Анализ культуральных сред

Проверка стерильности должна проводиться для всех партий среды и трипсина перед их использованием. Поскольку некоторые тесты длятся несколько недель, важно иметь в своем распоряжении адекватные стоки. Использование нетестирован-ной среды — верный путь внести бактериальное загрязнение во все линии клеток, используемые в лаборатории. Культуры клеток также следует постоянно тестировать на загрязнение. Это тестирование включает в себя как анализ культуральной среды, в которой росли клетки, так и анализ самих клеток. [c.110]

Одно из новейших и весьма перспективных применений парофазного анализа — исследование летучих метаболитов микроорганизмов (жирных кислот, спиртов, аминов, простейших карбонильных и сернистых соединений). Ценность информации о составе летучих метаболитов для целей химической таксономии бактерий, вирусов и грибов, а также для диагностики вызываемых ими заболеваний выяснилась уже к началу 1970-х годов. Газохроматографический анализ жидких экстрактов, культуральных сред и клинического материала получил достаточно широкое распространение в микробиологических лабораториях [53—56]. Однако более целесообразным способом определения следов летучих компонентов в такого рода объектах следует считать парофазный анализ. При использовании техники парофазного анализа не только отпадает обременительная в условиях микробиологических и клинических лабораторий необходимость работы с огнеопасными экстрагентами и устраняются осложнения, вызываемые вводом в хроматограф нелетучих и легко разлагающихся веществ, но открывается возможность определения компонентов, маскируемых на хроматограммах экстрактов широким пиком растворителя. Флаконы для парофазного анализа, в которых производится распределение летучих веществ между исследуемым объектом и газом, могут быть использованы для транспортировки [c.265]

К используемому в иммунном анализе второму антителу предварительно присоединяют фермент, который превращает неокрашенный субстрат в окрашенное соединение. Изменение цвета содержимого одной из лунок говорит о том, что исходная культуральная среда содержала антитело, специфичное к данному антигену (рис. 9.2). Если же такое антитело в среде отсутствовало, то второму антителу не с чем будет [c.185]

Плотность клеток микроорганизмов очень близка к плотности водной среды, в которой они растут, и при анализе теплопередачи в дисперсионных культурах бактерий и дрожжей,, обычно имеющих диаметр эквивалентной сферы меньше 10 мкм, культуральную среду можно рассматривать как однородную водную фазу. В аэрируемых биореакторах перенос тепла от культуральной среды к охлаждающим поверхностям осуществляется путем принудительной конвекции. Чтобы судить о потенциальной эффективности охлаждения, необходимо оценить соответствие характеристик водно-газовых смесей, образующихся при оптимальном транспорте кислорода, факторам,, способствующим увеличению теплопередачи от этой смеси к поверхности. [c.450]

В ИСО/ТК 147 стандартизацией методов бактериального контроля воды занимаются специалисты ПК 4 Микробиологические методы [4, 5 ]. Особое внимание специалисты подкомитета уделяют стандартизации общих требований к выращиванию колоний микроорганизмов. ИСО 8199 устанавливает требования к безопасности и гигиене в микробиологической лаборатории, общие требования при приготовлении культуральных сред, их стерилизации, дает примеры разбавителей, часто используемых в микробиологическом анализе, а также буферных растворов, устанавливает требования к стерилизации приборов и посуды. В стандарте приведены общие требования к отбору проб для микробиологического анализа, их консервации и транспортированию, методике разбавления пробы и ее высева на культуральную среду, а также инкубации. [c.388]

Титр вируса в культуральной среде инфицированных клеток можно определить с помощью целого ряда методик, в основе которых лежат физические, биохимические или биологические методы анализа. Наибольшее распространение получил способ, заключающийся в количественном определении вирусной геномной РНК в культуральной среде с помощью гибридизации с меченным ДНК-зондом. Эту стандартную процедуру дот-блот-гибридизационного анализа проводят после концентрирования препарата вируса, как описано в табл. 9.4. Количественное определение достигается путем сравнения интенсивности полученного гибридизационного сигнала с интенсивностью контрольных сигналов гибридизации точно титрованного вируса (разд. 9.6.1.3) или известных количеств РНК, или ДНК, нанесенных на фильтр. Используя разные ДНК-зонды, можно оценить концентрацию индивидуальых компонентов в вирусном препарате и непосредственно определить, содержит ли вирус интересующие нас последовательности. [c.297]

Ввод результатов анализов по наличию ацетата, лизина и азота в культуральной среде [c.91]

И. Меняйте культуральную среду дважды в неделю и проводите пересев клеток, как обычно, через некоторое время после достижения полного монослоя. При анализе линий, растущих в суспензии, собирайте клетки центрифугированием и продолжайте их культивирование после обычного разбавления. [c.137]

Многие гибридомы продуцируют 25—75 мкг иммуноглобулина на 1 мл культуральной среды. Фотография, показывающая результаты типичного анализа, приведена на рис. 4.10. [c.158]

Анализ биологических жидкостей, клеточных экстрактов и других сложных материалов с помощью ГЖХ может оказаться невозможным из-за присутствия высокополярных и высокореактивных компонентов или ряда мешающих примесей. Кроме того, такие неочищенные пробы могут преждевременно загрязнять жидкую фазу. Поэтому обычно проводят предварительное разделение анализируемой смеси для удаления из нее микроорганизмов, компонентов культуральной среды, белков, смол, солей и т. д. Иногда перегнанные или проэкстра-гированные пробы можно вводить прямо в колонку. При этом, однако, следует иметь в виду, что данный метод неприменим к водным пробам. В некоторых случаях требуется высушивание, гидролиз или количественная химическая обработка проб для получения летучих производных. Эти процедуры часто являются причинами дополнительных ошибок. [c.209]

Очистка гексозаминов необходима при анализе сложных полимеров, отличных от пептидогликанов (например, липополисахаридов). Методику можно применять к целым бактериальным клеткам (помня о том, что выход мурамовой кислоты варьирует), а также для ОП ределения гексозаминов в культуральных средах. [c.304]

Перед окончанием роста культуры отбирают 5 мл пробы (или больше) и добавляют к 5 мл смеси немеченых соединений, содержащей достаточное количество H2SO4, так чтобы конечный pH был равен 1,5—1,8. При этом происходит остановка реакции и перевод всех присутствующих в среде метаболитов в кислотную форму. Смесь немеченых соединений (при использовании Е. oli) содержит следующие компоненты, растворенные в основной ростовой среде этанол, уксусную кислоту, пиро-виноградную кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, молочную кислоту, янтарную кислоту и лимонную кислоту. Ввиду малых количеств конечных продуктов в 5—10 мл культуральной среды использование смеси немеченых соединений существенно для получения количественного выхода радиоактивных конечных продуктов, образуемых клетками. Концентрация каждого компонента смеси равна 0,1 М, за исключением фумаровой кислоты, концентрация которой составляет 0,05 М. Смесь немеченых соединений вместе с культурой центрифугируют для удаления клеток. Надосадочную жидкость отделяют и хранят до анализа в замороженном состоянии. При исследовании разных организмов требуется приготовление смесей различных немеченых соединений. Их состав, естественно, зависит от природы ко- [c.433]

Ни один единичный тест сам по себе не обеспечивает выявления всех возможных микроорганизмов, в связи с чем следует проводить множественные тесты. Организмы, растущие в культуральной среде, легко выявляются, если загрязненная ими среда инкубируется в течение нескольких дней. Такое загрязнение не представляет серьезной проблемы, поскольку эксперимент можно быстро закончить и зараженные культуры выбросить. Основную опасность представляют медленно растущие загрязняющие микроорганизмы, которые не вызывают видимых изменений в среде и не обладают выраженным цитостатическим действием. Такие микроорганизмы могут остаться незамеченными и при этом они могут решительно повлиять на результаты биохимических экспериментов так, появление полосы сателлит- ной ДНК при анализе в градиенте плотности s l или необычной формы фермента могут быть обусловлены присутствием загрязняющих микроорганизмов. [c.110]

Исследование роста А. eutrophus Z-1 при многократном использовании среды с коэффициентом рециркуляции v, равным 0,5 (50% культуральной среды заменяли дистиллированной водой) и 0,97 (3% среды использовали для химических анализов), показало применимость такого режима для культивирования бактерий [Кеслер и др., 1975]. В серии экспериментов установлено, что многократное использование среды не влияет на удельную скорость роста бактерий и их автотрофию, несмотря на Значительное увеличение концентрации органических веществ в среде. Сохранение активного автотрофного роста водородных бактерий при рециркуляции среды и соответствующих ему характеристик газообмена предполагает, что продукты метаболизма не включаются клетками в биосинтез, а аккумулируются в среде. Последнее подтверждается данными химических анализов. Во всех опытах с многократным использованием среды не отмечено установления равновесного состояния концентрации органических веществ в среде наоборот, количество внеклеточных органических веществ неуклонно возрастает пропорционально продолжительности эксперимента (рис. 32). [c.64]

Обычно для иммунологических исследований (например, ELISA) или иммунизации животных мы выделяем MV из культуральной среды, как описано выше для ВПГ. Однако для анализа спектров вирусных белков и т. д. специалисты рекомендуют использовать метод доктора В. Гибсона, который приводится ниже. Исходным материалом для получения вирусных препаратов максимальной инфекционности и наибольшей чистоты должна быть культуральная среда. Для сохранения высокой инфекционности препарата и целостности вирусных частиц следует избегать осаждения вируса. Впервые центрифугирование в отрицательном градиенте вязкости и положительном градиенте плотности, предложенное Барзилаи и др. [29] для выделения MV, было применено Тэлботом и Алмейдиа [30]. Метод надежен и гарантирует высокую эффективность. Его осуществляют следующим образом [c.291]

Содержание уксусной кислоты в культуральной жидкости во время биосинтеза лизина на ацетатной среде может изменяться в определенных пределах. При введении уксусной кислоты в культуральную среду в процессе ферментации наряду с повышением концентрации ацетата одновременно происходит заметное снижение pH среды, т. е. существует тесная связь между подачей ацетата в ферментер и изменением pH культуральной жидкости. Для автоматизации подачи в начале процесса экспериментатор вводит в ЭВМ уставку по pH, которая передается на устройство управления ферментацией, и переменные калибровки насоса. Затем устройство управления поддерживает pH на определенном уровне, а ЭВМ подсчитывает поданный в ферментер объем ацетата до ввода экспериментатором результатов анализа по ацетату, азоту, лизнну. После ввода анализов ЭВМ переопределяет уставку pH, передает ее на устройство управления ферментацией и продолжает подсчитывать объем поданного ацетата до ввода данных по результатам анализов. Объем подсчитывается по формуле п [c.91]

АРМ физико-биохимических анализов, состоящее из набора автоматизированных измерительных модулей с микропроцессорными контроллерами, — для морфометрического анализа, измерения активности антибиотиков, анализов реплик колоний на чашках Петри и состава культуральных сред с помощью газовой и жидкостной хроматографии, непрерывного измерения оптической плотности суспензий, определения дыхательной активности микроогранизмов методом замедленной флуоресценции, биохимических анализов с помощью хемилюминометра [c.106]

Примерно удвоилось. В условиях логарифмического роста бактерии активно синтезировали белок и содержали полный набор ферментов для синтеза всех аминокислот. При анализе суммарного бактериального белка было установлено, что радиоактивности отдельных аминокислот, как и следовало ожидать, пропорциональны их относительному содержанию в препарате белка. Если же, однако, в культуральную среду добавляли немеченую аминокислоту, например Ь-изолейцин, то включение радиоактивной метки в остатки изолейцина снижалось более чем на 95 /о аналогичные опыты были проведены и с другими аминокислотами. Эти эксперименты показали, что в процессе роста бактерии преимущественно использовали добавленные аминокислоты и что эти аминокислоты каким-то образом оказывают ингибирующее действие на свой собственный синтез из молекул-предшествен-ников. [c.10]

Бактерии, взятые в логарифмической фазе роста в концентрации около 10 клеток/мл, инактивируют подходящим способом, отмывают от культуральной среды и центрифугируют. Инактивированная нагреванием антисыворотка может быть сорбирована неоднократно. При этом каждый раз используют 10 микробных клеток и ресуспендируют их в 1 мл сыворотки путем перемешивания при вращении в течение 1 ч при комнатной температуре. Так, например, трехкратная абсорбция кроличьей антисыворотки к С. jejuni каждой из восьми суспензий других грамотрицательных микроорганизмов кишечника позволила. получить антнсыворотку к Сат-pytoba ter spp. с титром, превышающим 1 12 800 (по данным иммуноферментного анализа). [c.101]

Кроме того, чрезвычайно важно избежать перекрестного переноса клеток из одних лунок в другие. Для удаления среды из каждой лунки мы используем диспенсер на 1 мл, снабженный новым наконечником одноразового использования. Когда в лунках происходит интенсивный рост гибридомных клеток, то смена наконечников для каждой лунки гарантирует та кже, что в супернатанты, взятые для анализа, не будут занесены антитела из других лунок. Добавление свежой среды ко всем лункам (по 1 мл) можно производить одним наконечником при условии, что не происходит контакта наконечника со средой в лунках. После, смены культуральной среды на 1, 2 и 3-й день после гибридизации вполне достаточно и удобно заменять 1 мл среды на 1 мл свежей среды ГАТ по понедельникам, средам и пятницам. Благодаря смене среды каждые 2—3 дня фоновые антитела, синтезированные сохра-нивш ими жизнеспособность клетками еелезенки, удаляются. [c.131]

Нижний слой агара состоит из полной культуральной среды, содержащей 0,3% агара. Для его получения 3%-ный агар разбавляют в 10 раз нагретой до 37 °С средой, перемешивают и разливают по 1 мл в чашки Петри (диаметр 35 мм) или культуральные чашки (Fal on 1008 или 3005). Если условия анализа требуют применения митогенов, кондиционированной среды или других растворимых компонентов, то мы часто добавляем их к нижнему слою агара. Добавки можно включать в состав агарсодержащей среды до гелеобразования это удобно в тех случаях, когда требуется большое число культур с одинаковым нижним слоем агара. Поскольку при внесении добавок концентрация агара уменьшается, следует либо вносить их в малом объеме (т. е. в концентрированном виде), либо уменьшать количество воды при приготовлении среды в соответствии с добавляемым объемом. Обычно мы игнорируем уменьшение концентрации агара, если добавленный объем составляет меньше 5% общего объема. Когда для опыта требу- [c.258]

Клетки из культур или из селезенок иммунизированных лягушек осаждают в течение 30 с при 10 000 g в центрифуге фирмы Eppendorf. Супернатанты сохраняют для анализа на содержание антител. (За 24 ч до проведения анализа методом локального гемолиза культуральную среду в лунках панелей заменяют свежей, чтобы в день определения клетки находились в свежей среде, не содержащей антигена.) Клетки суспендируют в 80 мкл раствора ЗФР, изотонического в отношении клеток. [c.502]

Из 1 Миллилитровых приборов Марбрука можно собрать лишь очень небольшое количество культуральной среды, содержащей хелперный фактор между тем для биохимического анализа и выделения активных молекул требуются довольно большие ее объемы. С этой целью используют камеры, в которых можно культивировать по 3-10 (вместо 10 ) клеток (рис. 3). В принципе размеры камер лимитируются только тем, что коммерческие диализные трубкн ие бывают шире 43 мм. Еслн такую трубку разрезать вдоль, то получится лента шириной около 85 мм, которой можно перекрыть внутреннюю камеру диаметром ие более 60 мм. Камеры сделаны из стекла Ругех в виде вставок в кристаллизационные чашки диаметром 10 см, изготовленные из того же стекла. Крышки этих камер по высоте должны быть меньше кристаллизационных чашек, чтобы предотвратить инфицирование культуры из воздуха, циркулирующего в термостате. В качестве крышки удобнее всего использовать ребристую чашку из стекла Ругех диаметром 15 см типа формочки для пудинга нлн желе. Внутрь вставки, затянутой диализной мембраной, помещают 30 мл клеточной взвесн, а в кристаллизационную чашку—150 мл культуральной среды, что позволяет получить значительные объемы среды, содержащей хелперный фактор. [c.234]

Опыты с введением Н -тимидина в среду таких культур на 2 часа показали, что если ввести изотоп в культуру в момент посадки, то метится в среднем 0,2% клеток в популяции. В дальнейшем процент меченых клеток практически не нарастает, хотя в течение 2 — 3 суток культивирования обнаруживается значительное количество митозов. Если же вводить Н -тимидин после первых 24 часов культивирования, то процент меченых клеток начинает возрастать. При введении изотопа через 42 часа на срок 4 часа оказываются мечеными 10% клеток. Из этих наблюдений следует, что клеточная пролиферация, наблюдаемая после 24 часов, поддерживается не за счет клеток, находившихся в синтетическом (5) периоде в момент эксплантации, а за счет клеток, которые в условиях культуры постепенно входят в синтетическую фазу и начинают делиться. В целом следует еще раз напомнить, что применительно к клеткам нормальной крови и лимфоидной ткани суспензионные культуры остаются пока моделью, позволяющей проводить лишь непродолжительные эксперименты. В то же время существует ряд проблем, для изучения которых суспензионные культуры могут служить особенно удобной моделью. Это, в частности, относится к дальнейшему анализу природы лейкоцитарных трефо-нов — ростстимулирующих веществ, выделяемых в культуральную среду лейкоцитами. Интересные исследования, которые проводились на эту тему Г. К. Хрущевым (1945) и были незаслуженно прерваны, очевидно, еще ждут своего продолжения. [c.94]

Питательная среда и геяарин, применяемые для олы-тов, должны быть предварительно проверены на токсичность. Среда Игла может храниться при 4°С до двух лет, глутамин необходимо добавлять перед постановкой эксперимента. Исследуемый раствор митогеиа (ФГА) должен иметь pH 6,5—7,8. Большие концентрации белка в исследуемых дозах -митогена (низкоактивные препараты) не следует вводить в культуру, так как увеличение процентного содержания белка приводит к выпадению фибриновой пленки, в которую мигрируют лимфоциты и в культуральной среде практически не остается клеток для анализа. [c.260]

Иммортализация клеток, как правило, сопровождается возникновением ряда признаков злокачественной трансформации. Клетки полученных иммортализованных линий были подвергнуты анализу по некоторым из них, а именно повышению эффективности посева на субстрате, увеличению скорости роста клеток, появлению признака независимого роста клеток от содержания сыворотки в культуральной среде и их способность расти в полужидком агаре. [c.270]

Муравьиная кислота является обычным промежуточным продуктом клеточного метаболизма. Она найдена в культуральных средах, моче, крови, желудочных соках, будучи также продуктом многих химических реакций. Селективный спектрофотометрический ферментативный анализ с использованием формиатдегидрогеназы, ма-латдегидрогеназы и тетрагидрофолиевокислой синтегазы непригоден для непрерывного мониторинга. [c.25]

Акустический анализ негомогенных жидкостей (т.е. частиц, суспендированных в растворах электролитов, например, микробных культур) особенно сложен. С помощью ультразвука определяли концентрацию загрязнений в сточных водах [37]. Рост дрожжевых (и других) культур также контролировали ультразвуковым методом, используя гибкий пьезоэлектрический мембранный преобразователь, состоящий из полиацеталевой смолы, хлорированного полиэтилена и цирконат-титаната свинца [42]. Измерительная ячейка состояла из двух пьезоэлектрических мембран (каждая площадью 2,5 х 1,5 см и толщиной 0,2 мм), разделенных слоем культуральной жидкости толщиной 2,5 мм. Частоту колебаний передающей мембраны фиксировали равной 40 кГц так, чтобы на приемной мембране генерировался сигнал с амплитудой приблизительно 20-100 мВ. Хотя с ростом концентрации выходное напряжение должно увеличиваться [81], на самом деле в диапазоне концентраций от 10 до 500 мМ наблюдалось лишь небольшое увеличение амплитуды (приблизительно на 5 мВ). Рост скорости звука с температурой в диапазоне от 25 до 40°С также был незначительным. В процессе роста культур плотность культуральной среды нередко меняется, поэтому контролировали отклик сенсора при различных концентрациях глицерина (плотности от 1 до 1,10). Изменения амплитуды и в этом случае были малы. Напротив, введение популяций бактерий или дрожжей приводило к значительно большим значениям сигнала (при изменении числа клеток от 1 до 10 в 1 мл амплитуда сигнала менялась от 20 до 50-80 мВ). Отклик сенсора линейно зависел от числа клеток (до 10 клеток/мл) и лучше отражал кривую роста, чем данные измерений проводимости культур [11]. Хотя датчик мог выдержать несколько циклов паровой стерилизации, возможность растрескивания пьезомембраны создает серьезные проблемы. Принципы, лежащие в основе метода, не совсем ясны. Более или менее уверенно можно полагать только, что сжимаемость суспензии играет большую роль, чем скорость звука и плотность [42]. [c.450]

Смотреть страницы где упоминается термин Анализ культуральных сред: [c.177] [c.46] [c.32] [c.417] [c.46] [c.223] [c.17] [c.321] [c.238] [c.23] [c.180] [c.290] [c.335] [c.123] [c.76] [c.193] [c.223] [c.537] [c.196] [c.81] [c.83] [c.112]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология