Нерадиоактивные методы детекции

Нерадиоактивные методы детекции В большинстве лабораторий для гибридизации используют зонды, меченные каким-либо радиоактивным изотопом, чаще всего Р. Такие зонды обладают высокой удельной радиоактивностью и обеспечивают хорошее отношение сигнал/шум. Радиоактивно меченный зонд наносят на фильтр с фиксированной на нем ДНК-мишенью, проводят гибридизацию, отмывают несвязавшуюся ДНК-зонд и детектируют метку с помощью радиоавтографии. [c.190]

Опишите три способа нерадиоактивного ме-чения ДНК. Каковы преимушества нерадиоактивных методов детекции [c.203]

Нерадиоактивные системы детекции обладают и другими преимуществами биотинилиро-ванная ДНК остается стабильной при комнатной температуре как минимум год методы регистрации хемилюминесценции обладают такой же чувствительностью, как и методы регистрации радиоактивного сигнала детекция испускаемого света при помощи рентгеновской пленки или люминометра, как и регистрация изменения цвета, занимают несколько часов. По-видимому, хемилюминесцентные системы регистрации сигнала, все же более чувствительные, чем хромогенные, вскоре вытеснят все остальные, использующиеся при ДНК-диагности-ке. Если при этом применяется ПЦР, то амплифицируемый продукт можно пометить флуоресцентным красителем, присоединяя его [c.190]

ДНК-диагностика основывается на обнаружении известных нуклеотидных последовательностей для этого синтезируют специфичес1сие праймеры и амплифицируют последователь-ность-мишень. Это позволяет использовать нерадиоактивные системы детекции (например, хемилюминесцентный метод) или регистрировать ПЦР-продукты методом гель-электрофореза. Кроме того, ПЦР-продукты можно пометить флуоресцентным красителем, присоединив его к 5 -концу праймера. [c.202]

Отметим, что для детекции антител разработаны также и нерадиоактивные (хромогенные) методы. Они основаны на свойствах пе-роксидазы из хрена и щелочной фосфатазы образовывать цветные нерастворимые продукты в процессе ферментативной реакции. Эти ферменты ковалентно связывают с вторичными антителами, которые реагируют со специфическими сайтами на первичных антителах После обработю фильтров такими комплексами в местах локализации искомых белков образуются суперкомплексы антигек — антите-ло антитело — фермент. Их положение определяют смочив фильтр в растворе проявляющего вещества (субстрата ферм нта). Например, для пероксидазы хрена хромогенным субстратом является 4-хлоро-1-нафтол, способствующий появлению на фильтрах пурпурных пятен. В качестве альтернативного метода вторичные антитела связывают с биотином, а пероксидазу хрена — с авидином. [c.286]

В настоящее время перенос фрагментов ДНК из секвенирующего геля на мембранные фильтры преследует обычно несколько иные цели, чем тогда, когда этот метод только разрабатывался. Так, в большинстве случаев перенос ДНК из геля на фильтры осуществляется для последующей визуализации полос ДНК с помощью нерадиоактивной колориметрической или хемилюминесцентной детекции, описанной выше в разделе 2.6, Причем вкупе с мультиплексным секвенированием возможно последовательное многократное проведение этапов молекулярной гибридизации с определенным зондом, несущим ту или иную метку визуализация Д1Ж зонда после ее гибридизации с ДНК, находящейся на фильтре удаление зонда и проведение аналогичных этапов со следующим зондом, С фрагментами ДНК, находящимися в полиакриламидном геле, проведение подобных процедур принципиально невозможно и поэтому перенос фрагментов ДНК из секвенирующего геля на мембранные фильтры занимает важное место в арсенале современной молекулярной биологии. [c.186]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология