Получение продуктов из нативных растворов

Разные денатурирующие агенты вызывают различное изменение конформации. Один и тот же белок может вступать в различные реакции денатурации. Например, как было показано в разделе 28, в кислом растворе сывороточный альбумин денатурирует, т. е. принимает более рыхлую конформацию. Денатурация сывороточного альбумина происходит также под действием теп-ла 2, приводя к получению продукта, нерастворимого в определенных стандартных условиях, при которых нативный продукт растворим. (Вопрос о том, является ли конформация макромолекул на начальных стадиях процесса более развернутой, не исследовался.) Было показано, что скорость термической денатурации уменьшается в тех условиях, когда скорость кислотной увеличивается, т. е., очевидно, кислотная денатурация приводит к образованию продукта, отличного от продукта термической денатурации. [c.704]

ПОЛУЧЕНИЕ ПРОДУКТОВ ИЗ НАТИВНЫХ РАСТВОРОВ [c.128]

Полученный продукт промывали три раза растворителем и затем дважды — охлажденным эфиром. При титровании л-хлормер-курибензоатом найдено 8 SH-rpynn на 1 моль белка. Две дисульфид-ные связи, очевидно, расщепляются легко, но для расщепления двух других связей необходимо проводить реакцию в концентрированном растворе мочевины. Авторы описываемой работы наблюдали восстановление на 12—19% удельный активности нативной рибонуклеазы при пропускании воздуха в течение 68 час через раствор полностью восстановленного белка в 0,01 М фосфатном буфере при pH 7—8. Освобождаемые SH-группы легко блокируются путем обработки иодуксусной кислотой (700 молб) в течение 2 тс при pH 8,5. pH поддерживается на постоянном уровне добавлением 5%-ного раствора триметиламина при помощи прибора для автоматического титрования. [c.104]

Необходимо сделать некоторые общие замечания, которые следует иметь в виду при определении фракционного состава липидов. Для анализа используют суммарный липидный экстракт, предварительно освобожденный от нелипидных компонентов. Такая очистка предусмотрена в УСМВОЛ и приведена в прописи метода [3]. При других методах экстракции, когда используют бинарные системы растворителей, экстракт, как правило, промывают слабыми водными растворами сильных электролитов (например, 0,87%-ным раствором КС1) с последующим удалением верхней водной фазы, содержащей нелипидные примеси [16]. Может быть использована очистка на сефадексе Q-25 [24]. Важно не допустить в процессе получения липидов их окисления, так как продукты окисления имеют иную хроматографическую подвижность, чем нативные липиды, и на хроматограммах будут присутствовать дополнительные пятна и хвосты . Во избежание окисления липиды защищают от действия прямого солнечного света и хранят в экстрактах в плотно закрытых колбах (флаконах) с притертыми пробками в холодильнике. Растворители отгоняют в токе азота или под вакуумом, допуская лишь слабое (до 40—50°С) нагревание. Выделенные для весового определения и подсушенные на воздухе липиды для фракционирования обычно не используют. [c.213]

Другой пример — хроматография на фосфоцеллюлозе [202, 203] продуктов переваривания стафилококковой нуклеазы субтилизином в присутствии упомянутых выше стабилизаторов. Нуклеазу (35 мг) растворяют в 3,5 мл 0,05М раствор бикарбоната аммония с pH 8, содержащего хлорид кальция (0,01 М) и 3,5 мг р(1Тр. Полученный раство р обрабатывают 35 мкл свежеприготовленного 1%-ного раствора субтилизина и выдерживают 3,5 ч в термостате при 25 °С. Дигерирование останавливают, высушивая раствор при температуре ниже 0°С. Высушенный образец растворяют в 3 мл первого элюирующего раствора (0,ЗМ раствор ацетата аммония, pH 6) и вводят в колонку (рис. 5.31). Активный хроматографический пик 5, занимающий обычное для нативной нерасщепленной нуклеазы положение, содержит 57% фермента (определено по поглощению). Фракции соответствующей хроматографической зоны соединяют и [c.319]

К числу проблем белковой химии, которые разрабатываются в химическом секторе ВИЭМ, нужно отнести каталитический гидролиз белковых веществ. Значение циклических ангидридов аминокислот в белковой молекуле впервые было выдвинуто благодаря новому нами разработанному методу гидролиза. Исследование (В. С. Садико В и И. И. Гаврилов) таких ка-тализатов показало у меня в лаборатории, что содержащиеся в них ангидриды нативны, т. е. представляют одно из звеньев наряду с аминокислотами, из которых строится белковая молекула. В настоящее Е ремя разрабатывается проф. Гавриловым и мною метод отделения ангидридов аминокислот от пептидов и свободных аминокислот, что дает возмонгность количественного учета циклических группировок в катализатах различных белковых веществ. В этом отношении особый интерес представляют ката-лизаты отдельных органов животных и человека. Гидролиз ведется в автоклаве под небольшим давлением в присутствии 1—2%-ной серной или соляной кислоты, причем все продукты распада, кроме жира, переходят в водный раствор. Лизаты, которыми пользуются в настоящее время в медицинской практике, представляют не что иное, как катализаты всевозможных природных белковых веществ, на искусственное получение которых впервые указано мною. [c.393]

Необходимо сделать некоторые общие замечания, которые следует учитывать при определении фракционного состава липидов. Для анализа используют суммарный липидный экстракт, предварительно освобожденный от нелипидных компонентов. Такая очистка предусмотрена в УСМВОЛ и приведена в описании метода [3]. При других методах экстракции, когда используют бинарные системы растворителей, экстракт, как правило, промывают слабыми водными растворами сильных электролитов (например, 0,87 %-ным раствором КС1) с последующим удалением верхней водной фазы, содержащей нелипидные примеси [21]. Может быть использована очистка на сефадексе G—25 [28]. Важно не допустить в процессе получения липидов продуктов их окисления, так как последние имеют иную хроматографическую подвижность, чем нативные липиды, и на хроматограммах будут присутствовать [c.320]

Индуцированную ртутью диссоциацию АТСазы можно представить в виде gFg — 2 j -I- 3rj. В ряде изящных экспериментов с растворами Шахман с сотрудниками задались целью выяснить, сохраняют ли отдельные j- и Г2-субъединицы свою целостность в нативной четвертичной структуре. Некоторые ю полученных ими результатов иллюстрирует рис. 2.48. Для доказательства того, что 5,88-субъедииица состоит из трех цепочек, Сз-Субъединица была обработана янтарным ангидридом при этом образовался с — вариант субъединицы с измененным зарядом. В водном растворе мевду j- и с -формами не устанавливалось равновесия, приводящего к образованию гибридов значит, субъединичная структура стабильна и мономер не способен к обмену. Обработка и с двухмолярным раствором гуанидингидрохлорида — сильного денатурирующего агента — приводила к образованию с- и с -мономеров с коэффициентом седиментации 1,98. Смешивание этих мономеров и последующее удаление денатурирующего агента приводило к образованию четырех продуктов реакции. Они были идентифицированы как 3, j , сс и с (см.рис.2.48,>1). [c.135]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология