Флуоресцирующие антитела

Этот метод используется обычно при наблюдении клеток, обработанных флуоресцирующими антителами (разд. 14.3.2), или при изучении окрашенных акрихином хромосом (разд. 8.4.3). С помощью флуоресцентной микроскопии можно наблюдать нуклеиновые кислоты и другие клеточные компоненты при возбуждении их флуоресценции светом с длиной волны около 260 нм. Важно использовать достаточно мощный источник света с достаточно короткой длиной волны. Обычно для этой цели применяется ртутная лампа, но некоторые работы могут проводиться с более дешевой кварцевой иодидной лампой. [c.108]

Рис. 20-49. Микротрубочки и целлюлозные микрофибриллы в развивающихся волокнах хлопка. Микротрубочки (А) окрашены флуоресцирующими антителами и располагаются по спирали. Клетка расплющена , благодаря чему видны части спирали как на передней, так и на задней стенке. Вновь отложенные целлюлозные микрофибриллы в такой же клетке (Б) окрашены красителем калькофлюором белым, который при связывании с растущими молекулами целлюлозы лает свечение. Микро фибриллы, подобно укрепляющему корду садового шланга, лелают стенки хлопкового

Флуоресцирующие антитела представляют собой гамма-глобу-линовые фракции иммунных агглютинирующих сывороток, химически соединенные с флуорохромами. Вследствие этого они обла- [c.164]

В практике используется два принципа обработки препаратов флуоресцирующими антителами — прямой и непрямой методы. [c.165]

Большое число микротрубочек содержится в длинных аксонах нервных клеток. Здесь они, вероятно, обеспечивают быстрый перенос белков и других веществ из тела клетки в аксон Микротрубочки, функция которых неизвестна, обнаружены и во многих сенсорных клетках. Недавно было показано, что микротрубочки содержатся в цитоплазме самых разных клеток. Иопользуя непрямой метод флуоресцирующих антител, Вебер и др. получили приведенную ниже [c.276]

Клетки фиксировали формальдегидом, обезвоживали и подвергали воздействию антител, полученных путем иммунизации кроликов белком микротрубочек. Затем клетки обрабатывали флуоресцирующими антителами козы, специфичными. в отношении кроличьего у-глобулина (дополнение 5-Е), и [c.277]

Специфические флуоресцирующие антитела, специфичные к цитохрому с, связываются только с С-стороны внутренней мембраны, а антитела к цитохромоксидазе — с обеих сторон это дает основание думать, что этот белок пронизывает всю мембрану [66, 66а]. Одиако окисление цитохрома с (с участием цитохрома а) происходит только на С-стороне, а восстановление Ог (при участии цитохрома аз) — только на М-стороне [66]. Далее, антитела к фактору сопряжения , образующего шишковидные выступы, связываются только со стороны матрикса. [c.393]

Принцип использования флуоресцирующих антител был приспособлен и для электронной микроскопии антитела или гаптены соединяются с электроноплотными веществами (например, с железосодержащим белком ферритином) или такими, которые могут быть сделаны электроноплотными уже после реакции антиген — антитело (например, с антителом связывается пероксидаза из хрена, которой после связывания дают возможность реагировать с диаминобензидином). На практике используется множество комбинаций, включающих антисыворотки с различными специфичностями, фрагменты антител, гаптены, а также такие маркеры для визуализации, как небольшие вирусы и т. п. Эти методы, применимые к целым бактериям, позволяют локализовать поверхностные антигены точнее, чем это делают с помощью оптического микроскопа. Преимущества электронной микроскопии становятся еще более очевидными, когда меченые антитела применяют еще до фиксации, заливки и приготовления срезов, так что метка видна в тонких срезах. В некоторых случаях аналогичным образом метят не антитела, а другие вещества с известной специфичностью чаще всего применяются лектины растений, такие, как конканавалин А, которые специфично связываются с сахарными остатками [88]. [c.125]

Число специфических клеток микроорганизмов в природных образцах может быть установлено с помощью применения техники флуоресцирующих антител. Но для этого необходима предварительная подготовка, включающая выделение чистых культур ис- [c.257]

Рис. 5.33. Распределение микротрубочек в клетке. Микротрубочки расходятся от центра организации микротрубочек (ЦОМ), находящегося рядом с ядром. В ЦОМ содержится центриоль. Микротрубочки видны на этой микрофотографии благодаря использованию флуоресцирующих антител, способных специфически соединяться с их белком. Представленная здесь клетка — фибробласт фибробласты обычно содержатся в соединительной ткани в них синтезируется коллаген.

Рис. 20-15. Микротрубочки в кортикальном слое клетки из развивающейся ксилемы побега гороха. Обработка флуоресцирующими антителами выявляет спиральное расположение микротрубочек, которые определяют участок клеточной стенки, подлежащей утолщению сначала за счет отложений целлюлозы, а затем и лигнина (см. схему 20-1). Клетка крупная, поэтому глубина фокусного расстояния позволяет увидеть лишь

Тест с использованием флуоресцирующих антител [c.67]

Метод флуоресцирующих антител [c.208]

На каких химических принципах основана модификация компонентов клеточной поверхности с использованием в качестве реагентов следующих соединений а) лактопероксидазы, б) галактозооксида-зы, в) формилметионилсульфонметилфосфата, г) диазониевой соли дииодосульфаниловой кислоты, д) флуоресцирующих антител, е) антител, связанных с ферритином. Напишите уравнения соответствующих химических реакций. Укажите, какие поверхностные группы модифицируются. Перечислите преимущества указанных реагентов. [c.398]

Методика исследования микроколоний на мембранных фильтрах с помощью лю линесцентной микроскопии разработана для ускоренной дифференциации кишеЧной палочки и холерного вибриона. Однако эта методика не позволяет осуществлять специфическую окраску и дифференциацию патогенных от непатогенных микробов, имеющих одинаковые морфологические и физиологические свойства. Такая дифференциация осуществляется только с помощью метода флуоресцирующих антител. [c.164]

Новые возможности для усовершенствования определения общего числа микроорганиз.мов открылись с развитием люминесцентного анализа. Метод флуоресцирующих антител нашел широкое применение в микро- [c.90]

Перспективным методом и самым быстрым для обнаружения фекальных стрептококков группы D в воде является комбинация техники мембранных фильтров и флуоресцирующих антител. Время анализа — 10—12 ч (Pugsley, Evison, 1975). Значение быстрой идентификации фекальных стрептококков с помощью флуоресцирующих антител в оценке качества воды подчеркнуто Pavlova с соавт. (1973). [c.176]

У взрослого млекопитающего каждое волокно скелетной мышоы имеет в норме лишь одии синапс, и почти все ацетилхолиновые рецепторы сосредоточены иа участке мембраны, лежащем под окончанием аксона концентрация этих рецепторов здесь более чем в тысячу раз выше, нежели в областях, удаленных от синапса. С помощью флуоресцирующих антител (см. разд 6.215) было доказано, что рецепторы в области синапса каким-то образом закреплены и не могут свободно перемещаться в плоскости мембраны. Кроме того, этн белки лишь медленно обновляются-время их службы составляет не меньше пяти дней. [c.113]

Рнс. 19-55. Одиночная клетка моркови, растущая в культуре in vitro. Это сильно вытянутая цилиндрическая клетка была обработана флуоресцирующими антителами к тубулину, что позволило выявить опоясывающие ее кольцевые пучки микротрубочек. Ориентация микротрубочек в таких клетках определяет ориентацию целлюлозных мнкрофибрилл, откладывающихся в клеточной стенке. (С любезного разрешения .W. Lloyd.) [c.200]

В. Я. Ш е в л я г ин, Успехи соврем, биологии 45, вып. 2, 218 (1958). Обнаруя е-пие антигенов с помощью флуоресцирующих антител. [c.324]

Ермакова Г. И., ТарасевичЛ. М. Применение метода флуоресцирующих антител для обнаружения нолиэдренного антигена в яйцах (грене) тутового шелкопряда. — Вопросы вирусологии , 1968, № 1, с. 89—93. [c.333]

Рис. 20-42. А. Электронная микрофотография фрагмопласта в делящейся клетке растения. Микротрубочки направляют движение пузырьков, содержащих предшественники клеточной стенки, к растущей клеточной пластинке. Подробности см. на рис. 13-71. Б. Флуоресцентные микрофотографии цитокинеза клеток из кончика корня лука. Окрашивание флуоресцирующими антителами позволяет выявить развивающуюся клеточную пластинку и два набора микротрубочек фрагмопласта, располагающихся по бокам этой пластинки (слева) флуоресцентное окрашивание ДНК (справа) дает возможность увидеть расположение двух дочерних ядер, которые будут разделены новой клеточной стенкой. (А - о, любезного

Рис. 20-48. Расположение кортикальных микротрубочек. А. Тангенциальный срез клетки из кончика корня тимофеевки. Видны кортикальные микротрубочки, лежащие непосредственно под плазматической мембраной они расположены под прямым углом к продольной оси клетки. Б. Отдельная клетка кончика корня лука. В. Та же клетка, окрашенная флуоресцирующими антителами, эта обработка позволяет выявить характер расположения микротрубочек. (А -с любезного разрешения В. Gunning БиВ - с любезного разрешения К. Goodbody.)

В разные сроки после удаления колцемида клетки обрабатывали флуоресцирующими антителами к тубулину. Микротрубочки сначала появляются в виде звездчатых структур, а затем растут по направлению к периферии клетки. (М. Osborn, К. Weber, [c.107]

Молекулы фибронектина, коллагена, протеогликанов и гиалуроновой кислоты могут не просто содержаться во внеклеточном матриксе, а находиться в связи с поверхностью клеток. Способ прикрепления этих молекул к наружной стороне плазматической мембраны неясен, а вопрос о том, где кончаются компоненты, связанные с клеточной мембраной, и где начинается внеклеточный матрикс,-в значительной степени семантический. Например, гликока-ликс содержит и то и другое (разд. 6.3.1). При использовании флуоресцирующих антител для выявления фибронектина на поверхности культивируемых фибробластов оказывается, что фибронектин расположен удивительно регулярными рядами между соседними клетками и между клетками и субстратом (рис. 12-70, Л). Если же клетки обработать цитохалазином, который разрушает внутриклеточные пучки актиновых филаментов, то волокна фибронектина отделяются от клеточной поверхности (точно так же, как во время митоза, когда клетки округляются). По-видимому, существует какая-то косвенная связь между внеклеточным фибронектином и внутриклеточными актиновыми филаментами. [c.240]

Клетки окрашиваются флуоресцирующим красителем, специфическим для отдельных клеточных компонентов (может быть использован бромид этндия в концентрации 0,1 мг/мл для окраски ДНК или флуоресцирующие антитела). Анализ окрашенных клеток производится по мере их прохождения одна за другой через сенсорное устройство. Так, при прохождении клетками расположенного перпендикулярно луча аргонового лазера (время прохождения 2—3 мкс) каждая клетка дает вспышку флуоресценции, которая может быть проанализирована как по интенсивности, так и по цвету. Кроме того, сигнал, соответствующий клеточному объему, может генерироваться путем установки диафрагмы счетчика Коултера на пути прохождения клеток либо, что проще, путем измерения рассеянного света вторым фотоумножителем, установленным под прямым углом к лазерному лучу. Информация, полученная в результате измерения флуоресценции клеток и светорассеяния, позволяет воссоздать трехмерную картину числа клеток, их объема и содержания в них ДНК. [c.140]

При обработке криостатных срезов мышечной ткани антителами к Са-АТФазе саркоплазматического ретикулума и вторыми флуоресцирующими антителами выявляется густая внутриклеточная сеть. На поперечном срезе клетки скелетной мышцы видны до 1000 ячеек, напоминающих по форме пчелиные соты. Система саркоплазматического ретикулума оплетает каждую миофибриллу (рис. 14). Различают свободный саркоплаз-матический ретикулум, или мембранные трубочки, и соединительный саркоплазматический ретикулум, или терминальные цистерны, контактирующие с впячиваниями сарколеммы (/ -трубочками) или с самой сарколеммой. [c.52]

Главным инструментом при изучении антигенов клеточных мембран служат флуоресцирующие антитела. Соответствующий метод, впервые разработанный Кунсом и его сотрудниками еще в 1941 г. (обзор СоМтап, 1968), состоит в применении аитител, конъюгированных с флуорохромами, для определения точной локализации специфических антигенов на срезах ткаией или мазках. Этот метод, сочетающий гистохимические и иммунохимические подходы, благодаря своей универсальности, специфичности и простоте занял важное место в клеточной биологии. Чувствительность окрашивания можно повысить, если ис-пользовать непрямой метод. Прн этом немодифициро-ваниую специфическую антисыворотку наносят на исследуемый образец, и антитела соединяются с антигеном. Затем образец отмывают от избытка антисыворотки и обрабаты1вают меченными флуоресцеином антителами к иммуноглобулинам того вида животных, от которого была получена первая антисыворотка. [c.161]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология