Амплификация космидных библиотек

Альтернативные методы скрининга космидных библиотек, описанные в гл. 3, предполагают селекцию космидных клонов с использованием феномена гомологичной рекомбинации in vivo. Остальные главы книги посвящены вопросам, связанным с экспрессией клонированных генов. Для многих белков млекопитающих удалось осуществить высокопродуктивную внутриклеточную экспрессию в Е. oli. Однако гетерологические белки, локализующиеся в цитоплазме, часто образуют трудно растворимые агрегаты, что значительно осложняет получение нативного продукта. В гл. 4 описаны эффективные способы выделения активных растворимых продуктов из нерастворимых белков цитоплазмы Е. соИ. Вероятность деградации специфическими бактериальными протеиназами многих эукариотических белков, синтезируемых в Е. oli, может быть существенно снижена, если их экспрессировать в виде гибридных белков. Такие составные белки, в которых бактериальный компонент обычно представлен -галактозидазой, можно использовать в качестве иммуногенов для получения антисыворотки и моноклональных антител к клонированному эукариотическому белковому домену. Эти вопросы >ассматриваются в двух главах — одна посвящена получению поликлональной антисыворотки, а другая — методам гибридной технологии. В последующих главах книги описаны современные эукариотические экспрессирующие системы в гл. 7 — дрожжевая, далее в трех главах — системы на основе культивируемых клеток млекопитающих и трансгенные животные. В частности, описана система экспрессии с использованием векторов, которые несут гены, обеспечивающие возможность их индуцибельной амплификации это позволяет снимать токсическое действие антибиотиков, введенных в культуральную среду. Клонированные в таком векторе гены также [c.8]

Амплификация перед упаковкой in vivo, подобно любой амплификации библиотеки, чревата уменьшением представленности библиотеки и может привести к повторному выделению идентичных клонов. Как и в других случаях, этот риск может быть снижен раздельной амплификацией и упаковкой независимых фракций космидной библиотеки. [c.76]

Упаковку космид in vivo можно применять при многих видах работ с космидными клонами и библиотеками. Основное достоинство данного подхода при амплификации библиотек — простота работы с упакованными космидами. Как и библиотеки, полученные на основе Я-векторов, космиды хорошо хранятся при 4 °С в виде фаговых суспензий, что позволяет легко оттитровать космидный препарат. При комнатной температуре препарат стабилен и хорошо выдерживает транспортировку. [c.76]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология