Бактериальная искусственная хромосома ВАС

Векторы для клонирования. Используют для увеличения количества (амплификации) фрагмента ДНК, встроенного в такой вектор, посредством репликации. В этом качестве наиболее часто используются бактериальные плазмиды и фаги. Для клонирования больших фрагментов генома используют векторы — искусственные бактериальные и дрожжевые хромосомы (ВАС и YA ). [c.36]

Рис. 9-2. Строение искусственной линейной хромосомы, в которой между теломерами Tetrahymena заключены последовательности дрожжевой и бактериальной ДНК (задача 9-4). Указаны единичные сайты разрезания тремя рестриктазами.

Искусственные бактериальные хромосомы [c.107]

Искусственные хромосомы Р1. В заключение следует упомянуть о семействе векторов РАС (Р1-derived artifi ial hromosome), также часто используемых в современных исследованиях. Векторы этой серии содержат гены умеренного бактериофага Р1, обеспечивающие репликацию фаговой хромосомы в зараженных бактериальных клетках. Рекомбинантные ДНК на их основе (размер вставки 150-200 т.п.о.) также вводятся в бактериальные клетки с помощью электропорации. [c.94]

Новые комбинации генов можно создать и искусственным путем в лабораторных условиях с помощью таких ферментов, как рестриктирующие эндонуклеазы, ДНК-лигаза и терминальная трансфераза. Чтобы встроить чужеродный ген в геном клеток Е. соИ, этот ген сначала пришивают к вектору, которым служит либо плазмида Е. соИ, либо ДНК фага Х. Полученная рекомбинантная ДНК может затем попасть в клетку Е. oli, ковалентно включиться в ее хромосому и в составе этой хромосомы реплицироваться. Если новый ген, содержащийся в рекомбинантной ДНК, обладает подходящими сигнальными последовательностями, указывающими начало и конец транскрипции, то такой ген будет транскрибироваться и транслироваться с образованием соответствующего белкового продукта. Многие гены из животных клеток уже были введены в бактерии, а бактериальные гены в свою очередь были встроены в эукариотические клетки. С помощью бактерий, в геномы которых введены соответствующие гены, можно получать применяемые в медицине белковые препараты-инсулин, гормон роста и интерфероны. [c.991]

На рубеже 80-х годов стала очевидной возможность использовать искусственную хромосому дрожжей в качестве емкого вектора для клонирования ДНК геномов высших организмов, включая человека (Burke et al., 1987). Размер фрагментов ДНК, которые можно включать в YA , сопоставим с размером природных хромосом дрожжей - в среднем 1,2 млн п.н., что в несколько раз больше размера клонов ДНК в бактериальных, фаговых и кос-мидных векторах (рис. 23). Большой размер клонируемых фрагментов позволяет уменьшить количество клонов, необходимых для перекрытия эквивалента генома. С помощьюУАС в качестве вектора стало возможным преодолеть трудности клонирования, которые связаны с особенностями структурной организации хромосом высших эукариот присутствием в геноме множества повторяющихся элементов и метилированных участков, неравномерностью распределения генов по хромосомам и пр. (S hlessinger, 1990). [c.71]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология