РАС pNS создание ТАС-векторов

ДНК, определяющих данный механизм 3) целенаправленное изменение последовательностей генов запасных белков для улучшения аминокислотного состава 4) создание векторов, содержащих измененный ген 5) введение модифицированных генов в растения. [c.150]

Последняя группа статистических функций служит для создания векторов с определенными законами распределения значений их элементов. Они начинаются с буквы г — например гЬе(а(т,.у1,.й) и т. д. [c.64]

Степень полинома к = з Создание векторов X, и У исходных данных [c.67]

Принципиально новым направлением в лечении болезней является генная терапия. Десять лет назад о нем было широко объявлено как о начале новой эры в медицине. С теоретической точки зрения ее преимуш ества не вызывают сомнений. Но когда после первых экспериментальных успехов начались клинические испытания, специалистам пришлось несколько разочароваться — этот способ лечения оказался технически более сложным, чем ожидали первоначально. Что поделать, природа не так уж легко раскрывает свои тайны. Тем не менее от этих исследований не только не отказались, но продолжают широко развивать (особенно в области лечения злокачественных заболеваний). Идет кропотливейшая работа по созданию векторов, выбору болезней и клеток-мишеней, способов введения генов. Большая часть имеющихся сегодня клинических данных относится к первой и второй фазам исследования, т. е. проверяется безопасность введения генных конструкций и эффективность переноса гена. О терапевтических результатах, т. е. о третьей фазе клинических протоколов, сведений пока мало [c.143]

Адаптация генно-инженерных методов к этим видам микроорганизмов затруднена в связи с отсутствием удобных векторных молекул и способов введения в клетки коринебактерий чужеродной ДНК. Плазмиды обнаружены у многих коринебактерий, но все они оказались криптическими. До настоящего времени не удалось использовать ни один репликон других бактерий для создания векторов у коринебактерий. Имеющиеся векторы представляют собой гибридные молекулы, содержащие репликон криптической плазмиды коринебактерии и гены, кодирующие устойчивость к антибиотикам из плазмид других бактерий (табл. 5). Сложность конструирования таких векторов связана не только с трудностью идентификации криптических плазмид, но и с тем, что внедрение селективных маркеров производится наугад, так как не известно строение репликона этих плазмид. [c.174]

Генно-инженерное конструирование у дрожжей пошло по пути создания кольцевых плазмид с центромерами, а затем искусственных мини-хромосом, имеющих центромеру, теломеры и репликаторы (см. гл. 6). Таким образом, трансформация эукариот облегчается созданием векторов с репликаторами, специфичными [c.278]

Для создания векторов нового тжш требуются компактные невирусные ARS-последовательности с изученной модульной структурой и понимание взаимосвязи процессов автономной репликации и транскрипции в экстрахромосомных трансгенах. [c.242]

При введении клонированных генов в клетки млекопитающих в процессе генетической трансформации множественные копии этих генов интегрируются в геном клетки. У независимо отобранных трансформированных клеток места интеграции чужеродной ДНК в хромосомы различаются. Это может приводить к тому, что уровень экспрессии введенных генов в разных клонах будет варьировать за счет влияния прилегающих участков хромосом (эффект положения гена). Одна из возможностей преодолеть данные затруднения возникла в 1981 г. после создания векторов на основе ДНК вируса папилломы быка типа 1 (BPV-1). [c.366]

Ген опина несуществен для трансгенных растений, но при его наличии может снижаться конечный выход биомассы, поскольку часть ресурсов расходуется на синтез опина. Следовательно, при создании векторов ген опина также должен быть удален. [c.377]

Почему Ti-плазмида из Agroba terium tumefa iens подходит для создания вектора - переносчика чужеродного гена в хромосомную ДНК растения [c.388]

На рис. П.20 показаны сигналы нутации, которые появляются в момент включения света, т. е. в момент создания вектора намагниченности, затем затухают и сигнал достигает стационарного значения, соответствующего отрицательной намагниченности протоиов трег-бутилхлорида. После выключения света ХПЯ прекращается, вектор намагниченности релаксирует к новому равновесному значению, и его быстрое изменение снова вызывает нутации. После затухания нутаций сигнал достигает равновесного значения, соответствующего нулевой намагниченности. Это означает, что трет-бутилхлорид за время фотолиза практически не образуется и нутации обусловлены только вектором намагниченности, созданным за счет ХПЯ. [c.193]

Векторы на основе бактериофага Я. Бактериофаг Я. — это вирус, размножающийся на бактериях Е. соИ. За последние 3U лет он стал излюбленным и наиболее изученным объектом генетиков и молекулярных биологов. Геном фага Я. представлен двуцепочечной ДНК размером в 48,5 т.п.о., которая упакована в головку фага в виде линейной молекулы с однонитевыми комплементарными концами длинои в 12 п.о. (липкие концы). После проникновения в клетку липкие концы объединяются и ДНК замыкается в кольцо. Кольцевая ДНК является репликативной формой. Возможность создания векторов на основе фага Я связана с тем его свойством, что гены центральной части (от I до N) несущественны для литического развития. Уже более 20 лет известны способы замещения центральной части фага сегментами бактериальной хромосомы путем определенных генетических манипуляций in vivo. Созданные таким образом специализированные трансдуцирующие фаги хорошо изучены. Идея провести манипуляцию замены центральной части ДНК фага Я in vitro на чужеродные фрагменты послужила поэтому логическим продолжением опытов in vivo. [c.147]

Одной из основных целей генно-инженерных работ на бациллах является создание векторов, способных экспрессировать чужеродные гены и секретировать в окружающую среду продукты этих генов. С этой целью чужеродный ген помещают за участком ДНК, кодирующим сигнальную последовательность хорошо экспрессируемого и секретируемого бациллярного белка. Наглядными примерами такого подхода служат работы по секреции человеческого интерферона а2 под контролем регуляторных элементов и сигнального пептида а-амилазы или человеческого -интерферона под контролем промотора и регуляторной области нейтральной протеазы Вас. amyloliquefa iens (см. гл. 4). Во всех случаях наблюдается секреция чужеродных белков в среду, причем отщепление сигнального пептида осуществляется точно перед чужеродным белком. Из этого следует, что фермент сигнальная пептидаза узнает последовательности сиг- [c.173]

Влияние микроорганизмов не всегда позитивно некоторые из них вызывают тяжелые заболевания у человека, животных и растений. Нередки случаи, когда микроорганизмы приводят к порче сельскохозяйственной продукции, разрушению подземных частей зданий, трубопроводов и металлических конструкций шахт. Изучение свойств таких микроорганизмов позволяет разработать эффективные способы защиты от вызываемых ими повреждений. С другой стороны, положительное значение микроорганизмов для практики невозможно переоценить. С помощью грибов и бактерий готовят хлеб, вино, пиво, квас, молочнокислые продукты, закваски. При участии микробов получают ацетон и бутанол, уксус, лимонную кислоту, некоторые витамины, ряд ферментов, антибиотики и каротиноиды. Микробы участв(уют в трансформации стероидных гормонов и других соединений. Их используют для получения белка и ряда аминокислот. Реализуется идея использования микробных ферментов в диагностических целях. Применение микробных комплексов для превращения сельскохозяйственных отходов в биогаз (смесь метана и углекислоты) или этанол открывает возможность создания принципиально новых систем восполнения энергетических ресурсов. В последние годы микроорганизмы, особенно прокариоты, широко применяют в качестве объектов генной инженерии для клонирования генов и создания векторов. [c.21]

Трансформация протопластов изолированной ДНК. Впервые достоверная возможность химической трансформации растений бьша показана в опытах с двудольными. Их протопласты обрабатывали в присутствии полиэтиленгликоля вьщеленными Ti-плазмидами. После регенерации стенки клетки Tajin опухолевыми, а ДНК обнаружилась в ядрах, причем Т-ДНК оставалась в составе Ti-плазмид (Krens et ai, 1982). Этот результат позволил приступить к созданию векторов, предназначенных для переноса генов в растения без использования агробактерий. [c.382]

В создании векторов на основе элементов EBV можно выделить две стратегии (а) конструирование рекомбинантных плазмид, включающих как ori Р, так и ген EBNA-Г, (б) конструирование плазмид, которые включают только ori Р или один из его двух элементов (DS или FR). В последнем случае выявление характеристик экстрахромосомного поддержания конструкций проводится в клетках конститутивно продуцирующих белок EBNA-1. [c.222]

Завершая краткое рассмотрение плазмидных векторов второго поколения, следует подчеркнуть, что это были уже искусственно созданные вектора, но без каких-либо синтетических последовательностей нуклеотидов и с естественным расположением сайтов узнавания для рестрикционных эндонуклеаз, включая гексануклеотидные. [c.213]

Таким образом, третье поколение плазмидных векторов несет в себе кардинально новые черты, не присущие векторам предыдущих поколений, которые не могут случайно возникнуть в природе, и объединенные в одном векторе экспериментаторами. Считаем важным подчеркнуть, что для создания векторов третьего поколения потребовалось удаление сайтов узнавания некоторых гексануклеотидных рестрикционных эндонуклеаз в последовательности вектора ввиду их присутствия в полилинкере с целью использования данных ферментов для молекулярного клонирования. [c.217]

Интересной областью исследований является также создание векторов, при встройке в которые кодирующих последовательностей формируется гибридный участок связывания рибосом. В данном случае в векторной части плазмиды содержится последовательность, включающая промотор и SD-участок (см. 3.3), а встраиваемый структурный ген должен содержать инициаторный триплет ATG. В такой гибридной плазмиде транскрипция чз еродного белка ршициируется с промотора вектора, а трансляция — с гибридного участка связывания рибосом. При этом синтезируются нативные чз е-родные полипептиды. [c.128]

Таким образом, проблема создания векторов, обеспечивающих правильную и эффективную экспрессию чужеродных генов в клетках Е. oli, в целом решена. Однако это не означает, что не будут создаваться новые, более эффективные векторы экспрессии, в том числе обеспечивающие секрецию целевых белков из цитоплазмы клетки. [c.130]

В результате серии генно-инженерных реконструкций был создан вектор экскреции рЕАР8 (см. рис. 2.50, б), который содержит селективный маркер m ", промотор, участок связывания рибосом и ген-эквивалент сигнального пептида пенициллиназы Ba illus sp., а также искусственный генетический элемент Ех-к. На примере гена гормона роста человека (hGH) продемонстрировано, что такой вектор обеспечивает в Е. соИ эффективный синтез, секрецию через плазматическую мембрану с отщеплением сигнального пептида и экскрецию из клеток зрелой формы hGH. [c.136]

Таким образом, в качестве селективного маркера при встройке фрагментов ДНК в плазмиду RSF1010 может выступать лишь ген sul, однако многие виды бактерий относительно нечувствительны к сульфаниламидам, и поэтому данный генетический маркер имеет ограниченное применение при создании молекулярных векторов для широкого круга хозяев. Попытки преодолеть данное затруднение путем создания векторов на основе репликона RSF1010 и разных детерминант устойчивости к антибиотикам были предприняты в ряде лабораторий. [c.216]

Рассмотренные примеры со всей очевидностью демонстрируют огромные перспектршы использования векторной системы, предназначенной для клонирования и экспрессии чужеродных генов в широком спектре грамотрицательных бактерий. Важно отметить, что при создании векторов данного типа активно используются опыт и знания, накопленные в ходе разработки генно-инженерной системы Е. oli. [c.229]

Основным преимуществом бацилл с точки зрения создания молекулярных векторов является их способность секретировать из клеток в культуральную среду большие количества определенных белков. Это связано с тем, что клеточная стенка у грамположительных бактерий организована более просто, чем у грамотрицательных. Исходя из общности механизмов секреции белков через плазматическую мембрану в клетках различных типов, чрезвычайно заманчиво конструировать методами генетической инженерии гибридные гены, в которых чужеродная кодирующая последовательность состыкована с ген-эквивалентом сигнального пептида какого-либо секретируемого белка Ba illus. Если детерминируемый таким искусственным геном химерный продукт будет способен секретироваться в культуральную среду, то это значительно упростит очистку изучаемого белка. Возможно, в таком случае чужеродный белок в бактерии будет синтезироваться интенсивнее, чем в варианте без секреции, так как он в меньшей степени будет нарушать метаболизм клеток. Данное направление исследований — изучение механизма секреции, создание векторов экспрессии-секреции — в генетической ин-, женерии бацилл имеет большое практическое [c.233]

A. И. Степанов с сотрудниками (1982 г.) предложили модель, объясняющую этот факт (см. рис. 10.3, 7). Важно подчеркнуть, что делеции в природных плазмидах стрептококков, уменьшающие размер инвертированных повторов, часто не снижают эффективности трансформации ими клеток В. subtilis. Это наблюдение использовали сотрудники лаборатории Степанова при создании вектора Др8М19035 и клонировании в его составе рибофлавинового оперона [c.246]

Смотреть страницы где упоминается термин РАС pNS создание ТАС-векторов: [c.120] [c.126] [c.61] [c.119] [c.320] [c.66] [c.320] [c.129] [c.86] [c.195] [c.434] [c.213] [c.51] [c.210] [c.214] [c.222] [c.226] [c.227] [c.248] [c.268] [c.296] [c.129] [c.223] [c.256] [c.257] [c.320]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология