Метионин в тканевой культуре

До последнего времени выращивание клеток в тканевой культуре проводили на сложных средах, неопределенных по составу. Фишеру и сотрудникам [100—102] удалось показать относительную потребность миэлобластов куриного эмбриона в ряде аминокислот (глутамин, аргинин, цистин, триптофан, гистидин, пролин) в качестве стимуляторов роста. Ими было также установлено, что для роста клеток млекопитающих в культуре тканей необходим глутамин [101]. Игл [103, 104] разработал метод культуры тканей, позволяющий определять потребность клеток в отдельных аминокислотах (и других соединениях). Таким образом, появилась возможность выращивать клетки млекопитающих (включая клетки карциномы человека) на средах, состоящих преимущественно из известных химических компонентов. Состав основной среды, используемой в этих исследованиях, приведен в табл. 13. Помимо перечисленных составных частей, необходимо добавлять к среде небольшое количество диализованной сыворотки крови. Но, по-видимому, сыворотка не играет здесь роли источника аминокислот. Как фибробластам мыши, так и раковым клеткам человека необходимо для роста наличие 13 Т-амино-кислот соответствующие О-изомеры не активны. Одновременная потребность в цистине и метионине указывает на то, что эти [c.131]

Рис. 2. Прямой анализ продуктов, секретируемых гибридными клетками. Культуры гибридом получали, проводя слияние спленоцитов мышей, иммунизированных линией опухолевых клегок человека, с клетками мышииой мне ломы Х63-Аё8. Взвесь, содержащую 5-10 клеток гибридомы в 1 мл, культивировали в течение ночи в полной среде для тканевых культур в присутствии 100 мкКи/мя 5-метионина. Культуральную жидкость центрифугировали 15 мин при 20 000 Затем 100 мкл надосадочной жидкости смешивали перед ДСН-ПАГЭ с 50 мкл 3-кратного концентрата ДСН-буфера для образца. На гель наносили пробы по 50 мкл. Электрофорез проводили при постоянном токе 25 мА на пластинку геля в течение 3,5 ч. Т и Л —соответственно тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов 1 и — окрашенные элек трофореграммы и радиоавтографы одних и тех же образцов. Стрелками указаны легкие цепи пмм ко лобулино8, кодируемые геномом клеток Х63-Ай8.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология