Транс-сплайсинг

Рис. 19.17. Схема интеграции кассеты генов в ДНК хлоропластов а) и транс-сплайсинга химерных белков (б)

Транс-сплийсинг. До сих пор, говоря о сплайсинге, мы рассматривали внутримолекулярные, или 1/мс-реакции. А существует ли межмолекулярный, или транс-сплайсинг Иными словами, может ли происходить лигирование двух экзонов, находящихся в разных молекулах РНК, с одновременным удалением фланкирующих их интронов Принци- [c.117]

Сплайсинг и транс-сплайсинг белков [c.312]

Рис. 41. Транс-сплайсинг белка с использованием разделенного интеина [45]

Рис. ]. 11. Схема транс-сплайсинга (его механизм HensBe TeHV i — интрон > — инициирующим кодон i терминирующий кодон рА - терминатор транскрипции и сайт полиаденилирования

Помимо смены промоторов на поздней стадии меняется и эффективность терминации. Поздние мРНК в среднем заметно длиннее ранних и весьма гетерогенны по длине. Частично эта гетерогенность связана с неэффективной терминацией, а частично обусловлена посттранскрипционными изменениями. Так, к 5 -концу транскршт-та данного позднего гена могут быть присоединены нуклеотидные последовательности [в том числе и поли(А)1, происходящие из транскриптов других (в том числе и весьма далеко расположенных) генов. Механизм этой реакции, напоминающей транс-сплайсинг (см. гл. УП1), неизвестен. [c.307]

Недавно несколькими независимыми группами исследователей была продемонстрирована возможность разделения интеинов на две части, каждая из которых сама по себе не обладает ферментативной активностью, однако после нековалентного их объединения комплекс активируется [64-67]. На основе этого открытия были разработаны высокоэффективные системы, осуществляющие транс-сплайсинг белков (рис. 41). При одновре- [c.315]

В заключение этого раздела следует упомянуть о возможности использования транс-сплайсинга белков для исследования белок-белковых взаимодействий в цитозоле прокариотических и эукариотических клеток [72, 73]. При таком подходе получают гибридные рекомбинантные белки путем слияния половинок зеленого флуоресцирующего белка (GFP) или люциферазы с двумя фрагментами расщепленного интеина. Другой конец одного из фрагментов интеина соединяют с белком-рецептором (приманкой), как это делается в классических системах дигибридного скрещивания у дрожжей, а у другого фрагмента - с большим количеством потенциальных белков-лигандов. В том случае, если между рецептором и лигандом происходит взаимодействие, два фрагмента интеинов объединяются друг с другом (см. выше, рис. 41) и осуществляют транс-сплайсинг, завершающийся образованием полноценного флуоресцирующего белка или люциферазы, что легко обнаруживается по изменению уровня флуоресценции инкубационной смеси. [c.316]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология