Денатурирующий градиентный гель-электрофорез

Денатурирующий градиентный гель-электрофорез [c.128]

Два фрагмента ДНК, различающиеся лишь делецией, инсер-щией или заменой одного нуклеотида, или единственным неспаренным нуклеотидом, можно легко разделить при помощи денатурирующего градиентного гель-электрофореза, ДГГЭ [15, 17— 20, 27, 28]. Принцип метода заключается в разделении двухце-почечных фрагментов ДНК электрофорезом в стандартном акриламидном геле с линейным градиентом денатурирующих факторов — мочевины, формамида или температуры. Ниже приводятся теоретические основы метода. Здесь отметим только, что разделение очень похожих фрагментов в геле происходит из-за разных температур плавления их ДНК. [c.128]

В сотрудничестве с доктором Маниатисом и доктором Лерманом нами были разработаны два таких метода, являющиеся дополнением к анализу ПДРФ РНКазное расщепление и денатурирующий градиентный гель-электрофорез (ДГГЭ) [15—20]. Каждый нз них позволяет идентифицировать по крайней мере 50% всех возможных замен нуклеотидов на участке ДНК Длиной до 1000 п. н. [c.124]

Обнаружение единичных нуклеотидных замен при помощи денатурирующего градиентного гель-электрофореза [c.173]

При мутациях гена, представляющих собой замену одного или нескольких нуклеотидов, длины амплифицированных фрагментов остаются постоянными, однако некоторые физико-химические свойства мутантных молекул меняются. С учетом этих особенностей разработаны различные варианты поиска мутантных фрагментов ДНК и идентификации в них точковых мутаций. Ведущими из этих методов являются метод анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SS P), метод анализа гетеродуплексов (НА), денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE) и метод химического расщепления некомплементарных сайтов (ССМ). [c.266]

DGGE — денатурирующий градиентный гель-электрофорез. В этом методе ДНК-дуплексы подвергаются миграции в геле с градиентом денатурирующих условий (может быть использован и температурный градиент). Мифация продолжается до тех пор, пока ДНК-дуплексы не достигают в геле точки плавления и не разделяются, после чего миграция фрагментов останавливается. Однонуклеотидные различия в нормальной и тестируемой ДНК выявляются по различной электрофоретической подвижности в геле. Высокая чувствительность метода (95%) достигается благодаря специфическим праймерам с так называемым G -зажимом, представленным чередованием гуанина и цитозина в количестве до 20 нуклеотидов. За счет этого температура плавления продукта амплификации сильно увеличивается, что повышает эффективность определения мутации. Однако праймеры с ОС-зажимом достаточно дороги, поэтому метод используется ограниченно. [c.267]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология