы гена), чем штаммы, несупдае многокопийные внехромосомные плазмиды. Последние, как правило, с относительно высокой частотой утрачиваются клетками, особенно при отсутствии селективного давления по маркерам плазмид. [c.298]

Успешное создание гибридной линейной плазмиды, несущей на концах теломеры рДНК тетрахимены, позволило в дальнейшем клонировать теломерные последовательности из хромосом дрожжей. С этой целью Дж. Шостак и [c.306]

В настоящее время при создании экспрессирующих векторов идут несколько иным путем используя промоторы хорошо охарактеризованных генов S. erevisiae. Как правило, первоначально клонируют целевой ген, изучают его экспрессию в клетках дрожжей и расшифровывают нуклеотидную последовательность. Затем по выбранной стратегии выщепляют промотор и вводят в определенную векторную плазмиду. [c.311]

Все больший интерес вызывает создание управляемых экспрессирующих систем, так как конститутивная экспрессия чужеродного гена, клонированного в многокопийной плазмиде, приводит, как правило, к заметному метаболическому сдвигу в трансформированной клетке. В зависимости от природы гетерологичного продзто а этот сдвиг может осложняться токсическими эффектами, различными как по механизму, так и по степени тяжести. В идеале включение экспрессии целевого клонированного гена должно происходить в тот момент, когда культура дрожжей выращена до достаточно высокой плотности. При этом запускающий такую [c.314]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология