Денатурирующие гели с формальдегидом

Денатурирующие гели с формальдегидом [c.138]

Ввиду его высокой концентрации формальдегид должен быть очень чистым. Достаточно очищен формальдегид фирмы Ма1-lin kroat . Следует работать со свежеприготовленным раствором формальдегида, без следов помутнения. Нейтрализовать раствор до pH 7 можно NaOH. Для приготовления денатурирующего геля на основе агарозы формальдегид добавляют к расплавленному водному раствору агарозы при бО"" вместе с буфером. [c.139]

В одной недавней работе [Rave et al., 1979] был описан электрофорез поли (А)-РНК в денатурирующем геле агарозы, содержащем 67о формальдегида в 0,04 М Na-фосфатном буфере. РНК перед нанесением на гель денатурировали в 50%-ном растворе формамида с 6% формальдегида в том же буфере при 60 в течение 5 мин. Затем препарат быстро охлаждали и добавляли в него, как обычно, глицерин и бромфеноловый синий. В электродные резервуары заливали такой же буфер, содержащий 3% формальдегида. После окончания электрофореза гель вымачивали в течение 5 мин в воде при 60 . Этого было достаточно для снятия формальдегида с РНК, которую затем, после частичного щелочного гидролиза, переводили диффузией из геля на диазобумагу по методу Олвина [Alwine et al., 1977]. Несмотря на предшествующую обработку формальдегидом, поли (А)-РНК на диазобумаге успешно гибридизуется с ДНК. [c.139]

Поэтому, чтобы избежать инфицирования гелей, в суспензии гелей, заполненные колонки и элюенты добавляют бакте-риостазы, которые не должны реагировать ни с матрицей геля, ни с хроматографируемыми соединениями, не должны денатурировать или осаждать их. Если ход хроматографирования прослеживается по УФ-поглощению, то эти соединения не должны также поглощать в той спектральной области, которую используют для обнаружения. В самом начале развития гель-хроматографии был предложен в качестве бактериостазов ряд соединений, в частности толуол, фенол, крезол, формальдегид и хлороформ (см. также гл. 5, табл, 5.10). Однако фенолы и формалин вступают в реакцию с белками и вызывают необратимые их изменения. Хлороформ, который применяется в виде насыщенных водных растворов, непригоден для работы с мягкими гелями, так как вызывает уменьшение степени набухания и, таким образом, неблагоприятно влияет на хроматографические свойства этих гелей. Он также непригоден в тех случаях, когда колонки оснащены пластмассовыми трубками, так как повреждает их. [c.376]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология