Антитело связывание с ферритином

Принцип использования флуоресцирующих антител был приспособлен и для электронной микроскопии антитела или гаптены соединяются с электроноплотными веществами (например, с железосодержащим белком ферритином) или такими, которые могут быть сделаны электроноплотными уже после реакции антиген — антитело (например, с антителом связывается пероксидаза из хрена, которой после связывания дают возможность реагировать с диаминобензидином). На практике используется множество комбинаций, включающих антисыворотки с различными специфичностями, фрагменты антител, гаптены, а также такие маркеры для визуализации, как небольшие вирусы и т. п. Эти методы, применимые к целым бактериям, позволяют локализовать поверхностные антигены точнее, чем это делают с помощью оптического микроскопа. Преимущества электронной микроскопии становятся еще более очевидными, когда меченые антитела применяют еще до фиксации, заливки и приготовления срезов, так что метка видна в тонких срезах. В некоторых случаях аналогичным образом метят не антитела, а другие вещества с известной специфичностью чаще всего применяются лектины растений, такие, как конканавалин А, которые специфично связываются с сахарными остатками [88]. [c.125]

Сыворотка, полученная от животных, которым вводили конъюгированный гаптен, может помимо широкого набора антител содержать балластные белки, способные мешать связыванию антител с твердым носителем. Во избежание этого исходную антисыворотку очищают с помощью двух-, трехкратного осаждения 30%-ным сульфатом аммония и диализа (Апаокаг et al., 1979) или ионообменной хроматографии (Rathnam, Saxena, 1984). Для создания покрытия на поверхности носителя можно использовать и неочищенную сыворотку, однако, поскольку белки на носителе адсорбируются неизбирательно, использование очищенных антител позволяет заметно повысить чувствительность анализа. В этом можно убедиться, сравнив данные, полученные с неочищенной кроличьей сывороткой, содержащей антитела к ферритину, и данные, полученные с сывороткой. [c.176]

ИФА, основанный на эффекте ингибирования субстратом фер-мента-метки. В качестве метки антигена используют пероксидазу хрена. Принцип метода основан на значительном отличии ферментативной активности исходного конъюгата и конъюгата в комплексе со специфическими антителами при детекции метки в присутствии 35 мМ перекиси водорода, которая является субстратом пероксидазы. Пероксидаза нативная и в конъюгате с антигеном в значительной степени ингибируется уже при концентрации перекиси 10 мМ, но сохраняет активность в конъюгате при связывании с соответствующими антителами. Новый подход апробирован на примере а-фетопротеина, ферритина, рг-микроглобулииа, дигоксина, иммуноглобулина Е. При длительности 20—30 мин метод позволяет определять до 10 нг/мл а-фетопротеина, что сопоставимо с чувствительностью гетерогенного ИФА. [c.118]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология