Мечен не люминесцентное антител

Реакции с использованием меченых антител или антигенов. Реакция иммунофлюоресценции — РИФ (метод Кунса) основана на том, что антигены тканей или микроорганизмы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа (прямой метод). Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Различают фи основные разновидности метода прямой, непрямой, непрямой с комплементом. [c.180]

В настоящее время люминесцентная микроскопия находит все более широкое применение в различных областях научной и практической работы в вирусологии, микробиологии, гистологии (нормальной и иатологи-ческой), в физиологии, ботанике, онкологии, радиобиологии, а также нри проведении лабораторно-клинических анализов, в санитарных и судебно-медицинских исследованиях. Среди новых направлений большой интерес представляет предложенный в свое время Кунсом с сотрудниками [4] исключительно чувствительный люминесцентно-иммунохимический метод меченых антител. [c.310]

На новую высшую ступень люминесцентная цитохимия была поднята Кунсом с сотрудниками [4], разработавшими метод люминесцентно-меченых антител. В основном он заключается в следующем. В результате иммунизации животного соответствующим антигеном получают специфическую сыворотку белковые их фракции, в которых преимущественно сосредоточены специфические антитела, обрабатывают флуорохромом и получают комплекс флуорохром — антитело, используемый для обнаружения соответствующего антигена. Наличие и локализация последнего в микроскопическом препарате выявляется в результате реакции антиген — антитело. Продукт этой реакции ярко люминесцирует и с помощью люминесцентного микроскопа может быть открыт даже в отдельных участках клеток [18, 14]. [c.317]

Люминесцентно-иммунохимические методы дают возможность определять локализацию в клетках и изучать динамику образования антител. Так как получение люминесцентно-меченых антигенов трудно осуществимо (антигены принадлежат к разнообразным классам химических веществ), были предложены непрямые методы выявления антител [4, 15, 16]. Одним из таких методов является следующий. Препарат, содержащий искомое антитело, обрабатывается соответствующим немеченым антигеном после того как произойдет образование комплекса антитело — антиген, этот же препарат обрабатывается люминесцирующим антителом, специфичным по отношению к данному антигену. Образующийся при этом тройной комплекс легко выявляется благодаря интенсивной люминесценции. [c.317]

Реакции с люминесцентно-меченым белком, в особенности специфическими белками — антителами, отличаясь высокой специфичностью, позволяют проводить тончайшие цито-иммунохимические исследования с точной локализацией биологически важных веществ и процессов. [c.317]

Для экспресс-диагностики применяют прямую РИФ. Для этого мазок из материала фиксируют 10 мин в ацетоне, затем обрабатывают мечеными ФИТЦ антителами к Т. pallidum (используют заведомо положительную сыворотку больных сифилисом людей или зараженных кроликов, адсорбированные для удаления перекрестно-реагирующих антител взвесью трепонем штамма Рейтера, или моноклональные антитела к АГ Т. pallidum). Так же ставят РИФ с биопсийным или аутопсийным материалом, но предварительно его фиксируют 24 ч в 10%-м нейтральном формалине, заключают в парафин и готовят гистологические срезы. При люминесцентной микроскопии в материале отмечают специфическое свечение типичных по морфологии трепонем. [c.227]

Для определения концентрации веществ в большинстве иммунохимических методов к анализируемому раствору, содержащему определяемое соединение и его меченый аналог, добавляют реагент в количестве, намного меньшем необходимого по уравнению (7.12). Как немеченые, так и меченые соединения взаимодействуют с реагентом практически одана-ково, поэтому отношение их концентраций будет одним и тем же в растворе и в связанном состоянии. При этом возможность применения метода во многом определяется доступностью меченого антигена и соответствующих антител. Для введения метки используют различные реагенты радионуклиды, ферменты, красящие вещества, флуоресцентные и хеми-люминесцентные зонды, ионы металлов. До последнего времени в качестве маркеров антител применяли радиоактивные изотопы этот метод назьшается радиоиммунохимическим анализом (РИА). При этом степень [c.298]

Метка при этом должна содержаться в том компоненте, который образует комплекс с анализируемым веществом. Например, для анализа определенного антигена нужно располагать антителом, специфичным к этому антигену, ввести в него метку (радиоактивную, ферментную, люминесцентную и т.д.) и количественно перевести анализируемое вещество в комплекс. Для того чтобы достичь максимального уровня этого перехода, меченое антитело нужно брать в избытке. Но тогда нужно предусмотреть процедуру отдейения комплекса от избытка меченого антатела. Для этих целей используют иммобилизацию анализируемого компонента на твердой поверхности. В этом случае комплекс антиген — антитело остается на поверхности, тогда как избыток меченого антитела, не вошедший в состав комплекса, легко удаляется. [c.258]

Для научно-исследовательских и диагностических целей в вирусологии особый интерес представляют описанные нами выше методы с применением люминесцентно-меченых антител. Эти методы 120] уже позволили разрешить ряд сложных вопросов, касающихся внутриклеточной локализации и динамики развития вирусных скоплений в клетках. Они привели к разработке методов практического раснознавапия вирусных инфекций, в частности вируса гриппа [21], и исследования вируса полиомиелита [22]. [c.318]

В практической медицине исиользуют люминесцентно-микроскони-ческую диагностику бактериальных и вирусных инфекций. В этой области особенно ценны методы, основанные на применении люминесцентно-меченых антител. Эти же методы крайне полезны для изучения различного рода патологических состояний, связанных с образованием в организме вредных антигенов и токсинов [54, 55]. [c.320]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология