Гибриды, полученные в растворе

Большинство гибридом получено путем слияния с линиями мышиных клеток, экспрессирующих одни и те же Н-2 детерминанты, и многие гибридомы синтезируют иммуноглобулины того же идиотипа. Следовательно, нужны иные способы идентификации секретируемых антител. ИЭФ обеспечивает разделение по крайней мере 50 ООО мышиных иммуноглобулинов, поэтому этот метод часто используется для дальнейшей характеристики линий гибридом. Прописи агарозной основы и других растворов приведены в табл. 4.15. [c.158]

Весьма важным было открытие, что две дезорганизованные цепи денатурированной при 80°С ДНК рекомбинируются, если дать раствору медленно охладиться ниже температуры перехода. Ренатурированная ДН К имеет исходную двухспиральную Структуру, что подтверждается почти полной идентичностью многих свойств. Электронные микрофотографии показывают наличие характерного для спиральной ДНК цилиндра диаметром 20А. Более того, можно получить гибридную ДНК из двух генетически близких штаммов бактерий. Если две бактерии имеют почти одинаковые генетические свойства, сегменты двух цепей ДНК должны быть сходны между собой, что способствует частичной гибридизации. Так как сегменты ДНК и РНК могут удовлетворительно соответствовать для получения двойной спирали, то возможно образование гибрида ДНК и РНК. [c.738]

Ф и г. 2. Обнаружение ДШ — РНК-гибрида с помощью хроматографии на МАК [22].. ДНК и РНК выделяли из Е. соН. Гибриды были получены в растворе, их анализ проводили [c.156]

Молекулярная гибридизация в растворе с последующим от-детением гиэридов на гидрокстапатите (ГАП) (Вгеппег et al., 1969). Гибриды получают в 0,12М фосфатном буфере (pH 7,0) при смешении денатурированной ДНК из одного штамма с денатурированными фрагментами меченой ДНК из другого штамма. Смесь нагревают в течение 10—15 мин. в кипящей водяной бане, инкубируют при 60, 66 или 75° в течение 20—24 час., а затем быстро охлаждают во льду. Полученные таким образом пробы можно хранить в замороженном состоянии до использования. [c.134]

Обычно гибриды получают в соловых растворах, забуференных до нейтральных pH, при повышенной температуре. Здесь мы рассмотрим основные этапы этого процесса, подробные методики будут приведены далее (разд. I, В). Концентрации солей, которые обычно успешно применяются для гибридизации, варьируют от 0,3 до 1,5 М нри температурах от 25 до 80°. Чаш е всего применяют 0,3 М раствор Na l в 0,015 М натрий-цитратном или 0,01 М г/)мс-буфере с pH 7,0. Растворы с такой ионной силой пригодны ночти для всех экснеримонтов (отдельные исключения будут обсуждены в дальнейшем). [c.148]

Как показывают измерения длин связей, структура 32 дает больший вклад в резонансный гибрид, чем структура 33 [395]. Так, в фенилдиазонийхлориде межатомное расстояние С—N составляет около 1,42 А, а расстояние N—N — около 1,08 А [396], что больше соответствует простой и тройной связи, чем двум двойным связям (см. т. 1, разд. 1.10). Даже ароматические соли диазония устойчивы только при низких температурах, обычно не выше 5 °С, и лишь самые устойчивые, например соль диазония, полученная из сульфаниловой кислоты, сохраняются при 10—15 °С. Соли диазония обычно получают в водных растворах и сразу используют [397], однако при желании можно получить твердые соли диазония (см. т. 3, реакцию 13-25). Устойчивость арилдиазониевых солей можно повысить путем комплексования с крауН Эфиром [398]. [c.479]

В результате слияния протопластов получение растений-регенерантов. При помощи ферментативного гидролиза разрушаются клеточные стенки и образуются раздетые клетки, или протопласты. Они способны к слиянию, и этот процесс называется парасексуальной гибридизацией растительных клеток. Индуктором слияния является полиэтиленгликоль, а образованные гибриды обрабатываются сильным щелочным раствором или диметилсульфоксидом. Техника слияния напоминает образование гибридов животными клетками, однако имеется существенное отличие. Слияние животных клеток позволяет получить только лишь новую клетку, а слияние протопластов является основой получения нового гибридного растения. Парасексуальная гибридизация посредством слияния протопластов дает возможность скрещивать филогенетически отдаленные виды растений, которые невозможно скрестить обычным половым путем, а также комбинировать родительские гены растений в различных вариантах (рис. 31.3). [c.497]

Трифенилфосфинметилиден (желтое кристаллическое вещество,, т. пл. 79 °С) весьма чувствителен к кислороду и влаге воздуха. Его получают в растворе в присутствии карбонильного компонента следующим методом. Смесь трифенилфосфина и бромистого метила при стоянии в течение нескольких суток дает кристаллы бромистого метил-трифенилфосфония (т. пл. 229 °С). Продукт дегидрогалоидирования этой соли действием основания, обычно фениллития в сухом эфире в атмосфере азота, является резонансным гибридом трифенилфосфин-метилидена (фюсфорилена) и соответствующего илида [c.572]

Кроме того, вследствие мутаций в каждой из цепей гемоглобина возможна замена по крайней мере одной аминокислоты. В настоящее время известно около 100 таких мутантов [94, 170]. Изменения в составе гемоглобина можно произвести и искусственно (см. работу 18]) различными способами 1) путем образования гибридов с использованием а- и -цепей из гемоглобйнов различных видов 2) в результате протеолитического переваривания С-концевых остатков под действием карбоксипептидазы и 3) химическим модифицированием, например, сульфгидрильных групп цистеиновых остатков. Можно, разумеется, изменять валентность железа, а также природу шестого лиганда в координационной сфере железа, и даже удается получить гемоглобины, в которых состояние железа в каждой из цепей различно, например, путем смешивания растворов N- и 02. Из многих гемоглобйнов и миоглобинов удается удалить без денатурации белка железопорфириновый комплекс, а затем реконструировать полный белок из белка и порфиринового комплекса, взятых из различных источников, или вместо железопорфиринового комплекса взять при этом порфириновый комплекс другого металла (разд. 7.1 и 7.4). Исследование мутантных форм и химически модифицированных гемоглобйнов существенно расширило наши знания о природе реакций гемоглобина, и в последующих разделах мы часто будем использовать результаты, полученные с помощью мутантных и модифицированных белков. [c.148]

В настоящее время еще не разработаны методы для десорбции гибридов с мембранных фильтров. РНК из гибрида можно выделить, сначала разрушив связи, стабилизирующие гибрид (например, нагреванием при низкой концентрации солей или кратковременной обработкой 0,3 М КОН),. и затем элюируя РНК буфером 2XSS . В обоих случаях РНК может деградировать. Чтобы получить иптактные гибриды, гибридизацию следует проводить в растворе, а гибриды очищать центрифугированием в градиенте-плотности sGl или хроматографией на колонке с МАК (см. разд. V). [c.158]

Интересные данные были получены В. Е. Писаревым и М. Д. Жилкиной при применении внекорневого питания бором слабофертильных гибридов растений . Опрыскивание растений 0,П5%-ным раствором борной кислоты (один раз в неделю) оказало четко выраженное положительное действие — резко увеличило число колосков в одном колосе и озерненность колосьев. Авторы приходят к выводу, что внекорневое питание бором слабофертильных форм растений имеет практическое значение. [c.32]

Метод колхицинирования через корни очень эффективен для злаков, особенно в случае ограниченного количества семян какого-нибудь ценного вида или гибрида. Эти семена высевают в обычных условиях и полученным растениям дают раскуститься. Затем кусты делят, рассаживают и, когда они хорошо примутся, отмывают корни и погружают попеременно на 12 часов то в слабый раствор колхицина, то в проточную воду. Число экспозиций зависит от материала и концентраций. Ржано-пшеничные амфидиплоиды были получены этим методом при обработке в течение четырех суток и концентрации раствора 0,05%. [c.70]

В случае Нозерн -гибридизации РНК-зонды оказались гораздо более чувствительными, чем ДНК-зонды. Мелтон и др. [5] сообщали о достигнутом ими 10-кратном повышении чувствительности метода при использовании РНК-зондов как выяснилось, это общее правило. РНК-РНК-гибриды более стабильны в растворах формамида, чем аналогичные ДНК-ДНК-гибриды, что и порождает проблему неспецифичности гибридизации. В частности, связывание некоторых зондов, обладающих способностью к перекрестной гибридизации с рибосомной РНК, стало серьезной проблемой, и для выявления специфических гибридов приходится варьировать степень жесткости отмывки. В общем случае лучше с осторожностью относиться к полосам РНК, по размеру совпадающим с 28- или 185-РНК, до тех пор, пока не будут получены еще и другие доказательства того, что они появились в результате специфической гибридизации. Для удаления неспецифических гибридов некоторые исследователи предлагают проводить отмывку в присутствии РНКазы. В этом случае фильтры нельзя использовать повторно. [c.30]

Основными средами, употребляемыми при получении гибридом, являются среда RPMI 1640 и среда Игла в модификации Дульбекко. Применяются и другие среды, в частности среда Дульбекко в модификации Пскова (эта среда особенно часто используется при иммунизации in vitro). Среды выпускаются в виде готовых растворов, 10-кратных концентратов и сухих порошков. Лучшие результаты получаются при приготовлении сред в условиях лаборатории из сухих порошков, однако при этом важное значение имеет качество воды. Для приготовления сред необходима деионизированная и дважды перегнанная в кварцевой посуде вода. [c.98]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология