Быстрый метод выделения ДНК фага

II. Быстрый метод выделения ДНК фага X [c.84]

Были сконструированы специальные векторы, в которых содержались промоторы для РНК-полимераз фагов 5Р6, Т7 пли ТЗ, расположенные в непосредственной близости от сайтов клонирования распространенных фаговых и космидных векторов. Наличие таких промоторов делает возможным быстрый синтез радиоактивных РНК-зондов, специфичных по отношению к концам клонированного фрагмента ДНК полученные зонды представляют собой идеальный инструмент для прогулки по геному . Это общий метод выделения фрагментов ДНК, располагающихся в геноме по соседству с уже клонированным в составе соответствующего вектора участком ДНК. Постановка таких экспериментов с использованием космид описана в работе [26] и гл. 2 этой книги. [c.37]

Примерно через 6 ч проявите пленку, экспонированную с фильтром II. Выявите бляшки, соответствующие гибридизации. Отберите их уколом и приготовьте препараты фага на чашках. Используйте чашки с агарозой и следуйте методике 11-П быстрого выделения фаговой ДНК. Выращивайте по одной чашке каждого фага (от одного до шести). После выращивания в течение 6 ч налейте на чашку 5 мл среды для разведения фага Я"и инкубируйте при 5°С в течение 2—12 ч. Если позволит время, то, используя быстрый метод, выделите ДНК из этих препаратов фага. [c.48]

На этих экспериментах основан метод быстрого выделения ИРНК фага с помощью сорбции. ДНК фага Тз плавится в рас- [c.473]

Было показано также, что в процессе экстрагирования вирусных нуклеиновых кислот и отделения их от белка может происходить комплексирование в действительности одноценочечных комплементарных молекул, так что обнаруживаемая двухцепочечность может быть на деле артефактом, связанным с фенольным или детергентным методами выделения внутриклеточной РНК. Были получены данные в пользу гипотезы, что матричная (—)-цень удерживается в комплексе с возникающей (4-)-цепью в основном не за счет спаривания оснований, а каким-то менее жестким способом, возможно с помощью молекул репликазы [117, 549]. Именно выраженной способностью образующейся РНК действовать в качестве информационной РНК и связываться с рибосомами, может быть, и объясняется быстрое снятие этой цепи с матрицы. Наряду с этими данными, однако, в последнее время были получены новые данные о существовании РФ- и РПФ-форм РНК у фагов и вирусов растений [25, 46, 221]. Проведенный недавно анализ образующихся 5 -концевых групп [c.241]

Помимо секвенирования вставок в плазмидных векторах таковое возможно и с другими векторными системами, и в литературе сообщается о быстрых и простых способах выделениях ДНК фага лямбда, пригодной для ее непосредственного двуцепочечного секвенирования ферментативным методом с использованием в качестве затравок стандартных олигонуклеотидных праймеров [Manfioletti, S hneider, 1988 Malik et al., 1990]. [c.56]

Часто по завершению цикла экспериментов по секвенированию ДНК случайным подходом и после компьютерной состыковки прочитанных последовательностей оказывается, что субклоны для отдельных участков среди прочих были не секвенированы. Выявление в созданной клонотеке таких субклонов стандартным способом требует много времени и усилий, поэтому был предложен вариант, в котором с помощью агарозного гель-электрофореза в каждой дорожке разделялось одновременно 10 образцов [Hong, 1988]. Причем, как такового, выделения ДНК не проводилось и электрофоретическому разделению подвергались аликвоты супернатанта после выращивания одноцепочечных фагов с добавлением равного объема буфера для нанесения, содержащего 1%-ный додецилсульфат натрия. Метод очень простой и относительно быстрый, но качество разделения, впрочем, оставляет желать лучшего. [c.247]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология