Антитела связывание с клеточными поверхностям

Молекула антитела представляет собой белок, имеющий форму буквы X с двумя идентичными антиген-связывающими участками на концах боковых ветвей и с участками для связывания компонентов комплемента и/или различных рецепторов клеточной поверхности на Рс-области. Антитела защищают позвоночных от инфекций, инактивируя вирусы или бактериальные ток- [c.30]

Связывание антител с клеточными поверхностями [c.385]

Для выявления молекул клеточной поверхности, участвующих в межклеточной адгезии, белки плазматической мембраны солюбилизируют, отделяют друг от друга и каждую фракцию испытывают на способность нейтрализовать действие фрагментов антител, блокирующее агрегацию клеток (этапы 3 и 4). Затем фракции, проявившие такую способность, очищают и вновь тестируют до тех пор, пока не будет получен чистый белок (этот процесс на схеме не показан). Другой Иммунологический подход состоит в получении большого числа моноклональных антител (разд. 4.5.4) к антигенам клеточной поверхности и их скрининге для выявления тех, которые будут блокировать межклеточную адгезию. Оба иммунологических метода основаны на важном общем наблюдении простое нанесение на клеточную поверхность антител само по себе не препятствует нормальной клеточной адгезии адгезия блокируется только тогда, когда мишенями для связывания антител служат специфические молекулы клеточной [c.518]

Молекула антитела представляет собой белок, имеющий форму буквы Y с двумя идентичными антиген-связывающими участками на концах боковых ветвей (БаЪ-областей) и с участками для связывания с компонентами комплемента и/или различными рецепторами клеточной поверхности на стебельке (на F -области). Антитела защищают позвоночных от инфекций, инактивируя вирусы или бактериальные токсины и мобилизуя комплемент и различные клетки, которые убивают и поглощают внедрившиеся микроорганизмы. [c.237]

Выявление внутриклеточных антигенов [89] в интактных бактериях представляет собой более сложную задачу, чем локализация поверхностных антигенов, так как антитела не способны проходить через интактную клеточную оболочку. Поэтому методы решения задач такого рода опираются прежде всего на приготовление тонких срезов бактерий, переносимых затем на поверхность растворов с мечеными антителами, после чего следует промывка, иногда окрашивание и затем исследование с помощью электронного микроскопа. Главная трудность заключается в выборе среды для заливки, которая должна давать доступ для связывания антителам в водном растворе. В этих целях испробовано много различных веществ (метакрилаты, сшитый альбумин, различные протравленные пластмассы и эпоксидные смолы), но ни одно из них не может считаться удовлетворительным во всех отношениях в этой области необходимы дальнейшие исследования. Интересующиеся могут получить общее представление о методах и проблемах иммуноцитохимии или иммуноэлектронной микроскопии, изучив предлагаемую литературу [87—91]. [c.126]

Как мы отмечали в разд. II, уравнения (3) и (4) могут давать верное представление о связывании одновалентного антитела с одновалентным или поливалентным антигеном в растворе или иа поверхности клеток, а также о связывании двухвалентного антитела с одновалентным антигеном в растворе. Реакции между двухвалентным антителом и двухвалентным или поливалентным антигеном в растворе или между двухвалентным антителом и одно- илн поливалентным антигеном клеточной поверхности ие бывают, как правило, одноэтапными, и аппроксимации возможны лишь при ряде ограничений. [c.29]

Иммунофлуоресцентная окраска кольцеобразно охватывает В-клетку рис. 2.12). Бивалентные антитела к иммуноглобулину, взаимодействуя с рецепторами, вызывают их перекрестное связывание с образованием иммуноглобулиновых пятен неправильной формы на клеточной поверхности. При повышении температуры большинство этих пятен активно перемещается по поверхности клетки и собирается на одном из ее полюсов в виде колпачка рис. 2.12 врезка). За этим процессом, названным кэппингом, следует погружение (интернализация) молекул иммуноглобулина внутрь клетки, где они подвергаются расщеплению. Кэппинг можно также наблюдать с другими поверхностными гликопротеинами и не только на В-клетках. [c.26]

Сложность иммунного ответа связана отчасти с тем, что другие клетки, в особенности Т-лимфоциты и макрофаги, изменяют реакцию В-клеток на антиген. В отсутствие активирующего действия антигена процесс деления большей части лимфоцитов заторможен. Т-клетки, а они представлены по меньшей мере тремя типами, могут либо стимулировать клеточное деление после связывания антигена, либо продолжать подавлять его. Видимо, торможение имеет место в том случае, когда иммунная система узнает о наличии в антигене детерминанты, присутствующей также на поверхностях собственных клеток организма. Совершенно очевидно, что различение своих и чужих антигенов чрезвычайно важно для иммунной системы. Аналогично тому как нервная система находится обычно в заторможенном состоянии и только иногда по ней осуществляется проведение потока импульсов, так и иммунная система в основном ингибирована и лишь в определенных случаях развивается клон плазматических клеток. Торможение иммунологической активности обусловлено отчасти синтезом антител против других антител, а именно против антител, функционирующих в качестве рецепторов на поверхности В-клеток. [c.366]

Система комплемента действует сама по себе и совместно с антителами, защищая организм позвоночного от инфекции. Ранние компоненты комплемента представляют собой проферменты крови, которые последовательно активируются в усилительном каскаде реакции ограниченного протеолиза. Этот процесс может протекать либо по классическому пути, который запускается связыванием антител IgG или IgM с антигеном, либо по альтернативному пути, который может запускаться непосредственно клеточными стенками внедрившихся микроорганизмов. Наиболее важный компонент комплемента - белок ИСЗ, активируемый в результате протеолитического расщепления и затем ковалентно связывающийся с близлежащими мембранами. Микроорганизмы, несущие на своей поверхности активированный СЗ (СЗЬ), легко поглощаются и уничтожаются фагоцитирующими клетками. Кроме того, СЗЬ помогает инициировать сборку поздних компонентов, которые образуют большой комплекс мембранной атаки, вызывающий лизис внедряющихся микроорганизмов. При активации комплемента освобождается также ряд небольших растворимых пептидных фрагментов, привлекающих и активирующих нейтрофилы и стимулирующих секрецию гистамина тучными клетками это приводит к воспалительной реакции в местах активации комплемента. Протеолитический каскад комплемента остается привязанным к мембранам внедрившихся микроорганизмов, активировавших этот каскад, главным образом благодаря тому, что некоторые из компонентов, включая СЗЬ, остаются активными менее 0,1 миллисекунды и поэтому не могут распространить атаку на близлежащие собственные клетки организма. [c.260]

Никаких доказательств того, что процесс образования пятен и шапочки имеет какое-то отношение к стимуляции синтеза антител, не существует. Тем не менее зтот процесс интенсивно изучается, поскольку, возможно, полученные при зтом сведения помогут понять причины высокой подвижности связанных иммуноглобулинов и других рецепторов в клеточных мембранах. Существует предположение, чтО рецепторные молекулы (например, гликофорин) проходят через мембрану и связываются с цитоскелетом , образованным микрофиламента-ми и микротрубочками [97]. Рецептор, находясь в одном из состояний, должен быть свободным, чтобы диффундировать в плоскости мембраны с образованием пятен , зтот процесс не требует затраты знергии. В другом состоянии рецептор должен быть связан с микрофиламента-ми и микротрубочками, движения которых могли бы обеспечивать процесс образования шапочки , требующий знергии. В некоторых случаях инициация синтеза антител в лимфоцитах может происходить при связывании лектинов. Поскольку структура конканавалина А и характер его связывания с углеводными группами (разд. В 3) уже известны, мы надеемся, что исследование взаимодействия лектинов с клеточными поверхностями приблизит нас к пониманию сложных процессов, лежа щих в основе ответа на антиген [98, 99]. [c.386]

Чтобы расшифровать правила узнавания и связывания, используемые в морфогенезе сложных тканей, идеальной была бы возможность инактивировать различные типы белков-рецепторов межклеточной адгезии и адгезии между клетками и матриксом индивидуально и в различных комбинациях. По мере того как возрастает число охарактеризованных моноклональных антител и белковых фрагментов, каждый из которых блокирует один-единственный тип молекулы межклеточной адгезии или рецептора матрикса, и по мере того как гены, кодирующие эти белки клеточной поверхности, становятся доступными для использования in vitro и в трансгенных животных, эта мечта биологов развития становится реальностью. [c.525]

ИФМ имеет ряд существенных преимуществ перед цитоток-сическими тестами, ELISA и РИА. Во-первых, с помощью ИФМ можно определять молекулы, присутствующие на клеточных поверхностях с плотностью до нескольких тысяч копий на клетку. Во многих случаях, когда методы ELISA на клеточных поверхностях, цитотоксические тесты или РИА оказываются недостаточно чувствительными, антигены плазматической мембраны удается определить с помощью ИФМ. Во-вторых, при исследовании ИФМ имеется возможность достаточно просто детектировать антитела практически всех классов иммуноглобулинов. Например, в настоящее время имеется несколько видов мышиных МА против каппа-легких цепей иммуноглобулинов крыс. Поскольку от 90 до 95% всех иммуноглобулинов крыс содержат каппа-легкую цепь, эти МА существенно улучшают возможности скрининга. В отличие от этого в цитотоксических тестах желательно, чтобы МА принадлежали к классу IgM, так как при этом фиксация комплемента обеспечивается с наибольшей эффективностью. В-третьих, при проведении ИФМ на проточном флуорометрическом клеточном сортере (ПФКС) для каждого определения связывания антител анализируется большое число клеток. Если для каждого образца имеется возможность просчитывать 5—10-10 клеток, то значительно уменьшается вероятность ошибок. [c.179]

Поскольку главная функция комплемента - атака на мембраньг микробных клеток, его активация в основном происходит на клеточной мембране микроорганизма, где она запускается либо антителом, связавшимся с микробной клеткой, либо полисахаридами ее оболочки. В обоих случаях активируются ранние комноненты комплемента. Существуют два набора ранних компонентов, принадлежащие двум разным путям активации комплемента С1, С2 и С4 относятся к классическому пути, который приводится в действие связыванием антитела фактор В и фактор В относятся к альтернативному пути, который запускается микробными полисахаридами. Ранние компоненты обоих путей действуют в конце концов на СЗ - наиболее важный компонент комплемента (рис. 18-40). Ранние компоненты и СЗ - проферменты, последовательно активируемые путем ограниченного протеолиза. Когда какой-либо из них специфическим образом расщепляется, он становится активной сериновой протеазой. способной расщеплять следующий профермент, и т. д. Многие из этих актов протеолиза приводят к отделению малого пептидного фрагмента и обнажению участка связывания с мембраной на большом фрагменте. Большой фрагмент прочно присоединяется к мембране клетки-мишени с помощью этого участка и способствует протеканию следующего этапа в цепи реакций. Таким образом, процесс активации комплемента ограничен главным образом той клеточной поверхностью, где он начался. Малый фрагмент нередко действует независимо - как способная к диффузии сигнальная молекула, стимулирующая воспалительную реакцию (разд. 18.5.4). [c.254]

Связывание тимоцитов мыши с анти-Thy-1,2 Мерсалил-три-сакрилом. Элюирование дитиотреитолом. Первые результаты были получены с иммобилизованными антителами, узнающими природные антигены клеточной поверхности [38], [c.258]

В описываемых опытах в качестве иммунного комплекса использовали эритроциты барана, обработанные субагглютинирующей дозой IgG-антител кролика против эритроцитов барана. Полученные комплексы дополнительно инкубировали с высокоочищенным lq человека, после чего избыток этого компонента комплемента удаляли. Обработанные с помощью lq иммунные комплексы в отличие от необработанных не фиксировались на перетонеальных макрофагах мыши и на клетках из селезенки мыши. Степень торможения связывания иммунного комплекса клетками прямо зависела от дозы lq. Более того, уже фиксированные на поверхности клеток сенсибилизированные антителами эритроциты отделялись от клеточной поверхности в присутствии lq. Все это может означать, что lq, присоединяясь к антителам в составе иммунного комплекса, не только препятствует связыванию комплекса с Рс -рецепторами клеток (независимо от их происхождения), но и вытесняет присоединенный комплекс. Последнее возможно, конечно, потому, что фиксация на F -рецепторах иммунных комплексов носит обратимый характер. [c.152]

Последняя проблема, которую необходимо решить, — это проблема скрининга. Важно иметь надежную методику для простого и точного скрининга культуральных жидкостей отдельных клонов на содержание антител нужной специфичности. Избранный метод (например, РИА, ELISA и т. д.) должен быть чувствительным и должен давать по возможности количественную информацию. Анализ, основанный на связывании флуоресцент-номеченных антител (иммунофлуоресцентный метод, ИФМ), требует наличия 0,2—1 мкг МА в 25 мкл культуральной жидкости. При этом с его помощью можно определять большинство типов детерминант клеточных поверхностей. Этот метод дает также количественную информацию о среднем числе молекул, экспрессируемых на одной клетке, что является немаловажным преимуществом в случае низкоаффинных МА. Поскольку [c.178]

При анализе экспериментальных данных предполагается, что связывание двухвалентных моиоклоизльных антител с антигеном клеточной поверхности — это одноэтапная бимолекулярная реакция [c.13]

Молекула F eRI образована 4 полипептидными цепями (см. рис. 6.20). Входящая в ее состав гли-козилированная а-цепь (45 кДа> экспонирована над поверхностью клетки. Антитела к а-цепи способны блокировать связывание IgE с этим рецептором и самостоятельно индуцировать высвобождение гистамина из лейкозных базофилов крысы. Углеводные компоненты а-цепи, вероятно, защищают ее (как и в случае многих других белков клеточной поверхности) от действия сывороточных протеаз, но не имеют значения для связывания IgE и обусловленного IgE высвобождения гистамина. [c.109]

Baxi С антигеном за специфические клеточные рецепторы, не явл5 ющиеся антителами. Например, моноклональные антиидио-типи ские антитела против антител к гликопротеину реовиру са предотвращают связывание реовируса с его специфическими рецепторами, находящимися на клеточной поверхности по-видимому, это связано с тем, что антиидиотипические антитела могут действовать как лиганды для рецепторов [13]. [c.19]

Система комплемента действует сама по себе и в кооперации с антителами защищая организм позвоночного от инфекции. Она состоит главным образом из неактивных белков крови, которые последовательно активируются в усилительном каскаде реакций. Этот процесс может протекать либо по классическому пути, который запускается связыванием антител IgG или 1дМ с anmit геном, либо по альтернативному пути, который может запускатьси непосредственно клеточными стенками внедрившихся микроорганизмов. Наиболее важный компонент комплемента-белок СЗ, который активируется в результате протеолитического расщепления и затем ковалентно связывается с близлежащими мембранами микроорганизмы, несущие на своей поверхности активированный СЗ (СЗЬ), легко поглощаются и разрушаются профес- [c.50]

Среди множества проблем иммунологии, одну из них, если иметь в виду прежде всего чисто познавательный аспект этой области биологических знаний, следует отнести к самой фундаментальной, поскольку во многом она определяет возможность решения остальных. Эта проблема связана с изучением на атомно-молекулярном уровне механизмов узнавания и ответных реакций иммунной системы на появление в организме инфекционных антигенов - чужеродных белков, вирусов, бактерий, патогенных веществ. Важный шаг в познании принципов функционирования иммунной системы был сделан в 1959 г. Ф. Бер-нетом, разработавшим так называемую теорию клональной селекции, которая и по сей день пользуется всеобщим признанием [265]. Первоначально теория имела сугубо гипотетический характер. Однако заложенные в ней идеи оказались плодотворными и она вскоре смогла стать для экспериментальных исследований не только системой основополагающих научных принципов, но и конкретной программой поиска. В настоящее время эта программа выполнена и сегодня теория клональной селекции представляет собой скорее констатацию надежно установленных фактов, чем концептуальную основу дальнейшего развития иммунологии [266]. Специфичность антигенной реакции лимфоцитов, согласно теории Бернета, обусловлена наличием на поверхности Т- и В-клеток рецепторных белков, избирательно взаимодействующих с определенными антигенами. Связывание с ними рецепторов активирует клетку и вызывает ее эффективное размножение. Таким образом стимулируется пролиферация лимфоцитов, содержащих на своих поверхностях именно те рецепторы, которые, с одной стороны, комплементарны чужеродному антигену, а с другой - могут адекватно сигнализировать клетке о необходимости антиген-специфцч-ного ответа. По теории клональной селекции иммунную систему образуют миллионы различных клеточных семейств или клонов, каждый из которых состоит из Т- или В-лимфоцитов, имеющих общих предшественников. Так как во всех случаях клетка-предшественница детерминирована к синтезу определенного антиген-специфичного белка рецептора, то все клетки одного клона имеют одинаковую антигенную специфичность и, следовательно, могут ответить на сигнал рецептора только одним, присущим клеткам лишь данного клона, способом. Антигенами, как правило, являются белки и полисахариды. На поверхности этих молекул имеются участки, называемые антигенными детерминантами или эпитопами, которые предрасположены к взаимодействиям с антигенсвязывающим участком антитела В-лимфоцита или 3 67 [c.67]

Процесс созревания В-клеточной аффинности протекает в центрах размножения (рис. .25). Они образуются в селезенке или лимфатических узлах спустя несколько суток после антигенной стимуляции. В-лимфоциты, активированные Т-клетками посредством связывания D40 с его лигандом, мигрируют в первичные фолликулы, где имеется густая сеть фолликулярных дендритных клеток. В этом окружении происходит быстрое деление В-клеток, сопровождающееся соматическим мутированием lg-генов. В-клетки с высокоаффинными рецепторами проходят отбор по выживаемости, основанный на взаимодействии их мембраносвязанных поверхностных антител и комплекса В-клетка-корецептор с антигеном и комплементом на поверхности фолликулярных дендритных клеток. При прохождении через центр размножения В-лимфоциты экспрессируют ген клеточной выживаемости , bd-2. Клетки с высокоаффинными IgG за счет связывания продукта bd-2 избегают апоптоза клетки же с низкоаффинными рецепторами таким свойством не обладают и погибают в результате апоптоза. [c.214]

Определению аффинности антител, специфичных к одной и той же детерминанте, сильно препятствует их гетерогенность (см., например, Fazekas de St, Groth, 1979). Изучая гетерогенную популяцию антител, можно определить лишь их среднюю аффинность. Эта величина для разных аитисывороток против одного и того же антигена обычно варьирует, Однако все эти трудности резко уменьшаются, если есть возможность получить к данному специфическому антигену моиоклоиальиые антитела. Определение точных характеристик связывания представляет особый интерес тогда, когда антитело специфично по отношению к какому-то клеточному (точнее, поверхностному) антигену, поскольку в этом случае реакция может иметь важное функциональное значение. Кроме того, эги данные могут быть полезны для понимания химических реакций, происходящих на поверхности клеток. [c.12]

Несравненно больше антигенных детерминантов, чем на бел ке, находится или может быть закреплено на поверхности целой клетки. Взаимодействие антител с этими поверхностными детерминантами, опять-таки,в силу бивалентности антител, приводит к связыванию, или агглютинации клеток. Образование даже небольших клеточных агрегатов приводит к их быстрому и хорошо заметному осаждению из суспензии. Это обстоятельство позволило разработать столь же быстрый, как кольцевой тест, но на три порядка более чувствительный метод обнаружения антител в иммунной антисыворотке. [c.121]

Респекрин построен из адреса , эффектора и экранирующего антитела. Последнее закрывает те участки эффектора, которые определяют его тропность к клеткам. Разэкранирование должно протекать только на поверхности клеток, с которыми связывается адресный фрагмент. Здесь, на поверхности нужных клеток, происходит конкуренция за связывание с эффектором между клеточны- [c.134]

Наружный слой клеточной стенки большинства грамотрицательных бактерий содержит липопо-лисахарид (Л ПС) с длинными 0-специфическими боковыми полисахаридными цепями, выступающими из мембраны наружу. Они эффективно активируют комплемент, но локализуют ковалентное связывание СЗ и фиксацию ЛМК на таком удалении от цитоплазматической мембраны бактериальной клетки, при котором опсонизация и лизис невозможны. В подобных случаях в качестве фактора приобретенного иммунитета могут функционировать только бактерицидные антитела. Они активируют комплемент в непосредственной близости к тем участкам бактериальной поверхности, где его опсонизирующий и литический эффекты могут реализоваться. [c.78]

Блокирующий эффект антител присутствуя в высоких дозах, растворимый 1д блокирует взаимодействие между антигенной детерминантой (эпитопом) и мембраносвязанным иммуноглобулином на поверхности В-клеток. В результате В-клетки теряют способность распознавать антиген (Аг). Блокада рецепторов препятствует также примированию В-клеток. Такой эффект оказывают только антитела, связывающиеся с тем же самым эпитопом, с которым взаимодействует В-клеточный рецептор. Перекрестное связывание рецепторов присутствуя в низких дозах, растворимые антитела не препятствуют связыванию антигена и с Рс-рецепторами В-клеток, и с их антигенными рецепторами. Рецептор РсуЯИЬ взаимодействуете тирозин-фосфатазой (8НР-1), которая ингибирует клеточную активацию, вызываемую связанными с антигенным рецептором тирозинкиназами. В результате примирование В-клеток происходит, но синтез антител подавлен. Таким образом могут действовать антитела к различным эпитопам антигена. [c.241]

Клеточные популяции можно разделять на подложках, сенсибилизированных антителами. Нанесенные на подложку антитела нековалентно связываются с поверхностью пластика (как при иммуносорбентном анализе), после чего на нее наносят суспензию клеток. Антиген-положительные клетки (Аг+) связываются с антителами, тогда как антиген-отрицательные (Аг ) можно удалить осторожным смыванием. Связанные клетки иногда удается отделить от подложки, изменив условия культивирования или обработав клетки ферментами. Часто связывание клеток с иммобилизованным антигеном вызывает в них те или иные изменения например, при связывании антигена с пластиком могут возникать перекрестные связи между его молекулами, в результате чего он активирует клетки. Данный метод наиболее подходит для удаления субпопуляций, а не для их выделения из общей популяции лимфоцитов. В качестве примеров применения данного метода можно назвать разделение популяций Тх- и Тц-клеток при помощи антител анти-С04 или ан-ти-С08 и отделение Т-клеток от В-лимфоцитов с использованием антител анти-1д (которые связываются с поверхностными антителами В-клеток). При обратной постановке (сенсибилизация подложки антигеном) связывающие антиген клетки можно отделять от несвязывающих, [c.541]

Смотреть страницы где упоминается термин Антитела связывание с клеточными поверхностям: [c.95] [c.215] [c.72] [c.253] [c.165] [c.217] [c.13] [c.180] [c.183] [c.518] [c.415] [c.7] [c.420] [c.418] [c.205] [c.309] [c.296] [c.194] [c.21] [c.181] [c.433] [c.420]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология