Кроличья сыворотка

Бульонную культуру наносят петлей на чистое предметное стекло и оставляют для высыхания на воздухе без подогревания. (Если в таком же мазке, окрашенном кристаллическим фиолетовым, присутствует более чем 15—25 клеток при просмотре в микроскоп с иммерсией, культуру следует разбавить, так как при слишком высокой концентрации клеток можно получить неточный результат.) К антисыворотке добавляют воду и наносят полученный раствор петлей на покровное стекло. Одну петлю 1 %-ного водного раствора метиленового синего смешивают с антисывороткой и кладут покровное стекло каплей вниз на предметное стекло с высушенным мазком. Смотрят препарат в микроскоп с масляной иммерсией. Положительная реакция капсулы вокруг окрашенных в синий цвет клеток становятся четко очерченными. Всегда следует проводить сравнение с контрольным препаратом, приготовленным с нормальной кроличьей сывороткой вместо антисыворотки. Если резуль- [c.66]

Комплемент (С ). Источником комплемента обычно служит кроличья сыворотка, которую либо покупают, либо готовят самостоятельно. [c.195]

Например, если немеченая антисыворотка была получена путем иммунизации кроликов, то на втором этапе используют меченую антивидовую кроличью сыворотку, полученную путем иммунизации кроличьими гамма-глобулинами ослов или каких-либо других животных. При этом антиглобулиновые меченые АТ покрывают вторым слоем исследуемый АГ (первый слой — за счет немеченых АТ, которые, в свою очередь, служат АГ для анти-глобулиновой сыворотки). В результате этого АГ становится видимым в люминесцентном микроскопе (как и в прямом варианте РИФ). [c.75]

Из табл. 32 видно, что результаты, полученные яри работе с кроличьей сывороткой, существенно [c.138]

Иммунологические исследования тоже свидетельствуют о филогенетических связях между организмами. Если белки, содержащиеся в сыворотке крови, ввести в кровь животных, у которых этих глобинов нет, то они действуют как антигены, т. е. побуждают организм вырабатывать соответствующие антитела в результате возникает реакция антиген-антитело. Эта иммунная реакция обусловлена способностью жи-вотного-реципиента распознавать присутствие в сыворотке чужеродных белков. Человеческая сыворотка, введенная кроликам, сенсибилизирует их и вызывает у них образование антител к сывороточным белкам человека. Если спустя некоторое время к пробе сенсибилизированной сыворотки кролика добавить сыворотку человека, то произойдет образование комплексов антиген-антитело, выпадающих в осадок (преципитат), количество которого можно измерить. Если добавлять к пробам кроличьей сыворотки, содержащей антитела против сыворотки человека, сыворотки различных животных, то образуются разные количества преципитата. Предполагая, что количество преципитата находится в прямой зависимости от количеств чужеродного белка , этот метод можно использовать для оценки степени родства между разными группами животных (табл. 26.8). [c.304]

Вместо СПК применяют и другие сыворотки сыворотку новорожденных телят, сыворотку коров, лошадиную сыворотку, кроличью сыворотку. Каждую из этих сывороток необходимо проверить на способность поддерживать рост клеток при низкой и обычной плотностях посева и употреблять в зависимости от ее рост-поддерживающих свойств. В качестве одной нз мер экономии СПК рекомендуют использовать ее в сочетании с другой, менее дорогой сывороткой. [c.99]

Сыворотка кролика является наиболее подходящим источником комплемента для этой реакции, благодаря присутствию в ней природных антител к клеткам человека. Взаимодействие этих антител с другими антигенами клеточной поверхности усиливает комплемент-зависимое цитотоксическое действие комплекса антител к ЛАЧ с антигенами. Титры и специфичность этих природных антител могут варьировать даже среди смешанных препаратов сыворотки кролика. Возникающие проблемы можно преодолеть, изменяя продолжительность инкубации, используя различные источники и разведения комплемента, разводя кроличью сыворотку сывороткой человека, или же путем абсорбции кроличьей сыворотки культивируемыми клетками [27]. Может потребоваться раздельный анализ каждой линии клеток, поскольку конечный результат зависит от множественных взаимодействий между присутствующими антителами и спектром антигенов на поверхности каждого типа клеток. [c.144]

Инактивируют комплемент кроличьей сыворотки к ЭБ (1 мл), содержащий большое количество IgM, нагреванием в водяной бане при 56 °С в течение 30 мин. [c.248]

Среда Терских состоит из фосфатной смеси Зеренсена н кроличьей сыворотки. [c.384]

ФБЭ, нагруженные иммуноглобулином, не должны агглютинироваться разбавляющей жидкостью, которая содержит 1 % нормальной кроличьей сыворотки. [c.216]

A. В средней лунке — культуральная жидкость в крайних лунках — нормальная кроличья сыворотка. Б. В центральной лунке — культуральная жидкость в верхней лунке — антисыворотка к Ь6. [c.352]

В каждый образец добавляют по 200 мкл антител-детекто ров, меченных и разведенных до 50 000 имп/мин на 200 мкл Для разведения используют PBS с 2% твин 20, 20% кроличьей сыворотки и 10% заведомо отрицательной человеческой сыворотки (обе сыворотки инактивируют прогреванием при 37 С в течение 3—4 часов). [c.329]

В полистироловую пробирку вносят по 100 мк раствора кроличьих антимышиных антител и Na-фосфатного буфера 0,4 М. К смеси добавляют 1 мКи 1—Nal. При непрерывном перемешивании добавляют 50 мкл раствора хлорамина Т. Инкубируют в течение 1 мин. Реакцию останавливают добавлением 200 мкл тиосульфата Na. Дауэкс суспендируют в 0,15 М Na l и помещают в 1—2 мл колонку. Через колонку пропускают 1 мл кроличьей сыворотки для предотвращения неспецифического связывания антител. Реакционную смесь пропускают через колонку с Дауэксом для удаления несвязавшегося 1. Промывают колонку 1 мл 0,15 М Na l. Раствор меченых антител (1 мл) смешивают с 1 мл 3%-ного раствора БСА в фосфатном буфере и хранят при 4°С. [c.324]

Бактериологическое исследование. Кровь, мочу, спинномозговую жидкость асептически засевают в количестве 5 — 20 капель в 3—5 пробирок с водно-сывороточной средой, средой Флетчера, Картофа или другой жидкой (полужидкой) специальной средой. Кроличья сыворотка или другие субстраты, добавляемые в среду, служат источником жирных кислот, необходимых для роста лептоспир. Для подавления роста сопутствующей микрофлоры, что особенно важно при культивировании лептоспир, в состав сред вводят неомицин или 5-фторурацил. [c.231]

Из исследуемого материала в асептических условиях готовят 10%-ю суспензию в ИХН, растворе Хенкса (pH 7,4 —7,6) или в питательных средах при заражении клеточных культур. Добавляют 0,75 — 2,0 % бычьего альбумина или 10 — 25 % нормальной кроличьей сыворотки и центрифугируют при 4 °С в течение 20 мин при 1500 — 2000 об/мин. [c.291]

Итак, мы располагаем прекрасным примером взаимодействия между генами, лежащими в хромосомах, и цитоплазматическими частицами, которые скорее нужно рассматривать как особый вид вируса. В том же самом экспериментальном материале Соннеборн нашел также и другие очень интересные примеры взаимодействия между генами и цитоплазмой. Речь идет об антигенах, содержащихся в ресничках парамеции. Если парамеций определенного клона (который размножается вегетативным делением) ввести в кровь кролика, то у кролика в крови образуются антитела. Если после этого кроличью сыворотку добавить в культуру парамеций того клона, который был использован для инъекции кролику, то реснички парамеций будут парализованы. Та же сыворотка, использованная на другом клоне, дает отрицательную реакцию. В своем материале Соннеборн нашел 8 различных групп парамеций, различающихся по серологическим реакциям. Эти группы (которые обозначаются буквами А, В, С... и т. д.) в известном смысле соответствуют группам крови у высших животных. [c.366]

С целью выяснения влияния природы носителя на развитие толерантности к формальдегиду нами были проведены опыты с использованием в качестве толерогена его конъюгатов с гетерологичным и аутологичным носителем. Учитывая высокую реактогенность формальдегида к белкам, конъюгаты готовили ех tempore добавлением гаптена к разведенному сухому комплементу морских свинок (гомологичный носитель) и к свежей кроличьей сыворотке (гетерологичный носитель) в соотношении 1 100, что исключало присутствие гаптена в несвязанном виде. Конъюгаты вводили морским свинкам однократно внутрисердечно в количествах, соответствующих 1 и 0,5 мг формальдегида сенсибилизацию животных после 14 сут отдыха осуп1ествляли 20 эпикутанными аппликациями 4% водного раствора формальдегида. Состояние специфичной чувствительности подопытных животных оценивали по интенсивности кожного теста на формальдегид [c.73]

Другой пример практического использования лектинов продемонстрировали Левин и сотр. [22]. Используя анти-К-лектин Vi ia graminea, они показали, что лошадиные эритроциты содержат N-антиген — факт, который нельзя было выявить при помощи адсорбированной кроличьей сыворотки, так как в адсорбированной сыворотке остаются видоспецифические агглютинины. Доказательство наличия N-анти-гена в эритроцитах лошади побудило Левина и его сотрудников предпринять поиски истинного анти-М-агглютинина в сыворотке лошади. Обнаружение его означало бы, что лошадь может быть хорошим продуцентом иммунной сыворотки анти-М. Опыт подтвердил это предположение, и таким образом был открыт новый богатый источник получения иммунной сыворотки анти-М. [c.88]

Электрофорез окажется, повидимому, наиболее полезным в области биохимии в качестве метода очистки белков, антител, ферментов, гормонов, вирусов и т. п. При изучении антител, концентрация которых допускает их наблюдение на диаграммах, можно установить расположение и концентрацию антител путем сравнения изображений, полученных до и после осаждения антител специфическими антигенами. Этот случай изучали ва гиперим-мунной лошадиной и кроличьей сыворотках [55—57]. Однако в большинстве случаев концентрация антител лежит ниже предела чувствительности прибора. В таких случаях необходимо прибегать к исследованию выделенных проб (см. стр. 360) при помощи методов дополнительной фиксации, агглютинации, нейтрализации и т. п. [58—60]. [c.377]

Бактер алогическое исследование. Культуры лептоспир выделяют н,1 водно-сывороточной или фосфатно-сывороточной среде с добавлением инактивированной кроличьей сыворотки. Исследуемый материал засевают у постели больного в 3—5 пробирок, заливают стерильным вазелиновым маслом (для ограничения доступа кислорода воздуха) и инкубируют при температуре 28°С не менее 2 мес. Вследствие того что при росте лептоспир среда остается прозрачной, через каждые 5—6 дней из среды готовят препараты для микроскопии в темном поле. Серогруппу выделенной культуры устанавливают в реакции агглютинации с набором диагностических сывороток. [c.212]

Иммунофлуоресцентное окрашивание непрямой метод. Включает два этапа. Препарат фиксируют нагреванием, наносят каплю нелюминесцирующей гомологичной иммунной сыворотки определенного разведения и оставляют на 20—30 мин во влажной камере. Затем осторожно промывают в течение 5 мин. На втором этапе на препарат наносят каплю меченого антикроличьего 7-глобулина, разведенного до так называемого окрашивающего титра. Время инкубации на втором этапе и окрашивающий титр определяют эспериментально. После этого препарат осторожно промывают и микроскопируют при увеличении 90X. Непрямой метод обладает принципиальным преимуществом, так как, имея лишь одну люминесцирующую сыворотку, можно отыскать большое число разных антигенов, используя стандартные кроличьи сыворотки. При непрямом методе, однако, крайне важен контроль, включающий инкубирование препарата на втором этапе непосредственно с меченой сывороткой обработку препарата гетеро-логичной меченой сывороткой обработку препарата на первом этапе нормальной или гетерологичной сывороткой, не содержащей антител к исследуемому антигену. [c.113]

Могут быть успешно получены антисыворотки ко многим грамположительным и грамотрицательным бактериям. Поскольку преимущественно образуются серотипспецифические антитела (т. е. к углеводным структурам липополисахаридов грамотрицательных микроорганизмов, характерных для данного штамма), кроличьи сыворотки используют для серодиагностики. Перекрестная абсорбция клетками других типов и видов не представляет труда и позволяет удалить антитела к общим эпотипам белков наружной мембраны. [c.83]

Прокаливают добела в пламени горелки петлю для приготовления разведения и затем охлаждают ее, погружая в дистиллированную воду. Промакивают петлю фильтровальной бумагой (не вытирать ) и очень -осторожно прикасаются к мениску нормальной кроличьей сыворотки (не погружать петлю в раствор ). Вносят петлю в лунку 1 ря да А, вращают несколько раз, а зате м переносят в вертикальном положении в лунку 2 и т. д. вплоть до лунки 12. В конце промывают петлю дистиллированной водой, и и про каливают. Ряд А — это контроль (нормальная кроличья сыворотка) (ом. рис. 7.2). [c.244]

Техника постановки реакции преципитации. В две преципитационные пробирки диаметром 2 мм наливают примерно по 0,1 мл групповой сыворотки и нормальной кроличьей сыворотки (для контроля). Затем в обе пробирки осторожно, чтобы не произошло смешивания жидкостей, наслаивают по стенке примерно такое же количества исследуемого солянокислого экстракта. Для этого удобнее всего пользоваться пастеровской пипеткой с длинным и тонка оттянутым капилляром. При положительном результате реакции преципитации через 10—15 мин в опытной пробирке на границе экстракта и сыворотки появляется тонкое, четко выраженное кольцо молочно-белого цвета, отсутствующее в контроле. Практически важно дифференцировать стрептококки группы А, патогенные для человека, от остальных серологических групп. Поэтому в реакции преципитации чаще всега ограничиваются использованием только одной групповой сыворотки А. При изучении культур, выделенных из крови больных септическим эндокардитом, имеет значение выявление устойчивых к пенициллину культур стрептококка, принадле-. жащих к группе В. При изучении микробного пейзажа носоглотки выделяемые штаммы стрептококка проверяют параллельно с антистрептококковыми групповыми сыворотками А, С, О, Н, соответствующими наиболее распространенным группам стрептококка, обитающим на слизистых оболочках верхних дыхательных путей. [c.178]

Более чувствительным методом диагностики туляремии служит реакция пассивной гемагглютинации, дающая положительный результат с конца 1-й недели заболевания. Реакцию ставят объемным способом в полистероловых пластинах с лунками. Перед постановкой реакции исследуемые сыворотки инактивируют прогреванием при 56 °С в течение 30 мин и истощают бараньими эритроцитами (см. с. 103). Из инактивированной сыворотки готовят ряд последовательных двукратных разведений (от 1 10 до 1 2560) на изотоническом растворе хлорида натрия с 1% нормальной кроличьей сыворотки. Приготовленные таким образом разведения разливают в лунки пластин по 0,5 мл. В качестве антигена используют туляремийный зритроцитарный диагностикум, представляющий собой взвесь консервированных формалином бараньих эритроцитов, сенсибилизированных ту-ляремийным антигеном. К каждому разведению сыворотки прибавляют по 1 капле 2,5% взвеси диагностикума. [c.266]

Иммунопреципитацию в присутствии кроличьей антисыворотки проводят следующим образом. Раствор с меченым материалом выдерживают 30 мин во льду с нормальной кроличьей сывороткой (10% по объему), после чего добавляют к нему равный объем белка А — сефарозы (Pharma ia). Смесь перемешивают переворачиванием пробирок в течение получаса при 4°С и затем центрифугируют ). К супернатанту добавляют [c.491]

Источник комплемента нормальная кроличья сыворотка, собранная приблизительно от 100 кроликов, хранится при —80 С мелкими порциями, или лиофилизированная, сохраняемая при —20°С. Лиофилизироваиный комплемент регидратируют непосредственно перед употреблением. [c.232]

Высказано предположение, что особая эффективность кроличьего комплемента в реакции лимфоцитолиза обусловлена присутствием в кроличьей сыворотке нормальных гетерофильных антител к лимфоцитам человека эти антитела могли бы действовать синергично с антителами анти-HLA типирующих сывороток (Ferrone et al, 1974). [c.237]

Рис. 1. Взвесь отвечающих клеток мышей СВА, освобожденная от В-лимфоцитов, была активирована в СКЛ стимулирующими клетками мышей SJL. Т-бласты обрабатывали сывороткой анти-Н-2 (1/20) и подвергали двойному окрашиванию, как описано в тексте, — сначала кроличьей сывороткой анти-Т (выявляемой с помощью бараньей антисыворотки к кроличьему Ig, меченной ТРИТЦ), а затем бараньей антисывороткой к мышиному Ig, меченной ФИТЦ. Одни и те же клетки наблюдали при освещении, возбуждающем флуоресценцию вначале родамина, а затем флуоресцеина.

Первичный ответ in vitro удалось получить в органных культурах фрагментов лимфатических узлов и селезенки кроликов, которые инкубировали в течение 2 часов с гемо-цианином (M Arthur а. oth., 1969). После инкубации антиген отмывали и фрагменты лимфоидных органов помешкали на диск из 0,5% агара, окруженный питательной средой, в которую входили среда Игла, витамины, глютамин, 10% кроличьей сыворотки и С -глицин (1 мккюри/мл). [c.122]

Антивирусную сыворотку истощают обработанными ацетоном клетками BS- -1 при 4°С и используют в подобранном оптимальном разведении (в пределах 1 10—1 50). Кроличья сыворотка против глобулинов нескольких видов животных, конъюгированная с изотиоцианатом флуоресцеина, имеется в продаже. Конъюгат истощают обработанным ацетоном гомогенатом печени мыши или клетками BS- -1 при 4°С. [c.140]

Рис. 6.11. Титрование антисыворотки к гентамицину с помощью связанного -KKF сисомицина — аналога гентамицина. К 2,0 мл 50 мМ буфера Bi ine, содержащего-50 иг -галактозидазы, прибавляли различные количества разбавленной в 10 раа. кроличьей антисыворотки против гентамицина или нормальной кроличьей сыворотки. После добавления 50 мкл- -ККГ — сисомицина измеряли скорость реакции.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология